楊 凌，張正香，莫開(kāi)林，付卓銳

(1.四川大學(xué)化工學(xué)院，四川 成都 610065;2.四川省林業(yè)科學(xué)研究院，四川 成都 610081)

杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)屬杜仲科植物，為我國(guó)特有的單科目、單屬科、單種屬植物。四川是我國(guó)杜仲發(fā)源地及主產(chǎn)區(qū)之一，省內(nèi)大部分縣市均有分布。僅廣元市旺蒼縣現(xiàn)有杜仲面積就超過(guò)2萬(wàn)hm2，早在1998年國(guó)家林業(yè)局就將旺蒼縣命名為“中國(guó)名特優(yōu)經(jīng)濟(jì)林杜仲之鄉(xiāng)”。杜仲性味甘、微辛、溫，無(wú)毒，有很多保健功能，如作強(qiáng)壯劑、安胎藥、降血壓藥等［1］。長(zhǎng)期以來(lái)，杜仲僅以皮入藥，杜仲資源綜合利用率很低。經(jīng)過(guò)國(guó)內(nèi)外學(xué)者近20多年的大量研究表明:杜仲葉與皮化學(xué)成分，特別是有效成分基本一致，且杜仲葉中綠原酸的含量還高于杜仲皮。綠原酸是一種具有利膽、抗菌、降壓、抗腫瘤、降脂、清除自由基等多種藥理作用的物質(zhì)［2］?；诰G原酸已知的藥理作用、廣泛的應(yīng)用前景及我國(guó)我省杜仲葉資源的極其豐富，將杜仲葉提取綠原酸產(chǎn)業(yè)化具有很好的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。為了解不同生境，不同樹(shù)齡，不同季節(jié)杜仲葉中綠原酸含量變化狀況，為工業(yè)化生產(chǎn)時(shí)杜仲葉的采收提供科學(xué)依據(jù)，本研究分別在四川廣元、蒲江杜仲基地采集杜仲葉樣品，進(jìn)行了不同影響因素下杜仲葉中綠原酸含量的變化特征研究［3～5］。

1 研究區(qū)域概況

研究區(qū)域主要為廣元市和蒲江縣。廣元市屬于亞熱帶濕潤(rùn)季風(fēng)氣候，年降雨量800 mm～1000 mm，日照數(shù)1300 h～1400 h，年平均氣溫17℃左右。年平均氣溫16.1℃，7月份氣溫26.1℃，1月份氣溫4.9℃。年平均降雨108 mm，日照1398.0 h，無(wú)霜期264.5 d，四季分明，適宜生物繁衍生息。蒲江屬亞熱帶濕潤(rùn)季風(fēng)氣候，冬無(wú)嚴(yán)寒，夏無(wú)酷暑，氣候溫和，雨量充沛，宜種性廣。年平均氣溫16.4℃，日照1122 h，降雨1280 mm，相對(duì)濕度84%，常年無(wú)霜期302 d。

2 材料與方法

2.1 試劑與儀器

原料:杜仲葉采自四川省蒲江縣、廣元市等幾大杜仲基地

試劑:綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)藥品生物制品檢定所);其他試劑均為AR級(jí);

儀器:紫外分光光度計(jì)(上海精密儀器廠生產(chǎn)的752N型)。

2.2 分析方法

目前，綠原酸的測(cè)定方法較多，本文采用紫外可見(jiàn)分光光度法測(cè)定杜仲葉中的綠原酸的含量。該法操作簡(jiǎn)單，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差較小，測(cè)定結(jié)果重復(fù)性好，所得數(shù)據(jù)精確［6］。

2.2.1 最大吸收峰的確定

精確稱取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品10mg，用純凈水稀釋定容于10 ml的容量瓶中，搖勻。吸取上述標(biāo)準(zhǔn)液1 ml，用0.2 M的鹽酸稀釋至10 ml，以0.2 M的鹽酸為空白，采用島津UV－251紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)于200 nm～400 nm波長(zhǎng)范圍掃描，結(jié)果表明該標(biāo)準(zhǔn)液在328 nm處有最大吸收峰，故選擇328 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

分別精密稱取0.020 g綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品，用純凈水稀釋至 50 ml，分別取 0 ml、0.4 ml、0.8 ml、1 ml、1.2 ml、1.6 ml上述標(biāo)準(zhǔn)液，放入25 ml容量瓶中，用0.2 M的鹽酸稀釋至25 ml，在328 nm處測(cè)吸光度A。

通過(guò)數(shù)據(jù)處理得回歸方程為:C=19.049x－0.0744，線性相關(guān)系數(shù)R=0.999。

綠原酸的含量(%)=(A×25×50)/(514×W)

式中 W——樣品的重量(g);

A——吸光值。

2.2.3 樣品處理及含量分析

圖1 綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

每次采集的杜仲葉樣品陰干后，準(zhǔn)確稱取5 g杜仲葉粉放入250 ml磨口瓶中，加入40%乙醇溶液100 ml后密閉，于80℃水浴加熱提取25 min，放冷后過(guò)濾，用40%乙醇20 ml洗渣，合并提取液和洗滌液。取0.2 ml于25 ml容量瓶中，用0.2 M的鹽酸稀釋至刻度。在328 nm處測(cè)定吸光度A，然后求出綠原酸的含量，同時(shí)測(cè)樣品的水分，然后換算出絕干葉中綠原酸的含量。

3 結(jié)果與分析

3.1 不同月份及樹(shù)齡杜仲葉中綠原酸含量變化實(shí)驗(yàn)結(jié)果

蒲江杜仲葉基地不同采收期不同樹(shù)齡杜仲葉中綠原酸含量分析如下:

表1 蒲江杜仲基地不同樹(shù)齡不同月份杜仲葉中綠原酸含量

圖2 蒲江基地不同樹(shù)齡杜仲葉中綠原酸含量的月變化

從表1和圖2可以看出，杜仲葉中綠原酸含量隨月份有明顯的變化，4月份初生葉中綠原酸含量較高，隨后逐漸下降，在6月～7月時(shí)含量最低，然后又逐漸增高，到10月后，又達(dá)到較高水平。從表1不同樹(shù)齡杜仲葉各月份綠原酸含量的平均值可以看出，杜仲葉中綠原酸含量隨著樹(shù)齡的增大而降低。

3.2 不同產(chǎn)地不同坡向杜仲葉中綠原酸含量變化

采自蒲江，廣元兩地的不同樹(shù)齡不同坡向杜仲葉中綠原酸含量分析數(shù)據(jù)如表2所示。

表2 不同地區(qū)不同坡向杜仲葉中綠原酸含量

從表2數(shù)據(jù)可以看出，在樹(shù)齡相同的情況下，生長(zhǎng)在陽(yáng)坡的杜仲葉中綠原酸含量明顯高于生長(zhǎng)在陰坡的杜仲葉中綠原酸含量;從同一產(chǎn)地不同樹(shù)齡杜仲葉綠原酸含量的對(duì)比可以看出，數(shù)據(jù)基本符合隨著樹(shù)齡增大綠原酸含量逐漸降低的趨勢(shì)，與表1數(shù)據(jù)所得結(jié)論一致。

3.3 不同的干燥方法對(duì)杜仲葉中綠原酸含量的影響

新鮮葉片含有大量水分，容易發(fā)霉、腐敗，導(dǎo)致其中活性物質(zhì)的大量損失。干燥可以去除新鮮葉片中的大部分水分，防止發(fā)霉、變色、蟲(chóng)蛀及有效成分的分解和破壞，保證質(zhì)量，方便存儲(chǔ)。干燥的方法通常有曬干、烘干、陰干等。因此需要通過(guò)分析不同干燥方式對(duì)杜仲葉中綠原酸含量的影響，以此來(lái)確定工業(yè)化生產(chǎn)時(shí)杜仲葉的干燥方式。

將2010年9月16日采收的蒲江基地中樹(shù)齡為兩年的杜仲葉采用曬干、陰干和直接烘干(60℃)等不同的干燥方式干燥后測(cè)定其中的綠原酸含量，其值分別是:3.76%，3.99%，3.65%，可見(jiàn)陰干的干燥方式對(duì)杜仲葉中綠原酸的破壞性較小。因此建議工業(yè)化生產(chǎn)時(shí)杜仲葉的干燥采用陰干法。

3.4 杜仲葉的存儲(chǔ)時(shí)間對(duì)綠原酸含量的影響

2010年9月采自北川的杜仲葉，當(dāng)時(shí)測(cè)綠原酸含量為2.03%，干燥后存儲(chǔ)，每3個(gè)月測(cè)其綠原酸含量，至2011年9月其綠原酸含量降至1.61%。由表3和圖3可以看出隨著杜仲葉存儲(chǔ)時(shí)間的延長(zhǎng)，綠原酸含量會(huì)不斷下降，且隨著存儲(chǔ)時(shí)間的延長(zhǎng)，綠原酸含量下降速度變緩。

表3 存儲(chǔ)時(shí)間對(duì)杜仲葉中綠原酸含量的影響

圖3 存儲(chǔ)時(shí)間對(duì)杜仲葉中綠原酸含量的影響

4 小結(jié)

4.1 季節(jié)影響

杜仲葉在不同發(fā)育階段其綠原酸含量是動(dòng)態(tài)變化的，4月初生葉含量較高，此后不斷下降，直到幼果期含量最低，隨后又逐漸上升，到10月果熟期又達(dá)到較高水平。因此，采收杜仲葉的時(shí)間應(yīng)當(dāng)以果熟期為好，此時(shí)不僅葉中綠原酸含量高，而且葉的產(chǎn)量大，也不會(huì)對(duì)杜仲樹(shù)的生長(zhǎng)產(chǎn)生影響。

4.2 樹(shù)齡影響

杜仲葉中綠原酸的含量隨樹(shù)齡不同而有所差異，基本符合隨著樹(shù)齡增大其綠原酸含量逐漸降低的趨勢(shì)。

4.3 坡向影響

在樹(shù)齡相同的情況下，生長(zhǎng)在陽(yáng)坡上的杜仲葉中綠原酸含量明顯大于生長(zhǎng)在陰坡上杜仲葉中綠原酸的含量。這一結(jié)論與杜仲喜歡陽(yáng)光充足的生長(zhǎng)習(xí)性是相符的。因此杜仲應(yīng)盡量種植于陽(yáng)光充足之地。

4.4 存儲(chǔ)時(shí)間影響

存儲(chǔ)時(shí)間對(duì)杜仲葉綠原酸含量有影響，隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，綠原酸含量明顯降低，且隨著存儲(chǔ)時(shí)間的延長(zhǎng)，綠原酸含量下降速度變緩。因此，為了減少杜仲葉采收后的綠原酸損失，應(yīng)盡量減少存儲(chǔ)時(shí)間。

4.5 干燥方式影響

杜仲葉采用不同干燥方法將對(duì)綠原酸含量有影響。陰干，曬干，直接烘干3種干燥方式中陰干對(duì)杜仲葉中綠原酸含量影響最小。因此，建議實(shí)際生產(chǎn)中采用陰干的方式干燥杜仲葉。

［1］湯詩(shī)杰，李和平，賀善安.杜仲研究的現(xiàn)狀與展望［J］.林業(yè)科技開(kāi)發(fā)，2007，21(2):8 ～12.

［2］劉軍海，任惠蘭，裘愛(ài)泳.杜仲葉中綠原酸的提取研究［J］時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2008，19(5):1184 ～1186.

［3］張萬(wàn)鋒.不同月份杜仲葉中綠原酸含量的研究.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36(19):8145 ～8146.

［4］王太霞，趙紅艷，柴志艷，等.杜仲葉生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中結(jié)構(gòu)和綠原酸含量的變化［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009，20(3):635 ～636.

［5］高致明，王太霞，喜進(jìn)安.杜仲葉在生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中化學(xué)成分含量和結(jié)構(gòu)的變化［J］.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1997，31(2):145～146.

［6］蘭小艷，張學(xué)俊.杜仲葉中綠原酸含量檢測(cè)的研究［J］.中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2010，37(4):53 ～55.