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      腸淋巴液引流對(duì)創(chuàng)傷失血性休克大鼠多器官自由基與一氧化氮的影響

      2012-09-11 11:46:22常海峰牛春雨趙自剛張玉平杜舒婷杜會(huì)博
      中國(guó)老年學(xué)雜志 2012年20期
      關(guān)鍵詞:淋巴液勻漿失血性

      常海峰 牛春雨 趙自剛 韓 瑞 張玉平 杜舒婷 杜會(huì)博

      (河北北方學(xué)院微循環(huán)研究所,河北 張家口 075029)

      研究表明,休克腸淋巴液是加重組織器官損傷的重要因素〔1~3〕,結(jié)扎腸淋巴管,可減少失血性休克以及二次打擊大鼠重要器官肺、腎、心肌、肝組織炎癥因子的產(chǎn)生,降低自由基損傷,改善組織器官功能〔4~8〕,其機(jī)制與減少腸淋巴液攜帶的多種毒性物質(zhì)回流至全身有關(guān)〔9〕;Deitch課題組也報(bào)道失血性休克復(fù)蘇后,腸系膜淋巴液可活化在體和離體的中性粒細(xì)胞,使之通透性增高,促進(jìn)急性肺損傷,如事先行腸系膜淋巴管結(jié)扎,則可防止肺損傷〔10,11〕;雖然腸淋巴管結(jié)扎阻斷了休克淋巴液回流至全身,但在臨床上的應(yīng)用值得考慮。為此,課題組采用淋巴液引流術(shù),發(fā)現(xiàn)休克淋巴液引流可提高創(chuàng)傷失血性休克(T/HS)大鼠平均動(dòng)脈血壓(MAP),減輕多個(gè)器官組織損傷的程度,改善器官功能,其機(jī)制與改善能量代謝有關(guān)〔12〕。本文進(jìn)一步從自由基與一氧化氮角度,探討休克淋巴液引流減輕T/HS大鼠多器官損傷的作用機(jī)制。

      1 材料與方法

      1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組 18只健康清潔級(jí)Wistar雄性大鼠,體重250~330 g(購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物繁殖中心),以隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)均分為:對(duì)照組(僅麻醉及手術(shù));淋巴液引流組與淋巴液回流組,后兩組復(fù)制T/HS模型,淋巴液引流組行腸淋巴液引流。

      1.2 創(chuàng)傷失血性休克模型復(fù)制 大鼠全身麻醉(肌肉注射質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%戊巴比妥鈉,劑量50 mg/kg)后,行股部無菌手術(shù),分離右側(cè)股動(dòng)脈,插三通管連接生物信號(hào)采集系統(tǒng)(成都儀器廠),記錄 MAP;分離股靜脈,注射質(zhì)量分?jǐn)?shù) 0.5%肝素(1 ml/kg,700 U/ml)全身抗凝。腹部手術(shù),分離腸淋巴管,行腸淋巴管插管、引流休克腸淋巴液至實(shí)驗(yàn)結(jié)束作為淋巴液引流組;不插管、保證淋巴液回流作為淋巴液回流組。待MAP穩(wěn)定10 min后,淋巴液引流組及回流組大鼠以ZCZ-50型自動(dòng)抽注機(jī)(浙江醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)儀器廠)自股動(dòng)脈勻速放血至40 mmHg,5 min完成,保留備回輸;以調(diào)整放血量維持低血壓90 min后,淋巴液引流組及回流組均以WZF-250F2型雙道微量注射泵(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)儀器有限公司)自股靜脈緩慢回輸放出血液及林格氏液(量為全血量),時(shí)間控制在20 min左右。對(duì)照組僅麻醉、股部、腹部手術(shù),不放血及輸液。

      1.3 標(biāo)本留取及指標(biāo)檢測(cè) 大鼠于輸液復(fù)蘇后3 h(或相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)),選擇固定位置留取腎、肝、肺、心肌組織,應(yīng)用FJ-200型高速分散均質(zhì)機(jī)(上海標(biāo)本模型廠)制備10%組織勻漿,應(yīng)用高速低溫離心機(jī)(德國(guó)科峻)以2 500 r/min離心10 min,取上清液備檢。應(yīng)用改良硫代巴比妥酸微量法、硝酸還原酶法分別檢測(cè)各器官組織勻漿丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)(南京建成)含量,組織勻漿蛋白采用考馬斯亮藍(lán)法定量。

      2 結(jié)果

      2.1 休克淋巴液引流對(duì)T/HS大鼠器官組織勻漿MDA含量的影響 淋巴液回流組的肺、腎、心肌、肝以及淋巴液引流組心肌組織勻漿的MDA含量均顯著高于假手術(shù)組(P<0.05;P<0.01);淋巴液引流組肺、腎、心肌、肝組織勻漿的MDA含量均顯著低于淋巴液回流組(P<0.01)。見表1。

      表1 休克淋巴液引流對(duì)T/HS大鼠器官組織勻漿MDA含量的影響(nmol/mg,,n=6)

      表1 休克淋巴液引流對(duì)T/HS大鼠器官組織勻漿MDA含量的影響(nmol/mg,,n=6)

      與對(duì)照組比較:1)P<0.05,2)P<0.01;與淋巴液回流組比較:3)P<0.01,下表同

      1.40±0.21 1.71±0.31 1.78±0.12 1.42±0.15淋巴液回流組2.62±0.602)2.95±0.612)3.60±0.612)3.34±0.822)淋巴液引流組1.38±0.243)1.82±0.503)1.81±0.753)2.09±0.651)3)組別 肺 腎 肝 心肌對(duì)照組

      2.2 休克淋巴液引流對(duì)T/HS大鼠器官組織勻漿NO含量的影響 淋巴液回流組的肺、腎、心肌、肝以及淋巴液引流組腎組織勻漿的NO含量均顯著高于假手術(shù)組(P<0.05;P<0.01);淋巴液引流組肺、腎、心肌、肝組織勻漿的NO含量均顯著低于淋巴液回流組(P<0.01)。見表2。

      表2 休克淋巴液引流對(duì)T/HS大鼠器官組織勻漿NO含量的影響(nmol/mg,,n=6)

      表2 休克淋巴液引流對(duì)T/HS大鼠器官組織勻漿NO含量的影響(nmol/mg,,n=6)

      1.60±0.20 2.05±0.19 1.68±0.30 1.98±0.38淋巴液回流組2.51±0.572)3.28±0.442)4.02±0.702)2.66±0.391)淋巴液引流組1.44±0.563)2.46±0.341)3)2.11±0.393)1.57±0.463)組別 肺 腎 肝 心肌對(duì)照組

      3 討論

      恢復(fù)組織灌流是氧自由基大量產(chǎn)生與釋放的過程,缺血-再灌注引起的氧自由基損傷在休克發(fā)病過程中起重要作用〔13〕。內(nèi)皮細(xì)胞是缺血-再灌注過程中氧自由基的最早來源,氧自由基激活補(bǔ)體,補(bǔ)體系統(tǒng)被激活后,補(bǔ)體活化產(chǎn)物(C3a、C3b、C5a等)可以刺激巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞釋放細(xì)胞因子和氧自由基,后者進(jìn)一步攻擊內(nèi)皮細(xì)胞而加重?fù)p傷。本研究結(jié)果表明,由于失血,T/HS大鼠在休克再灌注后即有大量自由基生成,自由基產(chǎn)物MDA在肺、腎、肝、心肌等組織的含量顯著增多,結(jié)果提示自由基損傷是T/HS大鼠多器官損傷的重要機(jī)制。淋巴液引流組將休克腸淋巴液引流至體外,減少了休克腸淋巴液中毒性物質(zhì)的腸源性移位,抑制了自由基的產(chǎn)生與釋放,降低了各組織器官的MDA含量,從而減輕自由基對(duì)各器官組織細(xì)胞的損傷作用。

      NO作為一種具有多重生理功能的介質(zhì),參與調(diào)節(jié)血管和氣管的平滑肌舒張、抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖、抑制血小板和紅細(xì)胞聚集黏附、神經(jīng)細(xì)胞間的信息傳遞、調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附分子的表達(dá)、機(jī)體免疫防御、細(xì)胞溶解等多方面發(fā)揮重要的作用。近年來的研究表明,NO在休克的病理生理過程中發(fā)揮了重要作用,在內(nèi)毒素、缺氧等刺激因素以及細(xì)胞因子的作用下,由中性粒細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等在iNOS催化作用下合成,與血管反應(yīng)性下降、器官功能衰竭及病死率等密切相關(guān)〔14〕,而NO引起炎癥反應(yīng)的瀑布效應(yīng),是引起導(dǎo)致多器官損傷的重要原因;降低NO水平可減輕MODS大鼠與失血性休克的器官損傷〔4~7,15〕。本研究結(jié)果顯示,手術(shù)創(chuàng)傷、失血、液體復(fù)蘇后,T/HS大鼠肝、腎、心肌、肺等重要器官的NO含量明顯升高,提示NO參與T/HS的器官功能障礙與損傷;休克淋巴液引流后,上述器官的NO含量下降,說明休克淋巴液引流減少了NO的合成與釋放;同時(shí),由于NO可通過刺激中性粒細(xì)胞產(chǎn)生呼吸爆發(fā)及脫顆粒,釋放氧自由基和蛋白水解酶,加重組織器官的自由基損傷,形成自由基與炎癥的級(jí)聯(lián)反應(yīng),因此休克淋巴液引流降低組織自由基損傷也有可能是通過減少NO實(shí)現(xiàn)的。

      從本文研究結(jié)果來看,休克腸淋巴液引流降低自由基損傷與NO水平的作用與腸淋巴管結(jié)扎具有相似的作用;且前期表明,引流休克腸淋巴液引起機(jī)體血容量的小量丟失并未對(duì)機(jī)體產(chǎn)生不良影響,本文為淋巴液引流術(shù)的進(jìn)一步臨床應(yīng)用奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

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      9 牛春雨,侯亞利,趙自剛,等.腸淋巴途徑在休克大鼠腸源性細(xì)菌/內(nèi)毒素移位發(fā)病學(xué)中的作用〔J〕.中國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué),2007;19(5):266-9.

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      12 牛春雨,趙自剛,張玉平,等.淋巴液引流對(duì)創(chuàng)傷失血性休克大鼠多器官損傷的影響〔J〕.中華創(chuàng)傷雜志,2010;26(12):1144-8.

      13 張春暉,侯亞利,牛春雨,等.腸缺血-再灌注致多器官損傷發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展〔J〕.中國(guó)微循環(huán),2008;12(6):389-92.

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