羅世芳

(咸寧學(xué)院附屬第二醫(yī)院，湖北 咸寧 437100)

康樂鼻炎片為中西結(jié)合復(fù)方制劑，其主要的成分是蒼耳子、辛夷、麻黃等十味中藥和西藥馬來酸氯苯那敏，具有疏風(fēng)清熱、活血驅(qū)瘀、祛濕通竅等功用，主要用于外感風(fēng)邪、膽經(jīng)郁熱、脾胃濕熱而致的傷風(fēng)鼻塞、鼻窒、鼻鼽、鼻淵，臨床上主要用于治療急、慢性鼻炎，過敏性鼻炎，鼻竇炎等，系衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)(中藥成方制劑第十二冊)收載的中西藥復(fù)方片劑。馬來酸氯苯那敏在康樂鼻炎片的含量較少，且又受中藥多成分的影響，因此檢測有一定的難度。本文基于現(xiàn)代色譜技術(shù)，采用高效液相色譜法建立了馬來酸氯苯那敏的含量分析方法［1～6］，實(shí)驗(yàn)表明，該方法科學(xué)，重現(xiàn)性好，雜質(zhì)無干擾，可以用于康樂鼻炎片中馬來酸氯苯那敏的含量控制方法。

1 儀器與材料

LC-10A高效液相色譜儀(島津，日本)，SK5200H超聲波清洗機(jī)(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)，UV-2001型紫外可見分光光度計(北京創(chuàng)新通恒有限公司)。康樂鼻炎片(市售，武漢康樂藥業(yè)股份有限公司)，馬來酸氯苯那敏對照品(購于中國藥品生物制品檢定所，批號:100047-20030)，乙腈、甲醇、冰乙酸均為色譜純，十二烷基硫酸鈉為優(yōu)級純，水為重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備

取馬來酸氯苯那敏對照品適量，加甲醇制成每1ml含20μg的溶液，搖勻，即得。

2.2 供試品溶液的制備

取康樂鼻炎片10片，除去糖衣，研細(xì)，混勻，取0.5g，精密稱定，置 50ml量瓶中，加甲醇45ml，超聲處理30min，取出，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 陰性樣品溶液的制備

按部頒標(biāo)準(zhǔn)制備工藝制得不含馬來酸氯苯那敏的片劑，依照供試品溶液的制備制成陰性樣品溶液。

2.4 色譜條件

Zorbax Eclipse XDB-C18(4.5mm × 150mm，5μm);乙腈:0.5%十二烷基硫酸鈉:冰乙酸(55∶45∶0.1)為流動相;柱溫:室溫;檢測波長為 262nm。靈敏度0.20AUFS，流速1ml/min 量 20μl，理論板數(shù)按馬來酸氯苯那敏峰計算應(yīng)不低于3000。在該色譜條件下，馬來酸氯苯那敏保留時間為8.1min，對照品、樣品和陰性樣品的色譜圖分別，見圖1、2、3。

圖1 馬來酸氯苯那敏對照品色譜圖

圖2 康樂鼻炎片樣品色譜圖

圖3 未加馬來酸氯苯那敏的康樂鼻炎片樣品色譜圖

2.5 測定波長的選擇

取馬來酸氯苯那敏對照品加甲醇制成適宜的濃度，置紫外-可見分光光度儀上于200～400nm波長范圍內(nèi)掃描測定，得紫外光譜圖(圖4)，馬來酸氯苯那敏在262nm波長處有最大吸收，確定測定波長為262nm。

圖4 馬來酸氯苯那敏紫外掃描圖

2.6 提取時間的選擇

取樣品(批號080701)3份，依照含量測定方法實(shí)驗(yàn)，分別超聲提取 10、20、30min，測定含量，分別為 1.76、1.78、1.79mg/g。結(jié)果表明，超聲提取20min即提取完全，故將提取時間定為20min。

2.7 陰性對照試驗(yàn)

取不含馬來酸氯苯那敏的樣品，供試品溶液制備方法制成陰性樣品溶液，分別吸取陰性對照品溶液，樣品(批號:080701)溶液，馬來酸氯苯那敏對照品溶液，注入液相色譜儀，結(jié)果:陰性樣品對測定無干擾。

2.8 線性關(guān)系考察

取濃度為78.0μg/ml的馬來酸氯那敏對照品溶液，依次進(jìn)樣 1、2、4、6、8、10μl，記錄色譜圖，以馬來酸氯苯那敏的量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程:Y=841329X－10678(r=1.0000)，結(jié)果馬來酸氯苯那敏的進(jìn)樣量在0.073～0.73μg范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.9 精密度試驗(yàn)

取濃度為19.8μg/ml的馬來酸氯苯那敏對照品溶液，分別連續(xù)進(jìn)樣5次，進(jìn)樣量20μl，記錄峰面積，平均峰面積為314372，結(jié)果RSD為0.8%，表明儀器精密度符合要求。

2.10 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取樣品(批號:080701)，照標(biāo)準(zhǔn)正文方法制成供試品溶液，分別在 0、2、4、6、8h 進(jìn)標(biāo)一次，測定峰面積，平均峰面積為313672，RSD為1.0%(n=5)。結(jié)果表明，供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定，能保證含量測定的時間要求。

2.11 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一樣品(批號:080701)5份，按供試品溶液制備方法制備，平行制備5份供試品溶液，并進(jìn)樣測定，結(jié)果測量馬來酸氯苯那敏的平均含量為1.79mg/g，RSD=0.82%(n=5)，表明方法的重現(xiàn)性良好。

2.12 回收率試驗(yàn)

取已知含量的樣品(批號:080701，含量為1.79mg/g)5份，分別加入馬來酸氯苯那敏對照品，照標(biāo)準(zhǔn)正文含量測定方法操作，計算回收率，測得平均回收率為100.5%，RSD=1.75%，表明本法回收率良好。結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果表

2.13 樣品的測定含量測定

取3批樣品，依據(jù)供試品溶液制備方法制備樣品，測定含量。批號080901樣品含量(相當(dāng)于標(biāo)示量百分?jǐn)?shù))為87.1%，批號080902樣品含量(相當(dāng)于標(biāo)示量百分?jǐn)?shù))為95.4%，批號080901樣品含量(相當(dāng)于標(biāo)示量百分?jǐn)?shù))為93.0%。

3 討論

由于康樂鼻炎片中馬來酸氯苯那敏的含量較低，又是一種復(fù)方制劑，成分復(fù)雜，采用常規(guī)的滴定方法準(zhǔn)確度不好，而采用液相色譜法可以解決這些問題。馬來酸氯苯那敏在常用C18色譜柱中易出現(xiàn)拖尾的現(xiàn)象。如果用去堿活性色譜柱比一般的色譜柱要好。在實(shí)驗(yàn)過程中，采用十二烷基硫酸鈉比庚烷磺酸鈉的效果要好。能取得較好的分離度，也沒有雜質(zhì)峰的干擾。

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