一種具有抑制細(xì)胞增殖的薤白多糖的分離及性質(zhì)

張占軍，王富花，曾曉雄

（1.揚(yáng)州環(huán)境資源職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇揚(yáng)州 225127；2.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院，江蘇南京 210095；3.揚(yáng)州工業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇揚(yáng)州 225127）

多糖廣泛存在于植物、微生物（真菌和細(xì)菌）、藻類(lèi)和動(dòng)物體。目前多糖已成為天然藥物及保健品研發(fā)中的重要組成部分，國(guó)外多數(shù)制藥公司都有從事糖類(lèi)藥物的研發(fā)。研究發(fā)現(xiàn)多糖具有抗氧化，抗腫瘤，抗凝血及免疫調(diào)節(jié)等多種功能。我國(guó)也十分重視多糖和糖復(fù)合物的研究工作，如國(guó)家基金委2011項(xiàng)目指南將扶持和鼓勵(lì)多糖和糖復(fù)合物的研究列入生命科學(xué)重點(diǎn)資助方向。薤白（Allium macrostemonBunge）為衛(wèi)生部2002年公布的87種藥食兩用植物之一，薤白別名野蔥、野白頭、小根蒜等，為百合科蔥屬多年生草本植物，廣泛分布于中國(guó)、日本和韓國(guó)等國(guó)的平原地區(qū)，多食用，其干燥鱗莖也可入藥，藥用薤白為植物小根蒜A.macrostemonBge.或薤Allium chinensisG.Don的干燥鱗莖[1]。薤白味辛、苦，性溫，無(wú)毒，具有理氣、寬胸、通陽(yáng)、散結(jié)之功效，中醫(yī)長(zhǎng)期用于治療胸悶刺痛、瀉痢后重、肺氣喘急等疾病[2]。目前有關(guān)薤白多糖的研究主要集中在國(guó)內(nèi)，夏新奎等[3-6]對(duì)薤白多糖進(jìn)行了分離純化及體外抗氧化活性研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其中堿洗級(jí)分具有較高的清除OH·作用。另外杜敏華等[7-8]對(duì)新鮮小根蒜多糖進(jìn)行了提取純化及對(duì)單糖組分進(jìn)行了鑒定，確定了其單糖組分主要為果糖和葡萄糖。除此以外有關(guān)薤白多糖的研究未見(jiàn)任何文獻(xiàn)報(bào)道。本工作擬利用分步醇沉法，通過(guò)提取分離純化得到低分子量的薤白多糖，應(yīng)用苯酚-硫酸法、考馬斯亮藍(lán)法、硫酸-間羥聯(lián)苯法、氯化鋇-明膠法、高效液相凝膠滲透色譜法、紅外及紫外光譜法對(duì)其理化性質(zhì)進(jìn)行研究，并對(duì)其抑制腫瘤細(xì)胞BGC-823的增殖活性進(jìn)行研究，有望為薤白的臨床使用及保健性食品的開(kāi)發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

薤白：安徽慧隆中藥飲片有限公司提供，產(chǎn)地江蘇，經(jīng)南京農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院郭巧生教授鑒定為百合科蔥屬植物薤白Allium macrostemonBge.的干燥鱗莖；DEAE-纖維素-52凝膠與Sephadex G-100、噻唑藍(lán)（MTT）：Sigma公司。

1.2 儀器與設(shè)備

HP 1100高效液相色譜系統(tǒng)、6890N氣相色譜儀：美國(guó)Agilent公司；IR 200傅里葉紅外光譜儀：美國(guó)Nicolet公司；Alpha 1-2型冷凍干燥機(jī)：英國(guó)LABCONCO公司。

1.3 方法

1.3.1 薤白多糖的分步醇沉

取薤白鱗莖189.0 g，經(jīng)烘箱80℃烘干，粉碎后過(guò)篩（孔篩0.5 mm），置圓底燒瓶中，同時(shí)加入3倍量石油醚電熱套加熱回流脫脂3 h，55℃烘干后用80%（體積百分比濃度，下同）乙醇回流3 h，以除去部分色素及低聚糖，揮干乙醇后粉碎，得經(jīng)預(yù)處理的薤白粉末149.6 g；按照已得出的優(yōu)化條件，在經(jīng)預(yù)處理的薤白粉末中加入12倍體積蒸餾水，87℃浸提100 min，重復(fù)提取3次，合并提取液并濃縮，濃縮液加乙醇至終濃度為40%，5 000 r/min離心10 min，凍干得粗多糖AMP40及上清液；將以上上清液濃縮至無(wú)醇后，加乙醇至終濃度為60%，離心凍干得粗多糖AMP60及上清液；將該上清液濃縮至無(wú)醇后，加乙醇至乙醇終濃度為80%，離心棄去上清液，凍干得粗多糖AMP80。

1.3.2 薤白粗多糖AMP80的分離純化

1.3.2.1 薤白多糖的DEAE-52纖維素柱色譜

按照Qiao等[9]報(bào)道的方法稍作修改，即采用DEAE-52-纖維素交換柱色譜法對(duì)薤白粗多糖進(jìn)行初步分離純化，即將經(jīng)預(yù)處理的DEAE-纖維素濕法裝柱（2.6×30 cm），柱子裝好后依次用3倍柱體積的蒸餾水、2倍柱體積0.5 mol/L的NaCl和2倍柱體積的蒸餾水進(jìn)行平衡，備用。將薤白多糖AMP80樣品裝入透析袋，蒸餾水透析48 h后凍干得AMP80T。取AMP80T約200 mg用蒸餾水溶解后上樣，分別用蒸餾水，0.1、0.3、0.5 mol/L的NaCl進(jìn)行洗脫，流速1.0 mL/min，分步收集流分，根據(jù)苯酚-硫酸法顯色反應(yīng)結(jié)果合并相同餾分。各級(jí)分濃縮，裝入透析袋，蒸餾水透析48 h，冷凍干燥即可得多糖DEAE-52純化產(chǎn)物。同時(shí)以收集的管數(shù)為橫坐標(biāo)、吸光值為縱坐標(biāo)繪制DEAE-52-纖維素色譜柱洗脫曲線。

1.3.2.2 薤白多糖的葡聚糖凝膠色譜法純化

經(jīng)DEAE-52纖維素初步純化的多糖樣品用葡聚糖凝膠Sephadex色譜柱法進(jìn)行進(jìn)一步純化，分別稱(chēng)取經(jīng)DEAE-52纖維素初步純化的各多糖組分約20 mg，溶于2 mL去離子水中（如不溶，可適當(dāng)加熱），濕法上樣于Sephadex G-100層析柱（2.6×60 cm）。用去離子水洗脫，流速0.50 mL/min，分步收集器收集（10 min/管）。硫酸-苯酚法檢測(cè)各收集管中多糖含量（490 nm處吸收值），同時(shí)以收集的管數(shù)為橫坐標(biāo)、吸光值為縱坐標(biāo)繪制葡聚糖Sephadex G-100色譜柱洗脫曲線。

1.3.3 薤白多糖的基本理化性質(zhì)分析

1.3.3.1 總糖含量測(cè)定

采用苯酚-硫酸法[10]測(cè)定總糖含量。

1.3.3.2 蛋白質(zhì)含量測(cè)定

多糖樣品中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定，采用Bradford[11]報(bào)道的考馬斯亮藍(lán)法并略作修改。即配制適當(dāng)濃度的樣品溶液，準(zhǔn)確吸取1.0 mL，加考馬斯亮藍(lán)G-250液5.0 mL，混勻，2 min后測(cè)595 nm波長(zhǎng)的吸光值。該法靈敏度高、操作簡(jiǎn)便，是一種常用的微量蛋白質(zhì)快速測(cè)定方法。

1.3.3.3 糖醛酸含量測(cè)定

多糖樣品中糖醛酸含量的測(cè)定，采用Blumenkrantz等[12]報(bào)道的硫酸-間羥聯(lián)苯法略作修改。即取多糖溶液0.25 mL，冰浴中冷卻后各管加上述四硼酸鈉-濃硫酸溶液1.5 mL，旋渦混合器混勻，沸水浴中加熱5 min，冰浴冷卻至室溫。各管再加0.15%間羥聯(lián)苯溶液0.025 mL，混勻，于分光光度計(jì)520 nm處測(cè)吸光值。根據(jù)葡萄糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)曲線和多糖樣品的吸光值計(jì)算出多糖樣品中糖醛酸含量。

1.3.3.4 硫酸基含量測(cè)定

多糖樣品中硫酸基含量的測(cè)定，參照Dodgson等[13]報(bào)道的氯化鋇－明膠比色法并略作修改。即稱(chēng)取多糖樣品約10 mg，加1 mL鹽酸溶液（1 mol/L），密封試管，于恒溫干燥箱中100℃水解6 h。冷卻后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器40℃旋轉(zhuǎn)蒸干，殘?jiān)? mL蒸餾水溶解。取水解液0.2mL，加蒸餾水0.8mL，再加8%三氯乙酸溶液0.7 mL、0.5%氯化鋇明膠溶液0.5 mL，混勻，冷卻，15 min后測(cè)360 nm波長(zhǎng)的吸光值（A1）。另取一份水解液0.2 mL，加蒸餾水0.8 mL，再加8%三氯乙酸溶液0.7 mL、0.5%明膠溶液0.5 mL，混勻，冷卻，15 min后測(cè)360 nm波長(zhǎng)的吸光值（A2）。用以消除水解液中所含紫外物質(zhì)的干擾。根據(jù)硫酸鉀標(biāo)準(zhǔn)曲線和兩次反應(yīng)體系的吸光值之差（A1－A2）計(jì)算多糖樣品中硫酸基的含量。

1.3.3.5 純度鑒定及相對(duì)分子質(zhì)量測(cè)定

多糖樣品的純度鑒定和相對(duì)分子質(zhì)量測(cè)定，參照Alsop等[14]以及Roy等[15]報(bào)道的高效液相凝膠滲透色譜法（HPGPC）稍作修改。

1）色譜條件

Agilent 1100 series高效液相色譜及示差檢測(cè)器；TSK－Gel G3000 SWxl色譜柱 （7.5×300 mm，Tosoh Corp.，Tokyo，Japan）；流動(dòng)相：含 0.1 mol/L Na2SO4的0.01 mol/L 磷酸鹽緩沖液（pH6.8）；流速：0.70 mL/min；進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：25 °C。

2）分子量－保留時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精確稱(chēng)取不同分子量普魯蘭多糖P－82系列的標(biāo)準(zhǔn)樣品（0.59～78.8×104u），用流動(dòng)相配制成濃度約為1.5 mg/mL的分子量標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液，經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾后，按以上色譜條件依次進(jìn)樣，記錄相應(yīng)的保留時(shí)間（retention time，tR），然后以分子量對(duì)數(shù)（logMw）為縱坐標(biāo)，保留時(shí)間為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸得出相應(yīng)線性方程。

3）多糖分子量測(cè)定

將待測(cè)多糖同法配制成濃度為1.5 mg/mL的溶液，經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾，在相同條件下進(jìn)行高效液相色譜分析，獲得各多糖HPGPC圖譜，并記錄樣品色譜圖的保留時(shí)間tR值。根據(jù)多糖分子量標(biāo)準(zhǔn)曲線和多糖樣品在色譜圖上的保留時(shí)間可計(jì)算出多糖樣品的重均相對(duì)分子量；同時(shí)分析多糖樣品色譜圖上的色譜峰數(shù)目和形狀進(jìn)一步鑒定多糖的純度。

1.3.3.6 紅外光譜分析

多糖樣品的紅外光譜分析參照Wang等[16]報(bào)道的KBr壓片法，在傅立葉紅外光譜儀Nicolet IR 200（Madison，WI，USA）上進(jìn)行。稱(chēng)取2 mg左右經(jīng)P2O5干燥的多糖樣品，與已干燥的適量KBr粉末在瑪瑙研缽中充分研磨均勻，用壓片機(jī)壓成薄片，進(jìn)行紅外光譜測(cè)定，掃描范圍為 4 000 cm－1～ 500 cm－1。測(cè)定樣品前用不加多糖樣品的KBr薄片進(jìn)行背景基線掃描。

1.3.3.7 紫外光譜掃描

稱(chēng)取多糖樣品，用去離子水配成2 mg/mL的溶液，用UNICO UV－2802型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)進(jìn)行掃描，掃描波長(zhǎng)190 nm～800 nm。

1.3.4 薤白多糖樣品對(duì)BGC－823細(xì)胞增殖的抑制作用

以薤白多糖純化組分AMP80－1為實(shí)驗(yàn)樣品，對(duì)接種BGC－823的細(xì)胞培養(yǎng)板預(yù)培養(yǎng)24 h后進(jìn)行加樣處理，用排槍每孔吸去50 μL培養(yǎng)液。實(shí)驗(yàn)設(shè)正常對(duì)照組和不同濃度（25、50、100、200、400 μg/mL）的樣品組。正常對(duì)照組每孔加50 μL DMEM培養(yǎng)液；樣品組分別加入終濃度為 25、50、100、200、400 μg/ml的 AMP80－1溶液（用新鮮DMEM完全培養(yǎng)基溶解）各50 μL/孔。人胃癌細(xì)胞 BGC－823分別培養(yǎng) 24、48、72 h后，加入5 mg/mL MTT溶液10 μL，繼續(xù)培養(yǎng)4 h后，小心移去培養(yǎng)液，每孔加入100 μL DMSO溶液溶解藍(lán)紫色結(jié)晶。水平晃動(dòng)搖勻后，用酶標(biāo)儀測(cè)定550 nm波長(zhǎng)下各孔的光吸收值（Abs），檢測(cè)不同多糖樣品對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制情況，按下式計(jì)算多糖對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率：

抑制率/%=（1－Abs樣品/Abs對(duì)照）×100。

2結(jié)果與分析

2.1 薤白多糖的分步醇沉

薤白鱗莖經(jīng)干燥、粉碎、熱水提取、乙醇分步沉淀、離心，凍干，分別得到不同級(jí)分的薤白粗多糖提取物。其中80%醇沉部分（AMP80）18.5 g，得多糖粗提物AMP80的提取率為9.8%。

2.2 薤白多糖的DEAE－纖維素－52色譜法初步分離

將AMP80溶于適量蒸餾水中，加樣進(jìn)行DEAE－52纖維素柱層析，流速1 mL/min，自動(dòng)收集器分部收集，每隔10 min收集1管，苯酚－硫酸法跟蹤檢測(cè)各管糖含量，繪制洗脫曲線，如圖1所示。

2.3 初步純化組分經(jīng)Sephadex G－100的進(jìn)一步純化

對(duì)經(jīng)DEAE－52纖維素色譜柱初步純化的組分F，通過(guò)葡聚糖凝膠Sephadex G－100柱層析對(duì)其分別進(jìn)行進(jìn)一步純化得純化多糖AMP80－1，具體洗脫曲線如圖2所示。

2.4 薤白多糖的基本理化性質(zhì)

薤白粗多糖AMP80及其純化組分AMP80－1的總糖、蛋白質(zhì)、糖醛酸及硫酸基含量見(jiàn)表1。

表1 薤白多糖AMP80及AMP80-1的基本理化性質(zhì)Table 1 Preliminary characterization of AMP80 and AMP80-1

從表1可以看出，薤白多糖AMP80經(jīng)純化后，總糖含量，硫酸基含量均有上升，而糖醛酸含量有所降低，AMP80及AMP80－1均不含蛋白質(zhì)。

2.5 純度及相對(duì)分子質(zhì)量

采用高效液相凝膠滲透色譜法對(duì)薤白多糖純化組分AMP80－1的分子量進(jìn)行了測(cè)定，同時(shí)進(jìn)一步對(duì)純化多糖的均一性進(jìn)行了驗(yàn)證結(jié)果見(jiàn)圖3。

從圖3可以看出，多糖組分AMP80－1在色譜柱上顯示峰形為對(duì)稱(chēng)的單峰（由于色譜柱流速原因，存在一定的拖尾現(xiàn)象）。其保留時(shí)間分別為15.084 min。利用在一定范圍內(nèi)，多糖保留時(shí)間與其相對(duì)分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)呈線性關(guān)系，以已知分子量的普魯蘭多糖為標(biāo)準(zhǔn)品，通過(guò)高效液相凝膠滲透色譜法繪制相對(duì)分子量的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：LogMw=－4.275 3x+31.807，R2=0.998 9，運(yùn)用線性回歸方程計(jì)算，得到AMP80－1的重均相對(duì)分子質(zhì)量是8.1 ku。

2.6 薤白多糖的紅外光譜分析

采用KBr壓片法，借助于Nicolet IR 200紅外光譜儀對(duì)薤白粗多糖AMP80及其純化組分AMP80－1進(jìn)行紅外光譜分析，其結(jié)果如圖4所示。

從圖 4 可以看出，在 3 500 cm－1～3 300 cm－1范圍內(nèi)出現(xiàn)了寬而強(qiáng)的多糖羥基O－H伸縮振動(dòng)峰，其值小于 3 400 cm－1，說(shuō)明為分子間氫鍵，3 000 cm－1～2 800 cm－1范圍內(nèi)出現(xiàn)多糖的C－H強(qiáng)伸縮振動(dòng)峰，這兩個(gè)吸收峰均為多糖類(lèi)物質(zhì)的特征峰[17]。其中AMP80－1在931cm－1處和1 024 cm－1處出現(xiàn)吸收峰，這是由吡喃環(huán)的環(huán)非對(duì)稱(chēng)環(huán)伸縮振動(dòng)和吡喃糖環(huán)的C－O伸縮振動(dòng)造成的[18]。由此可以推斷，薤白多糖AMP80－1主要為吡喃環(huán)糖苷連接。

2.7 薤白多糖的紫外光譜分析

采用紫外可見(jiàn)分光光度法對(duì)薤白純化多糖AMP80-1進(jìn)行了紫外光譜掃描，結(jié)果如圖5所示。

可以看出：薤白純化多糖AMP80-1在260 nm和280 nm處均沒(méi)有吸收峰，表明其不含有核酸和蛋白質(zhì)，此結(jié)果與薤白多糖樣品中未檢出蛋白質(zhì)的測(cè)定結(jié)果一致。這也進(jìn)一步說(shuō)明AMP80-1為單純的多糖組分。

2.8 薤白多糖AMP80-1對(duì)人肺癌細(xì)胞BGC-823生長(zhǎng)的抑制作用

薤白多糖純化組分AMP80-1對(duì)人胃癌細(xì)胞BGC-823作用24、48、72 h后增殖的影響如圖6所示。

從圖6可以看出，在同一濃度下，隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)，薤白多糖AMP80-1對(duì)人胃癌細(xì)胞BGC-823生長(zhǎng)的抑制作用逐漸增強(qiáng)。作用24 h時(shí)，抑制作用較弱，濃度差別不明顯；作用48 h時(shí)，呈較明顯的濃度梯度效應(yīng)，即隨著濃度的增加抑制作用也逐漸增強(qiáng)；作用72 h時(shí)，剛開(kāi)始也呈現(xiàn)呈較明顯的濃度梯度效應(yīng)，但當(dāng)多糖濃度達(dá)到400 μg/mL時(shí)，抑制作用有所下降。

3 結(jié)論

本文對(duì)薤白鱗莖經(jīng)干燥、粉碎、熱水提取、40%，60%和80%乙醇分步沉淀、離心，凍干，得到不同80%醇沉級(jí)分AMP80，其提取率為9.8%。經(jīng)DEAE-52纖維素柱層析及葡聚糖凝膠Sephadex G-100柱層析純化后得到薤白純化多糖AMP80-1，分別采用苯酚-硫酸法、考馬斯亮藍(lán)法、硫酸-間羥聯(lián)苯法、氯化鋇-明膠法對(duì)薤白粗多糖AMP80及純化組分AMP80-1中總糖、蛋白質(zhì)、糖醛酸、硫酸基含量進(jìn)行了分析。結(jié)果表明，各多糖組分不含蛋白質(zhì)，硫酸基含量普遍較低。采用高效液相凝膠滲透色譜法對(duì)AMP80-1的均一性進(jìn)行了鑒定，同時(shí)測(cè)定了其相對(duì)分子質(zhì)量為8.1 ku。紅外光譜分析結(jié)果表明：AMP80-1主要為吡喃糖苷連接，紫外光譜分析結(jié)果表明，AMP80-1在260 nm和280 nm處均未出現(xiàn)明顯的吸收峰，說(shuō)明其不含核酸和蛋白質(zhì)，這一結(jié)果與理化分析中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定結(jié)果一致。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，薤白多糖AMP80-1對(duì)人胃癌細(xì)胞BGC-823生長(zhǎng)存在一定的抑制作用，但抑制作用相對(duì)較弱，其對(duì)人胃癌細(xì)胞的抑制作用強(qiáng)弱是否與其較低的糖醛酸、硫酸基含量及低分子量有關(guān)，還需做進(jìn)一步的研究。

：

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版一部 [M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:353

[2]《中藥辭?！肪帉徑M.中藥辭海（第四卷）[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,1998:1546

[3]夏新奎.薤白多糖的分離純化及抗氧化活性研究 [D]：咸陽(yáng)：西北農(nóng)林科技大學(xué),2007:37

[4]夏新奎,楊海霞,李純,等.薤白粗多糖提取工藝研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2006(17):4403-4405

[5]夏新奎,楊海霞,李純,等.薤白多糖的分離純化及組成分析[J].食品工業(yè)科技,2010(1):244-247

[6]夏新奎,張建新.薤白多糖抗氧化活性研究[J].信陽(yáng)農(nóng)業(yè)高等專(zhuān)科學(xué)校學(xué)報(bào),2007(4):138-139

[7]杜敏華,田龍.小根蒜多糖的提取純化及其單糖組分的鑒定[J].食品工業(yè)科技,2007(4):77-80

[8]杜敏華,田龍,惠豐立,等.小根蒜多糖的分離及其組分的初步表征[J].食品工業(yè),2007(3):25-28

[9]Qiao Deliang,Hu Bing,Gan Dan,et al.Extraction optimized by using response surface methodology,purification and preliminary characterization of polysaccharides from Hyriopsis cumingii[J].Carbohydrate polymers,2009,76(3):422-429

[10]Dubois M,Gilles K A,Hamilton J K,et al.Colorimetric method for determination of sugars and related substances[J].Analytical bio－chemistry,1956,28:350-356

[11]Bradford MM.A rapid and sensitive method for the quantization of microgram quantities of protein utilizing the principle of proteindye binding[J].Analytic biochemistry,1976,72:248-254

[12]Blumenkrantz N,Asboe-Hansen G.New Method for quantitative determinationofuronicacids[J].Analyticalbiochemistry,1973,54:484-489

[13]Dodgson K S,Price R G.A note on the determination of the ester sulfate content of sulfate polysaccharides[J].Biochemistry Journal,1962,84:106-110

[14]Alsop R M,Vlachogiannis G J.Determination of the molecularweight of clinical dextran by gel-permeation chromatography on TSK-Pw-type columns[J].Journal of chromatography,1982,246(2):227-240

[15]Roy S K,Maiti D,Mondal S,et al.Structural analysis of a polysaccharide isolated from the aqueous extract of an edible mushroom,Pleurotus sajor-caju,cultivar Black Japan[J].Carbohydrate research,2008,343(6):1108-1113

[16]Wang Zhaomei,Peng Xiao,Lee Daniel K-L,et al.Structural characterisation and immunomodulatory property of an acidic polysaccharide from mycelial culture of Cordyceps sinensis fungus Cs-HK1[J].Food chemistry,2011,125(2):637-643

[17]Kodali V P,Das S,Sen R.An exopolysaccharide from a probiotic：Biosynthesis dynamics,composition and emulsifying activity[J].Food Research International,2009,42(5/6):695-699

[18]趙力超,杜征,劉欣,等.慈姑抗性淀粉的理化特性研究[J].食品科學(xué),2010,31(17):55-59