曲向陽

（1.美國禮來亞洲公司上海代表處，上海 200021；2.南京農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，江蘇 南京 210095）

豬回腸炎又名增生性腸炎、增生性出血性腸炎,是由胞內(nèi)勞森氏菌(Lawsonia intracellularis)感染所致的以回腸、盲腸、結(jié)腸黏膜呈腺瘤樣增生為主要特征的一種重要豬腸道疾病。該病易感染生長育肥豬、后備母豬，嚴重影響豬只飼料效率與生長速度，對養(yǎng)豬業(yè)的經(jīng)濟效益影響嚴重[1]。據(jù)Jensen報道，在美國每頭回腸炎感染豬的經(jīng)濟損失至少1.531美元[2]。

依據(jù)臨床癥狀差異，本病可分為急性型、慢性型與亞臨床型。急性型多發(fā)于后備母豬及17周齡以上的育肥豬，健康豬群似乎更易感染急性型回腸炎[3]。常表現(xiàn)為出血性下?。▓D1），甚至突然死亡。慢性型與亞臨床型回腸、盲腸與結(jié)腸增厚（圖3），糞便無成型（圖4），但無典型臨床癥狀，2周齡～20周齡的豬只均易感染[4]，無法依據(jù)臨床癥狀進行診斷。

本試驗采用LawsoniaFIRSTtestTM回腸炎診斷試劑盒對該豬場糞便樣品中的胞內(nèi)勞森氏菌進行了檢測，以期了解回腸炎的感染狀態(tài)與感染時間點，為該病的精準化策略性用藥預防或疫苗免疫提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

2011年12月，在江蘇省某規(guī)?；i場隨機采集特定周齡的新鮮松軟或水泥樣的糞便樣品，各3 g。樣品主要來自于4、6、8、10、12、14周齡的保育豬、后備母豬與經(jīng)產(chǎn)母豬，每階段作2～3份重復，采樣后立即檢測。

1.2 檢測試劑

圖1 后備母豬急性出血性下痢

圖2 回腸、盲腸等部位出血

圖3 慢性回腸炎，腸黏膜增厚，呈腦回狀

圖4 慢性回腸炎導致糞便松軟

本檢測采用德國Microcoat公司開發(fā)的LawsoniaFIRSTtestTM回腸炎現(xiàn)場診斷試劑盒（免疫磁珠法，美國禮來公司擁有專利權(quán)）。其原理與雙抗體夾心ELISA類似。以包被在磁珠上的多克隆抗體捕捉糞便中的胞內(nèi)勞森氏菌，然后通過連接在多克隆抗體上的過氧化物酶（POD）催化TMB顯色，通過顏色變化，對胞內(nèi)勞森氏菌的感染狀態(tài)進行定性檢測。通過對比顏色變化，對胞內(nèi)勞森氏菌的感染狀態(tài)進行半定量檢測。（圖5）。

圖5 FIRSTtestTM 試劑盒作用原理圖

1.3 檢測方法

依照FIRSTtestTM試劑盒說明書進行檢測。①樣品稀釋與 沉淀：將1 g糞便樣品與5 mL樣品稀釋緩沖液在樣品收集管中混合，搖勻后，放在試管架上靜置5 min；②樣品轉(zhuǎn)移：分別使用不同的移液管吸取0.5 mL的上清液至分析管（管內(nèi)含有勞森氏菌多克隆抗體包被的免疫磁珠）中，設立陽性對照組（陽性對照為0.5 mL勞森氏菌菌液），搖勻后，將分析管放在試管架上孵育30 min；③磁珠分離與洗滌：將分析管轉(zhuǎn)移至磁體架上進行磁頭分離，然后洗滌2次；④加入抗體－過氧化物酶共軛物：分別向分析管中加入0.5 mL的抗體－過氧化物酶共軛物，搖勻后，將分析管放置在試管架上孵育20 min；⑤磁珠分離與洗滌：同步驟③；⑥加入TMB顯色：分別向分析管中加入0.5 mL的TMB底物顯色液，并設立陰性對照（陰性對照管內(nèi)含有勞森氏菌多克隆抗體包被的免疫磁珠），搖勻后，孵育7 min；⑦結(jié)果判讀：將分析管放置在磁鐵架上，記錄顏色變化，陽性呈藍色，陰性液體透明。

2 檢測結(jié)果

FIRSTtestTM是一種定性檢測勞森氏菌的方法，通過待檢樣品與陽性對照、陰性對照間的顏色對比（圖6），將回腸炎在該場的感染狀況匯總于表1。從檢測結(jié)果可發(fā)現(xiàn)：4周齡與6周齡各有1份樣品（33%）呈陽性，8周齡的樣品胞內(nèi)勞森氏菌檢測呈陰性，而自10周齡保育仔豬起至14周齡的生長豬及母豬的胞內(nèi)勞森氏菌檢測均呈陽性，特別是14周齡與母豬樣品呈強陽性。

3 分析與討論

目前回腸炎的主要診斷方法包括利用PCR、免疫過氧化酶法檢測糞便樣品中的勞森氏菌或采用ELISA、IFA等檢測胞內(nèi)勞森菌抗體[5]。本檢測采用的FIRSTtestTM檢測可在豬場現(xiàn)場快速檢測糞便中是否含有感染劑量的勞森氏菌，適用于規(guī)?；i場回腸炎感染狀態(tài)與防控效果的自我評估。

回腸炎多發(fā)生于生長育肥階段，但各場間感染時間存在差異[6]，所檢樣品來自于4周齡～14周齡的保育豬、生長豬、后備母豬及經(jīng)產(chǎn)母豬。本次檢測時未刻意挑選有頑固性腹瀉的糞便進行檢測。但豬群從第10周開始感染，說明該場回腸炎處于亞臨床感染狀態(tài)。

圖6 該豬場不同周齡豬糞樣中胞內(nèi)勞森氏菌的檢測結(jié)果

表1 胞內(nèi)勞森氏菌感染分布狀況

由于該場母豬已感染胞內(nèi)勞森氏菌（強陽性），母豬通過主動免疫自身可產(chǎn)生抗勞森氏菌的抗體，并通過母乳傳遞給仔豬，使仔豬特別是哺乳仔豬獲得被動免疫，抑制了胞內(nèi)勞森氏菌在哺乳仔豬腸上皮細胞內(nèi)的大量增殖。哺乳仔豬于3周齡斷奶，4周齡的糞便樣品胞內(nèi)勞森氏菌66.7%呈陰性。但斷奶后(3周齡后)，失去了母源抗體的保護。據(jù)Guedes等人[7]發(fā)現(xiàn)抗體陽性的母豬所產(chǎn)仔豬的母源抗體可持續(xù)至5周齡，可保護哺乳仔豬與保育前期豬免受勞森氏菌感染。隨著母源抗體的消退，加之保育轉(zhuǎn)群應激、環(huán)境溫度變化與衛(wèi)生消毒等生物安全措施不到位等，豬只自身抗病能力下降，促進了胞內(nèi)勞森氏菌的繁殖，并通過糞便相互傳染，特別是衛(wèi)生消毒工作不徹底時，往往造成全群帶菌。故該場自4周齡與6周齡開始部分豬只（33%）被感染并排菌。10周以后的豬及母豬勞森氏菌的感染率高達100%。14周齡保育豬與母豬的糞便樣品顏色最深（超過陽性對照的顏色），即說明14周齡以后的糞便中的胞內(nèi)勞森氏菌濃度最高，豬只感染壓力大。母豬群回腸炎感染壓力大，是回腸炎重要的傳染源。

該場保育階段使用過強力霉素，使得8周齡的仔豬樣品完全呈陰性，此時體內(nèi)沒有足夠量的抗原使機體形成主動免疫，故不能徹底地阻斷胞內(nèi)勞森氏菌在該場的傳播。10周齡時，胞內(nèi)勞森氏菌再次感染，并在14周齡時達到高峰，將嚴重影響飼料的轉(zhuǎn)化率、豬只生長速度與經(jīng)濟效益。

4 防控建議

4.1 強化科學良好的飼養(yǎng)管理與衛(wèi)生消毒工作

1)盡量降低轉(zhuǎn)群并欄時的應激，減少不良環(huán)境因素的影響，如：加強通風，避免豬舍內(nèi)溫度的波動，合理的飼養(yǎng)密度以提供足夠的飼喂空間與飲水供給。

2)在飼養(yǎng)管理上，實行全進全出，批次管理，加強清潔與消毒工作，特別是轉(zhuǎn)群后批次間的棟舍的清掃，消毒與干燥等工作。

3)加強生物安全防范。特別應避免因鳥類、工作人員及鼠類傳播病原菌。在引進新的后備母豬或公豬時，應做好隔離適應工作，在確認沒有回腸炎感染時或完成適宜的藥物干預后，尚可混群。

4.2 選擇適宜的藥物與策略性給藥方案

胞內(nèi)勞森氏菌屬于專一性的細胞內(nèi)病原菌，在藥物防控方面應注意以下3點：第一，敏感藥物及其藥動學。所選藥物應在腸道上皮細胞內(nèi)有較高藥物濃度[8],如泰樂菌素、替米考星、泰妙菌素等。第二，用藥周期。用藥周期應在14 d以上，最好可達到21 d；第三，用藥時間。在胞內(nèi)勞森氏菌感染高峰期到達之前給藥可取得良好效果。若給藥時間“太早”，豬群就無法產(chǎn)生針對胞內(nèi)勞森氏菌的主動免疫，潛在暴發(fā)急性出血性回腸炎的風險。

泰樂菌素在控制回腸炎感染時，既抑制了胞內(nèi)勞森氏菌在腸壁的大量繁殖，又不影響動物機體針對胞內(nèi)勞森氏菌形成主動免疫，停藥后能依賴機體的主動免疫進行自我保護，因此泰樂菌素目前是全球控制回腸炎的首選藥物。結(jié)合本次檢測結(jié)果，對回腸炎的策略性投藥作如下推薦：

方案一，生長育肥期:為了降低生長豬回腸炎的感染壓力，建議在10周齡～12周齡使用磷酸泰樂菌素110 mg/kg拌料，連續(xù)3周，以后每月用一周，110 mg/kg拌料，直到上市前5 d。

方案二，分娩母豬群：為了降低環(huán)境中的勞森氏菌的感染壓力及阻斷勞森氏菌由母豬傳遞給仔豬，建議在產(chǎn)前1周至產(chǎn)后2周使用磷酸泰樂菌素（110 mg/kg拌料）。

方案三，后備母豬：為防止后備母豬引種時引入胞內(nèi)勞森氏菌，后備母豬混群后造成母豬群呈持續(xù)性高感染壓力狀態(tài)，建議在后備母豬群轉(zhuǎn)入到基礎母豬群前，利用磷酸泰樂菌素（110 mg/kg拌料）連續(xù)3周。使母豬群更健康，在降低回腸炎感染的同時，也可防控支原體，萎縮性鼻炎等呼吸系統(tǒng)疾病。

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[2] Jensen M.Health management with reduced antibiotic use-experiences of a Danish pig vet[J]. Anim Biotechnol,2006,17:189-194.

[3] Winkelman N L, Dee S.Ileitis:an update[C].Comp Contin Educ,1996,18:S19-S25.

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[6] Stege H, Jensen T K, M!ller K, et al. Infection dynamics of Lawsonia intracellularis in pig herds[J]. Vet Microbiol, 2004, 104: 197-206.

[7] Guedes R M C, Gebhart C J,Armbruster G A, et al. Serologic follow-up of a repopulated swine herd after an outbreak of proliferative hemorrhagic enteropathy[J].J Vet Res,2002,66 (4):258-263.

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