曾四元，梁美蓉，李隆玉，劉 暉，鐘美玲，魏晚霞

(1.江西省婦幼保健院腫瘤科;2.南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江西南昌 330006)

早期宮頸鱗癌預(yù)后良好，但出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移后預(yù)后明顯降低，且一旦出現(xiàn)復(fù)發(fā)，預(yù)后極差。如何早期預(yù)測(cè)宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移并進(jìn)行預(yù)后判斷是多年來(lái)臨床共同關(guān)注的問(wèn)題。鱗狀細(xì)胞癌抗原 (squamous cell carcinoma antigen，SCCA)及人乳頭瘤病毒 (human papillomavirus，HPV)16/18型是目前宮頸癌輔助診斷中應(yīng)用較多的生物學(xué)指標(biāo)。先期研究發(fā)現(xiàn)，血清SCCA水平及盆腔淋巴結(jié)HPV 16/18感染與宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)［1］。雖然血清SCCA及盆腔淋巴結(jié)HPV 16/18在評(píng)估早期宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后判斷中有一定的價(jià)值［2－4］。但缺乏綜合分析血清SCCA和盆腔淋巴結(jié)HPV 16/18與宮頸癌患者生存狀況的報(bào)道。本研究通過(guò)對(duì)先期研究對(duì)象進(jìn)行跟蹤隨訪，探討術(shù)前血清SCCA水平、盆腔淋巴結(jié)HPV 16/18感染狀況與宮頸鱗癌患者預(yù)后的關(guān)系，以期為宮頸鱗癌預(yù)后判斷提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選擇2007年12月至2008年10月在江西省婦幼保健院腫瘤科初次接受手術(shù)治療的宮頸鱗癌病例，篩選出符合以下條件者共35例:1)術(shù)前未經(jīng)放、化療;2)術(shù)后病理確診為宮頸鱗狀細(xì)胞癌;3)在本院接受廣泛全子宮切除加盆腔淋巴結(jié)清掃術(shù):4)FIGO分期為ⅠB～ⅡA期;5)均系同一組醫(yī)師按FIGO 2004年《婦科惡性腫瘤診斷與治療指南》進(jìn)行手術(shù)。6)征得患者授權(quán)人同意后納入本研究。患者平均年齡45.2歲 (29～60歲)。采取術(shù)前血清3 mL及淋巴結(jié)石蠟組織備用。組織病理有癌轉(zhuǎn)移陽(yáng)性淋巴結(jié)7例，共16枚;陰性淋巴結(jié)共80枚。

1.2 試劑

QIAamp石蠟組織DNA提取純化試劑盒(QIAGEN公司)，HPV 16/18 PCR試劑盒(廣州達(dá)安)，SCCA ELISA試劑盒(武漢中美科技)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 石蠟包埋組織中DNA的提取純化:刮取石蠟包埋淋巴結(jié)組織3～4片(層厚5 μm)置于1.5 mL微量離心管中，加入新鮮二甲苯1 mL脫蠟，震蕩混勻，12 000 r/min離心2 min，去上層溶液?；緹o(wú)石蠟殘留后加入無(wú)水乙醇1 mL清洗，渦旋混勻，12 000 r/min離心2 min，去上清，干燥組織。按QIAamp石蠟組織DNA提取純化試劑盒的說(shuō)明書提取純化DNA。純化的DNA即用或－20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 淋巴結(jié) HPV 16/18測(cè)定:純化的DNA按HPV 16/18 PCR試劑盒定性定量，使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增儀。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線讀出數(shù)據(jù)，下限為5.0 ×101拷貝/mL。

1.3.3 雙抗體夾心酶標(biāo)免疫分析法(ELISA)測(cè)定血清SCCA水平:按 SCCA ELISA試劑盒說(shuō)明書測(cè)定血清SCCA水平，酶標(biāo)儀讀出A值，計(jì)算 SCCA滴度 (＞1.5 g/L為陽(yáng)性)。

1.4 隨訪方法

所有宮頸癌病例入院后即建立隨訪卡，具有完整的臨床、病理及隨訪資料。出院日期定為隨訪開始，隨訪截止日期為2011-08-20，生存時(shí)間按月計(jì)算。術(shù)后第1年內(nèi)隨訪每3個(gè)月1次;第2年內(nèi)隨訪每3～6個(gè)月1次;第3年后隨訪每半年1次。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料比較采用近似t檢驗(yàn)，生存率的計(jì)算采用壽命表法，生存率的比較采用log-rank檢驗(yàn)，單因素分析采用COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型。

2 結(jié)果

2.1 術(shù)前血清SCCA水平和盆腔淋巴結(jié)HPV 16/18 DNA感染狀況及二者的關(guān)系

35例宮頸鱗癌患者術(shù)前血清 SCCA水平為(2.02 ±1.87)μg/L，SCCA ＞1.5 μg/L 13 例，陽(yáng)性率 37.1%，其中2例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者 SCCA＞4.0 μg/L。盆腔淋巴結(jié)HPV 16/18陽(yáng)性7例，感染率為20.0%，DNA定量為(4.39±8.61)×107拷貝/mL。術(shù)前血清SCCA水平與盆腔淋巴結(jié)HPV 16/18陽(yáng)性感染相關(guān)(P＜0.05)。

2.2 術(shù)前血清SCCA水平及盆腔淋巴結(jié)HPV 16/18感染與宮頸鱗癌患者3年生存率之間的關(guān)系

35例宮頸鱗癌患者中位隨訪時(shí)間為36個(gè)月(12～41月)，死亡4例，無(wú)失訪病例，3年總體生存率為85.0%。其中血清SCCA陰性者和陽(yáng)性者的3年生存率分別為100%和69.2%;術(shù)后1、2和3年內(nèi)生存者血清 SCCA值分別為(2.02±1.87)、(1.99±1.93)和(1.95±1.94)μg/L。盆腔淋巴結(jié)HPV 16/18陰性者和陽(yáng)性者的3年生存率分別為96.4%和57.1%;采用Kaplan-Meier法進(jìn)行生存分析，經(jīng)log-rank檢驗(yàn)后顯示:血清SCCA及盆腔淋巴結(jié)HPV 16/18陰性患者的3年生存率明顯優(yōu)于陽(yáng)性患者(P＜0.05)。

2.3 影響宮頸鱗癌患者預(yù)后的單因素分析

35例資料完整的宮頸鱗癌病例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血清SCCA、淋巴結(jié)HPV 16/18與宮頸癌患者的預(yù)后相關(guān)(P＜0.05)(表1)。

3 討論

長(zhǎng)期以來(lái)宮頸癌診斷主要依靠臨床癥狀、細(xì)胞學(xué)及組織病理學(xué)檢查，缺乏有效的血清腫瘤標(biāo)志物。因此，出現(xiàn)組織學(xué)證實(shí)的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)后，往往錯(cuò)失最佳治療時(shí)機(jī)，預(yù)后通常不佳。尋找有效的血清腫瘤標(biāo)志物早期預(yù)測(cè)宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移并進(jìn)行預(yù)后判斷已成為腫瘤研究的一個(gè)熱點(diǎn)。

SCCA是公認(rèn)較為可靠的宮頸癌血清標(biāo)志物。目前的研究發(fā)現(xiàn)，宮頸鱗癌患者血清SCCA水平不僅可反映病情嚴(yán)重程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，而且可能判斷有無(wú)復(fù)發(fā)及評(píng)估患者預(yù)后［5－6］。先期研究發(fā)現(xiàn)，術(shù)前SCCA水平與淋巴結(jié)HPV 16/18陽(yáng)性感染、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、宮頸間質(zhì)浸潤(rùn)深度及脈管累及相關(guān)，尤其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［1］。進(jìn)一步隨訪發(fā)現(xiàn)術(shù)后1、2和3年內(nèi)生存者血清SCCA水平呈下降趨勢(shì)，4例死亡患者術(shù)前SCCA均為陽(yáng)性，SCCA陰性患者中無(wú)一例死亡，血清SCCA陽(yáng)性患者的3年生存率明顯低于陰性患者。單因素分析結(jié)果顯示:血清SCCA水平與宮頸鱗癌患者預(yù)后密切相關(guān)。因此認(rèn)為術(shù)前SCCA水平不僅可反映淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，而且可評(píng)估宮頸癌患者預(yù)后，對(duì)針對(duì)性地制定個(gè)體化宮頸癌術(shù)后輔助治療有一定參考價(jià)值。

表1 影響宮頸鱗癌患者預(yù)后的單因素分析Table 1 Univariate analysis of factors influencing prognosis of patients with cervical squamous cell carcinoma

HPV 16/18是宮頸癌發(fā)生的主要致病因子，檢出率高達(dá)70% ～76%［7］。臨床中發(fā)現(xiàn)部分臨床分期較早、淋巴結(jié)組織學(xué)陰性的病例預(yù)后較差，提示可能有組織學(xué)未能發(fā)現(xiàn)的微轉(zhuǎn)移。已有研究證實(shí)，存在微轉(zhuǎn)移的腫瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)增加、整體生存率下降、預(yù)后不良［8］。本研究先期結(jié)果表明，HPV 16/18陽(yáng)性率在組織學(xué)陽(yáng)性淋巴結(jié)中明顯高于陰性淋巴結(jié)者;1例陰性淋巴結(jié)患者HPV 16/18的檢出可能提示微轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果顯示，盆腔淋巴結(jié)HPV 16/18陽(yáng)性患者的3年生存率明顯低于陰性患者，盆腔淋巴結(jié)HPV 16/18與宮頸鱗癌患者的預(yù)后密切相關(guān)。1例盆腔淋巴結(jié)HPV 16/18陽(yáng)性、但組織學(xué)淋巴結(jié)陰性患者隨訪40個(gè)月無(wú)復(fù)發(fā)，提示盆腔淋巴結(jié)HPV 16/18感染與宮頸癌微轉(zhuǎn)移是否有關(guān)尚需擴(kuò)大樣本的進(jìn)一步研究。

結(jié)果提示，血清SCCA水平及盆腔淋巴結(jié)HPV 16/18感染狀況與宮頸鱗癌患者預(yù)后相關(guān)，可作為宮頸鱗癌預(yù)后判斷指標(biāo)。盆腔淋巴結(jié)HPV 16/18感染與宮頸癌微轉(zhuǎn)移是否有關(guān)尚需擴(kuò)大樣本的進(jìn)一步研究。

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