李棣華，劉俊紅，伍孝先，呂沅珊

（天津市中西醫(yī)結合急腹癥研究所藥物研究室，天津 300100）

柴胡微波輔助提取工藝研究*

李棣華，劉俊紅，伍孝先，呂沅珊

（天津市中西醫(yī)結合急腹癥研究所藥物研究室，天津 300100）

[目的]優(yōu)化微波提取柴胡有效成分的最佳工藝條件。[方法]以常規(guī)回流提取正交結果為基準，采用HPLC對柴胡皂苷成分進行監(jiān)測，優(yōu)化柴胡微波提取的各影響因素。[結果]優(yōu)選柴胡提取工藝為微波功率800W，以50%乙醇，每次8倍量，提取3次，每次20min。[結論]表明微波提取技術法的提取時間短，效率高，優(yōu)于常規(guī)回流提取方法。

柴胡；柴胡皂苷a、d；微波輔助提取

柴胡性味苦、辛、微寒，歸肝、膽經。功能和解退熱、疏肝解郁、升舉陽氣。用于邪在少陽寒熱往來，感冒高熱；肝郁氣結，脅肋疼痛，月經不調，痛經；氣虛下陷，久瀉脫肛，子宮脫垂，胃下垂等。為中醫(yī)治療少陽證的首選中藥[1]。

柴胡的化學成分復雜，柴胡皂苷a、d等三萜類皂苷為其主要活性成分，具有含量高、生理活性強的特點，藥理實驗證明柴胡皂苷具有抗炎、保肝、抗病毒、降低血中膽固醇和調節(jié)內分泌等生理活性[2-3]。目前對其提取多以滲漉、熱回流為主，但這些方法均存在提取率低、能耗高、提取時間長等缺點。而微波萃取是通過偶極子旋轉和離子傳導兩種方式里外同時加熱，具有穿透力強、受熱均勻、快速、高效的優(yōu)點。故本實驗以柴胡皂苷a、d為指標成分對柴胡的加熱回流提取和微波萃取工藝進行了比較研究，為微波技術在柴胡提取中的應用提供依據。

1 儀器和材料

SSIPC2000型高效液相色譜儀 (美國科學系統(tǒng)公司)，ORWO8S-2C型微波萃取器 (南京澳潤微波科技有限公司)，十萬分之一電子天平(Sartorius BP211)。柴胡皂苷 a對照品（批號：110777-200404）、柴胡皂苷 d對照品（批號：110778-200505）購自中國藥品生物制品檢定所；甲醇為色譜純，水為雙蒸水，其余試劑均為分析純。柴胡飲片購自河北省安國市隆聯(lián)中藥飲片有限公司（產地山西），由天津中醫(yī)藥大學黃石渠教授鑒定為傘形科柴胡（Bupleurum chinenseDC.）的干燥根。

2 方法與結果

2.1 HPLC法測定柴胡皂苷

2.1.1色譜條件[4]色譜柱：TEDAChrom C18（4.6mm×250mm，5μm）；檢測波長：210 nm；流速：1.0mL/min；柱溫：35℃；流動相：A相為乙腈，B相為水，線性梯度洗脫 0～5 min，25%～30%A；5～20 min，30%～40%A；20～35 min，40%～60%A；35～38 min，60%～62%A；38～43 min，62%～25%A；43～48 min，25%～25%A。

2.1.2 對照品溶液的制備 稱取柴胡皂苷a、d各4m g，精密稱定，置于5mL容量瓶中，加甲醇使其溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

2.2 標準曲線繪制 分別精密吸取上述對照品溶液 1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0 μL 進樣測定，分別以兩種對照品質量為縱坐標，以峰面積為橫坐標值進行線性回歸，得兩種對照品的回歸方程為：柴胡皂苷 a：Y贊=5.41833×10-6X-0.332706，r=0.999 1；柴胡皂苷 d：Y贊=5.268 9×10-6X-0.337 852，r=0.999 1。結果表明，柴胡皂苷a、柴胡皂苷d分別在0.830～16.60μg、0.862～17.24μg范圍內具有良好的線性關系。

2.3 供試品溶液的制備 取提取液適量，揮干，殘渣用2%氫氧化鉀正丁醇飽和水溶液20mL轉移至分液漏斗內，再用水飽和正丁醇萃取3次，每次20mL，合并正丁醇液，揮干，用甲醇轉移至5mL容量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 樣品測定 分別吸取上述對照品溶液、供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，測定。

2.5 柴胡常規(guī)回流提取工藝研究 柴胡常規(guī)回流提取正交實驗設計：以柴胡皂苷a、柴胡皂苷d含量為指標，選定乙醇濃度、加醇量、提取時間、提取次數4個因素，每個因素分別設計3水平，選用L9（34）因素水平表進行正交實驗，方差分析結果表明，乙醇濃度、加醇量、提取時間、提取次數均差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），同時考慮節(jié)約能源、時間等因素，故確定柴胡皂苷提取工藝為：稱取柴胡藥材適量，加8倍量50%乙醇，90℃水浴回流提取3次，每次1 h。用同一批藥材進行驗證實驗，分別按確定工藝條件進行3次實驗，柴胡皂苷a、柴胡皂苷d總量結果分別為 6.030、6.033、6.081mg/g，平均值6.048mg/g。

3 柴胡微波提取工藝研究

以常規(guī)回流提取篩選的正交結果為準，加熱回流提取與微波提取對溶媒的要求是一致的，故選用50%乙醇做溶媒，對微波提取相關因素進行考察。

3.1 提取次數比較 稱取柴胡飲片125 g，各加8倍量50%乙醇，微波輔助提取3次，每次20min，微波功率800W。3次提取液分別過濾，供試品溶液的制備同回流提取項下操作，按色譜條件進行HPLC測定，結果提取次數分別為1、2、3次時，柴胡皂苷a、d含量分別為3.703、5.322、5.983mg/g。結果表明提取3次時效果較好。

3.2 提取時間比較 稱取柴胡飲片125 g，各加8倍量50%乙醇，微波輔助提取3次，提取時間設為3個水平，微波功率800W。3次提取液過濾，合并，供試品溶液的制備同回流提取項下操作，按色譜條件進行HPLC測定，結果提取時間分別為10、20、30min時，柴胡皂苷 a、d 含量分別為 5.441、6.032、6.313mg/g。結果表明提取30min時效果較好。

3.3 加醇量比較 稱取柴胡飲片125 g，分別加6、8倍量50%乙醇，微波輔助提取3次，每次30min，微波功率800W。3次提取液過濾，合并，供試品溶液的制備同回流提取項下操作，按色譜條件進行HPLC測定，結果加醇量分別為6、8倍時，柴胡皂苷a、d含量分別為6.062、6.313mg/g。結果表明加8倍量時效果較好。

故柴胡皂苷微波提取工藝確定為：稱取柴胡藥材適量，加8倍量50%乙醇，微波功率800W，溫度不高于80℃，提取3次，每次30min。（注：微波提取時間為微波作用時間；常規(guī)提取時間為乙醇沸騰時開始記時。）

4 微波輔助提取與回流提取的比較

將微波輔助提取工藝與加熱回流提取工藝數據進行對比，結果見表1，色譜圖見圖1。

表1 微波輔助提取與回流提取結果對比Tab.1 Comparison of the resultsofm icrowave-assisted extraction and backflow extraction

由表1可以看出，微波提取在提取時間方面優(yōu)于常規(guī)回流提取，其他方面相當。就提取時間而言，可節(jié)省時間50%～70%。而且，在此色譜條件下，微波提取與回流提取指紋色譜峰基本一致，微波提取不影響其有效成分的性質。微波提取90min轉移率達到95%以上，但提取60min轉移率可達到91.92%與常規(guī)回流提取率相當，同時考慮到進一步節(jié)約時間，故最終確定微波提取時間為20min，其他條件不變。

5 討論

微波作用原理具有獨特性，從本實驗結果可以看出，微波提取在節(jié)省時間、節(jié)約能源、環(huán)保等方面具有明顯優(yōu)勢，順應時代發(fā)展。

為了驗證微波提取與常規(guī)回流提取的區(qū)別，筆者比較了兩種提取方法的HPLC指紋圖譜峰，5個特征峰一致。此外，還用此兩種提取方法制備的提取液進行了大鼠利膽作用的藥效實驗研究[5]，結果顯示兩種方法的柴胡提取液均能不同程度地增加大鼠膽汁流量,并能明顯增加大鼠膽汁膽紅素的分泌,但以微波提取的柴胡提取液作用更為明顯，進一步說明微波技術在柴胡提取中的可行性。

[1]張云娜.從少陽樞機淺析小柴胡湯在三陽病中的應用[J].天津中醫(yī)藥大學學報，2007，26（1）：42.

[2]梁 云，崔若蘭.柴胡皂苷及其同系物抗眼和免疫功能的研究進展[J].中國中西醫(yī)結合雜志，1998，18（7）：446-447.

[3]陳 爽，賁長恩，楊美娟，等.柴胡皂苷對肝細胞增殖及基質合成的實驗研究[J].中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志，1999，5（5）：21-23.

[4]肖 蓉，王春英，張志斐，等.河北道地藥材北柴胡HPLC-UV指紋圖譜研究[J].中藥材，2006，29（2）：119-123.

[5]卓玉珍，劉俊紅，李棣華，等.不同方法的柴胡提取液對大鼠的利膽作用研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2011，22（8）：1883.

Technicalstudy onm icrowave-assisted extraction from Radix Bupleuri

LIDi-hua，LIU Jun-hong，WUXiao-xian，LVYuan-shan
（DepartmentofMedicalResearch,Tianjin Instituteof Acute AbolominalDiseasesof Integrated TraditionalChineseandWesten Medicine，Tianjin 300100，Ch ina）

[Objective]Tooptimize the technological conditions for theexaction ofeffective compounds from Bupleurum Chinese DC.by microwave-assisted art.[Methods]Taking the resultsof the routine backflow extraction optimized by an orthogonal testas the standard and using HPLC formonitoring the contentsofsaikosaponin the influence factors formicrowave-assisting extraction from Radix Bulpleuri were optimized.[Results]The optimized extractionsconditionswere:to set themicrowave power rate at800W;to exact three timeswith eight timesvolume ofethylalcohol for20min each time.[Conclusion]The techniquewithmicrowave extraction isbetter than themethod ofbackflow extractionwith high efficiency and shortextraction time.

Bupleurum Chinese DC.；saikosaponin a、d； microwave-assisted extraction

R284.2

A

1672-1519（2012）03-0289-03

天津市衛(wèi)生局中醫(yī)、中西醫(yī)結合科研課題（07017）。

李棣華（1978-），男，碩士，助理研究員，研究方向為中藥質量標準及制劑研究。

2012-01-09）