宋穎，賈艷艷，丁莉坤，鹿成韜，馮智軍，宋薇，文愛(ài)東（第四軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科，西安710032）

右酮洛芬氨丁三醇（Dexketoprofen trometamol）是非甾體抗炎藥酮洛芬右旋對(duì)映體的水溶性氨丁三醇鹽。右酮洛芬氨丁三醇注射液在許多歐洲國(guó)家已廣泛應(yīng)用，其主要適應(yīng)證為嚴(yán)重急性疼痛的對(duì)癥治療，包括術(shù)后疼痛和炎癥性疼痛，如術(shù)后疼痛、骨骼-肌肉疼痛和腎絞痛。產(chǎn)品可單獨(dú)用藥，或者在控制術(shù)后疼痛必要的情況下，在阿片類治療的基礎(chǔ)上作為輔助用藥。雖然國(guó)內(nèi)、外已有關(guān)于右酮洛芬氨丁三醇人體藥動(dòng)學(xué)的研究報(bào)道，但是關(guān)于注射劑在中國(guó)人體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究較少[1～3]。本研究用液-質(zhì)聯(lián)用（LC-MS）法分別測(cè)定單劑量和多劑量給藥后健康受試者血漿中的右酮洛芬濃度，評(píng)價(jià)右酮洛芬氨丁三醇注射液在中國(guó)人群中的藥動(dòng)學(xué)特性，為在中國(guó)人群中開(kāi)展隨機(jī)、對(duì)照臨床研究的給藥方案提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

6410B型三級(jí)四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀，配有自動(dòng)進(jìn)樣器、液相色譜儀、柱溫箱、電噴霧電離離子源（ESI）及Agilent MassHunterWorkstation Software數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（美國(guó)Agilent公司）；AB135-S十萬(wàn)分之一天平（瑞士梅特勒公司）；XW 80A渦旋混合器（上海滬西分析儀器廠）；TGL16M型冷凍離心機(jī)（長(zhǎng)沙英泰儀器有限公司）。

1.2 試藥

右酮洛芬氨丁三醇注射液（德國(guó)Berlin-Chemie AG（Menarini Group），規(guī)格：50 mg∶2 mL，批號(hào)：02056）；右酮洛芬氨丁三醇對(duì)照品（德國(guó)Berlin-Chemie AG（Menarini Group），含量：100.0%）；內(nèi)標(biāo)：非布司他對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100650-200301）；甲醇為色譜純，醋酸銨、乙酸為分析純，試驗(yàn)用水為去離子水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜及質(zhì)譜條件

色譜條件：色譜柱：Diamonsil C18（2）（150 mm×2.1 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（水中含5 mmol·L－1醋酸銨、0.05%乙酸，68∶32）；流速：0.35 mL·min－1；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：8 μL。

質(zhì)譜條件：采用電噴霧離子源（ESI），負(fù)離子選擇性離子檢測(cè)（SIM）模式；右酮洛芬：[M-H]－離子，m/z253.1；內(nèi)標(biāo)（非布司他）：[M-H]－離子，m/z315.1；離子源參數(shù)：干燥氣溫度：350 ℃；干燥氣流速：12 L·min－1；噴霧氣壓力：40 psi；毛細(xì)管電壓：4 000 V。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

準(zhǔn)確稱取右酮洛芬氨丁三醇對(duì)照品，用甲醇配制成濃度為206.6、103.3、51.65、20.66、2.066、0.516 5 μg·mL－1的右酮洛芬標(biāo)準(zhǔn)溶液。另準(zhǔn)確稱取非布司他對(duì)照品，用甲醇溶解配成濃度為20.12 μg·mL－1的內(nèi)標(biāo)溶液。

2.3 血漿樣品的處理

于1.5 mL離心管中精密加入血漿樣品200 μL、內(nèi)標(biāo)（20.12 μg·mL－1非布司他）溶液25 μL，旋渦混勻。加入甲醇600 μL，渦旋混勻5 min，靜置5 min，于15 600 r·min－1離心10 min。吸取上清液轉(zhuǎn)移至自動(dòng)進(jìn)樣器樣品瓶，進(jìn)行LC-MS分析。

2.4 方法學(xué)驗(yàn)證

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：在空白血漿中分別加入右酮洛芬氨丁三醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制成相當(dāng)于血藥濃度為0.010 33、0.051 65、0.206 6、0.826 4、2.066、5.165、10.33、20.66 μg·mL－1的含藥血漿，按“2.3”項(xiàng)下方法操作，并進(jìn)行LC-MS分析，記錄色譜。計(jì)算右酮洛芬峰面積（As）和內(nèi)標(biāo)峰面積（Ai）的比值f（f＝As/Ai）。以峰面積比值（f）對(duì)血藥濃度（x）作權(quán)重回歸計(jì)算，結(jié)果右酮洛芬的線性方程為f＝－0.000 548 1x×0.206 2（r＝0.997 8，權(quán)重系數(shù)w＝1/c2）。結(jié)果表明，右酮洛芬血藥濃度在0.010 33～20.66 μg·mL－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，定量下限為0.010 33 μg·mL－1。

圖1 LC-MS圖譜A.空白血漿；B.右酮洛芬對(duì)照品；C.內(nèi)標(biāo)；D.空白血漿+右酮洛芬對(duì)照品+內(nèi)標(biāo)；E.0.17 h血漿樣品Fig 1 LC-MS ChromatogramsA.blank plasma；B.dexketoprofen control；C.IS；D.blank plasma+dexketoprofen control+IS；E.plasma sample at 0.17 h

2.4.2 專屬性：在選定的液-質(zhì)條件下，各組分不受血漿中內(nèi)源性物質(zhì)的干擾。右酮洛芬的出峰時(shí)間在2.9 min左右，內(nèi)標(biāo)的出峰時(shí)間在3.6 min左右，LC-MS圖譜見(jiàn)圖1。

2.4.3 精密度和準(zhǔn)確度：分別配制右酮洛芬低、中、高（0.025 83、1.033、16.53 g·mL－1）3種濃度的標(biāo)準(zhǔn)含藥血漿，每個(gè)濃度平行配制5份，按“2.3”項(xiàng)下方法操作。依上述方法，連續(xù)3 d測(cè)定，每日隨行一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，記錄色譜圖。計(jì)算右酮洛芬面積As和內(nèi)標(biāo)峰面積Ai的比值f，代入隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線方程求得樣品的實(shí)測(cè)濃度，考察日內(nèi)和日間精密度。采用第1天的數(shù)據(jù)，將f代入隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計(jì)算所得濃度和加入濃度的比值即為準(zhǔn)確度（相對(duì)回收率），結(jié)果詳見(jiàn)表1。

表1 精密度及回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝5）Tab 1Results of precision and recovery tests（n＝5）

2.4.4 提取回收率：分別取低、中、高3種濃度的右酮洛芬血漿樣本各3份，以經(jīng)過(guò)提取所得的色譜峰面積與標(biāo)準(zhǔn)溶液未經(jīng)提取直接進(jìn)樣所得的色譜峰面積之比，來(lái)考察樣品的提取回收率，結(jié)果詳見(jiàn)表1。

2.4.5 樣品穩(wěn)定性：考察了右酮洛芬3種濃度（0.025 83、1.033、16.53 μg·mL－1）樣品分別在即刻、4.5 h后、反復(fù)凍融3次和－40℃放置49 d，進(jìn)樣分析的穩(wěn)定性、結(jié)果所有樣品的RSD均＜15%，即表明右酮洛芬血漿樣品穩(wěn)定性良好。

2.5 試驗(yàn)對(duì)象

12名健康受試者參加本項(xiàng)研究，男、女各半，年齡33～40歲，體重50～64.5 kg，無(wú)煙酒嗜好。試驗(yàn)前經(jīng)病史詢問(wèn)、體格檢查和實(shí)驗(yàn)室檢查未發(fā)現(xiàn)異常。受試者無(wú)藥物過(guò)敏史和藥物依賴史，無(wú)精神病史以及其他慢性病史，2周內(nèi)未服任何藥物。受試期間禁煙、酒、茶及含咖啡因的飲料，統(tǒng)一清淡飲食。受試者試驗(yàn)前均簽署知情同意書(shū)。本試驗(yàn)經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批通過(guò)。

2.6 給藥和取樣

12名健康受試者。第1天進(jìn)行50 mg單劑量靜脈滴注的人體藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)；經(jīng)過(guò)7 d清洗期，第8～10天進(jìn)行50 mg多劑量靜脈滴注的人體藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)。分別于第8、9、10天給藥前采集穩(wěn)態(tài)谷濃度血樣，第1、10天給藥前抽取空白血樣約4 mL，在靜脈滴注開(kāi)始后10、20、30、35、40、50 min及1、1.5、2、3、4、6、8、10、12 h時(shí)分別采集靜脈血約4 mL。分離血漿，置－80℃冰箱保存待測(cè)。

2.7 數(shù)據(jù)處理

采用WinNonLin 6.2軟件，根據(jù)本試驗(yàn)所測(cè)得的血藥濃度繪制藥-時(shí)曲線，選擇非房室模型，計(jì)算各個(gè)體的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。

12名受試者靜脈滴注右酮洛芬氨丁三醇注射液后，主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見(jiàn)表2（注：AUC單劑量中代表AUC0～∞，多劑量中代表AUCss），其平均藥-時(shí)曲線見(jiàn)圖2。

表2 12名健康受試者分別單劑量、多劑量給藥后右酮洛芬的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)Tab 2 Main pharmacokinetic parameters of dexketoprofen in 12 healthy volunteers after single and multiple doses administration

3 討論

本試驗(yàn)建立的LC-MS法可檢測(cè)血漿樣品中右酮洛芬的濃度。本方法快速、靈敏、專屬性強(qiáng)，可以滿足低濃度藥物測(cè)定及藥動(dòng)學(xué)研究的需要。

12名中國(guó)健康受試者靜脈滴注右酮洛芬氨丁三醇注射液后，主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)在多劑量給藥后4次可以達(dá)到穩(wěn)態(tài)，穩(wěn)態(tài)血藥濃度波動(dòng)度（DF）為6.5±0.8。與單劑量給藥相比，多劑量給藥后血漿中右酮洛芬的t1/2、tmax均無(wú)顯著性差異。CL和Vd有顯著性差異，表明多劑量給藥后CL和Vd增加，致多劑量給藥后cmax、AUC均比單劑量給藥有所降低，此結(jié)論與國(guó)外報(bào)道相一致[2]。蓄積常數(shù)計(jì)算[4，5]結(jié)果表明在多劑量給藥過(guò)程中，右酮洛芬在健康受試者體內(nèi)無(wú)明顯蓄積現(xiàn)象。

圖2 12名受試者單劑量給藥后血漿中右酮洛芬的平均藥-時(shí)曲線Fig 2 Mean plasma concentration-time curves of dexketoprofen in 12 healthy volunteers after a single dose administration

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