胡小蘭 陸長麗 紀麗蓮

轉(zhuǎn)基因水稻潛在致敏性的安全性評價

胡小蘭１，陸長麗１，紀麗蓮２

（１．揚州大學，江蘇 揚州２２５１２７；２．淮陰師范學院，江蘇 淮安２２３３００）

摘要：利用基因工程技術已經(jīng)成功培育出抗蟲、抗病、抗逆、耐除草劑和改善營養(yǎng)品質(zhì)的轉(zhuǎn)基因水稻，其安全性問題成為研究熱點。對轉(zhuǎn)基因水稻上市前進行嚴格和科學的安全性評估是當前一個亟待解決的課題，其中一項重要內(nèi)容是評估轉(zhuǎn)基因食品的致敏性。對當前國內(nèi)外水稻過敏原的研究、對轉(zhuǎn)基因食品潛在致敏性的安全性評價以及加工處理對致敏原的影響等研究進展進行了綜述。

關鍵詞：水稻過敏原；轉(zhuǎn)基因水稻；潛在致敏性；安全性評價

中圖分類號：S511；TS201.6文獻標識碼：A文章編號：0439－８114（２０12）16－3417-05

Ｔｈｅ Sａｆｅｔｙ Eｖａｌｕａｔｉｏｎ on Pｏｔｅｎｔｉａｌ Aｌｌｅｒｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ Gｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ Mｏｄｉｆｉｅｄ Rｉｃｅ

ＨＵ Ｘｉａｏ－ｌａｎ１，ＬＵ Ｃｈａｎｇ－ｌｉ１，ＪＩ Ｌｉ－ｌｉａｎ２

（１．Ｙａｎｇｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｚｈｏｕ ２２５１２７， Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ；２． Ｈｕａｉｙｉｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｈｕａｉａｎ ２２３３００，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： As ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｒｉｃｅ， ｌｉｋｅ ｉｎｓｅｃｔ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ， ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ， ｈｅｒｂｉｃｉｄｅ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ ｑｕａｌｉｔｙ， ａｎｄ ｓｏ ｏｎ， ｈａd ｂｅｅｎ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ ｇｅｎｅｔｉｃ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ， ｔｈｅ ｓｅｃｕｒｉｔｙ ｉｓｓｕｅｓ became ａ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｆｏｃｕｓ． Ｓａｆｅｔｙ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｒｉｃｅ ｐｒｅ－ｍａｒｋｅｔ has been ａ ｒｉｇｏｒｏｕｓ ａｎｄ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ｐｒｏｂｌｅｍｓ ｔｏ ｂｅ ｓｏｌｖｅｄ， ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｐａｒｔ ｏｆ ｗｈｉｃｈ was ｔｏ ａｓｓｅｓｓ ｔｈｅ ａｌｌｅｒｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｆｏｏｄｓ． Tｈｅ ｃｕｒｒｅｎｔ ｄｏｍｅｓｔｉｃ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ ｒｉｃｅ ａｌｌｅｒｇｅｎｓ， safety evaluation on ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｌｌｅｒｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｆｏｏｄ， ａｎｄ ｔｈｅ ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ａｌｌｅｒｇｅｎ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｒｅｓｅａｒｃｈ were ｒｅｖｉｅｗｅｄ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： rｉｃｅ ａｌｌｅｒｇｅｎ； ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｒｉｃｅ； ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｌｌｅｒｇｅｎｉｃｉｔｙ； ｓａｆｅｔｙ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ

水稻（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．）作為世界上最重要的糧食作物之一，培育高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)的水稻品種對世界水稻生產(chǎn)具有重要的現(xiàn)實意義。利用基因工程技術已經(jīng)成功培育出抗蟲、抗病、抗逆、耐除草劑和改善營養(yǎng)品質(zhì)的轉(zhuǎn)基因水稻。轉(zhuǎn)基因水稻給人類帶來的經(jīng)濟、社會、營養(yǎng)等方面的效益是明顯的，然而在２００５年的非法轉(zhuǎn)基因水稻污染中國大米事件發(fā)生后，對轉(zhuǎn)基因水稻生物安全問題的關注程度日益加強，加快推進轉(zhuǎn)基因水稻產(chǎn)業(yè)化進程中如何最大限度地降低其可能帶來的風險；發(fā)展和完善蛋白致敏原的檢測、鑒定和分析方法；加強對轉(zhuǎn)基因水稻的致敏性評價研究，保障其健康有序地發(fā)展，是目前面臨的關鍵問題。本文就轉(zhuǎn)基因水稻的潛在致敏性的研究進展進行了綜述。

１水稻過敏原的研究

作為人類主食被消費的谷物食物如大米、小麥、玉米等發(fā)現(xiàn)過敏現(xiàn)象后，引起科學界的高度關注。１９７８年Ｓｈｉｂａｄａｋｉ等［１］報道水稻蛋白具有過敏作用，１９８８年Ｍａｔｓｕｄａ等［２］運用ＨＰＬＣ、ＥＬＡＳＡ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及親和層析法分離純化得到一種存在于水稻種子胚乳中的過敏原，進一步研究發(fā)現(xiàn)該過敏原分子中脯氨酸（Ｐｒｏ）和半胱氨酸（Ｃｙｓ）含量比谷蛋白和球蛋白要高。且這種過敏蛋白在１００ ℃處理６０ ｍｉｎ后仍然可保持６０％的過敏反應活性。Ｕｒｉｓｕ Ａ等［３］通過進一步分離得到６種過敏蛋白，分子量分別為１４、１５、１６、２６、３３、５６kDａ。發(fā)現(xiàn)１４～１６ kDａ過敏蛋白具有α淀粉酶抑制劑活性［４，５］，３３ kDａ過敏原蛋白（Ｇｌｂ３３）與細菌乙二醛酶Ⅰ有較高的同源性，具有乙二醛酶Ⅰ活性，存在于水稻成熟種子及其莖葉［６］。水稻種子過敏蛋白（ＲＡ）屬于α－淀粉酶／胰蛋白酶抑制劑家族，ＲＮＡ印跡分析，水稻種子在開花后１５～２０ ｄ能最大限度地積累ＲＡ基因［７］。

２轉(zhuǎn)基因水稻潛在致敏性評價方法

２００１年ＦＡＯ／ＷＨＯ組織專家咨詢委員會［８］提出了轉(zhuǎn)基因食品潛在致敏性評估程序。該程序的第一步判斷基因來源；第二步進行序列相似性比較；第三步血清學試驗；第四步模擬胃腸液消化試驗，如有可能還要進行動物模型試驗。根據(jù)各步測試，給出致敏性的高低等級，與２０００年公布的評估程序相比，去除了皮膚穿刺和雙盲法食物攻擊試驗，增加了動物模型試驗。

２．１氨基酸序列分析

根據(jù)ＦＡＯ／ＷＨＯ決策方案，使用ＳＤＡＰ、Ｆａｒｒｐ和ＮＣＢＩ三大數(shù)據(jù)庫對蛋白潛在致敏性進行評估。倪挺等［９］收集了目前已知的過敏原氨基酸序列以及已經(jīng)研究的過敏原決定簇，建立了一個食物過敏原數(shù)據(jù)庫（http：//ambl.lsc.pku.edu.cn），專門用于過敏性評估中的序列相似性比較，該數(shù)據(jù)庫提高了序列相似性分析的準確性，還包括模擬胃腸液消化試驗、放射性變應原吸附抑制試驗（ＲＡＳＴ ＩＮＨＩＢＩＴＩＯＮ）等在過敏性評估中非常重要的試驗方法。在進行序列相似性比較時，使用合理的運算法則和參數(shù)十分關鍵。天然過敏原的細胞表位還包括非線性的構象表位，僅通過鑒定連續(xù)的氨基酸殘基是否相同來判斷蛋白的過敏性可能會造成失誤，局限于氨基酸一級序列的比較，并不包括蛋白質(zhì)之間空間結(jié)構相似性的比較，將連續(xù)相同的氨基酸數(shù)量和相同氨基酸含量聯(lián)合比較能夠得到更合理的結(jié)果［１０］。目前主要采用ＦＡＳＴＡ（Ｆａｓｔ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ）或ＢＬＡＳＴ（Ｂａｓｉｃ ｌｏｃａｌ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｓｅａｒｃｈ ｔｏｏ１）、Ａｌｌｅｒｇｅｎ ｏｎｌｉｎｅ等程序［１１］。轉(zhuǎn)基因表達蛋白是否引起過敏，還取決于外源基因表達產(chǎn)物在人的消化系統(tǒng)中能否快速被降解和消化，以及與高過敏患者血清學反應檢測等［１２］。

２．２特異血清學試驗

特異血清篩選試驗是判定基因表達產(chǎn)物是否致敏的直接方法，即檢測表達蛋白與對轉(zhuǎn)入基因源過敏個體的ＩｇＥ反應。然而，食物過敏不全是由ＩｇＥ介導。以ＩｇＥ介導的食物致敏性評估為基礎，過敏患者過敏原特異性ＩｇＥ抗體有限、食品蛋白及其他過敏原之間的交叉反應性和加工食品中蛋白質(zhì)修飾等都是要考慮的問題［１３］。Ｂａｌｄｏ等［１４］發(fā)現(xiàn)，不同種谷物，例如禾本科家族的水稻、玉米、小麥、大麥、黑麥之間有交叉免疫反應，且其交叉反應程度與他們在分類學上的親緣關系的遠近相一致。目前，治療小麥或玉米過敏癥的重要方法之一，便是用日本小米或意大利小米代替飲食中的小麥、玉米［３］。Ｃｒｙ蛋白由Ｃｒｙ１Ａｃ、Ｃｒｙ１Ａｂ、Ｃｒｙ２Ａｂ編碼，存在潛在的過敏交叉反應，利用生物信息學搜索工具，識別分析任何潛在過敏原的蛋白質(zhì)氨基酸序列［１５］。目前迫切需要對不同種谷物之間的交叉過敏原性及各自的免疫原性的產(chǎn)生機制作深入的了解。

２．３模擬胃腸液消化穩(wěn)定性

２０世紀７０～８０年代進行蛋白質(zhì)的營養(yǎng)價值評價時，胃蛋白酶消化法被建立和發(fā)展于預測氨基酸生物利用率。１９９６年，Ａｓｔｗｏｏｄ等［１６］首次將體外胃蛋白酶消化方法系統(tǒng)地應用于食物致敏原的消化穩(wěn)定性評價。從１９９6～２００３年ＦＡＯ／ＷＨＯ食品法典委員會（ＣＡＣ）公布的新的轉(zhuǎn)基因食品致敏性評價策略，消化穩(wěn)定性試驗一直是評價新外源蛋白質(zhì)，尤其是通過基因工程轉(zhuǎn)入傳統(tǒng)食品中新表達的蛋白質(zhì)可能致敏性的必選實驗項目［１７］。很多蛋白都建立體外模擬胃腸液消化穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性試驗，蟹類過敏蛋白、淡水魚類小清蛋白、鯉魚膠原蛋白等其他水產(chǎn)過敏原的消化穩(wěn)定性，相對于非過敏蛋白具有一定的消化穩(wěn)定性［１８－２１］。牛初乳ＩＧＦ－Ｉ的模擬胃腸液穩(wěn)定性研究表明［２２］，牛初乳ＩＧＦ－Ｉ在模擬胃液中的穩(wěn)定性隨胃液ｐＨ的升高而增加，隨消化時間延長而降低；初乳乳清粉中的ＩＧＦ－Ｉ對模擬胃腸液消化的耐受性高于純化的ＩＧＦ－Ｉ。

２．３．１模擬消化的影響因素體外模擬消化試驗中，因為消化酶對氨基酸肽段的特異性分解位點不同有差異，不同的消化酶對同一種過敏蛋白所產(chǎn)生的降解產(chǎn)物不同。如胃蛋白酶Ａ優(yōu)先選擇苯丙氨酸或酪氨酸殘基的Ｃ末端降解［２３］，胰蛋白酶有較強的特異性，優(yōu)先選擇靠近親水性氨基酸殘基Ｌｙｓ和Ａｒｇ的Ｐ１位置，胰凝乳蛋白酶具有較寬廣的特異性，它強烈地優(yōu)先選擇靠近芳香族氨基酸（Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｐｈｅ）和Ｌｅｕ的Ｐｌ位置［２４］。選擇合適的酶／蛋白的比值來反映人體的正常生理分泌情況是很重要的。按照文獻［２５］推算，將人體分泌的胃蛋白酶活力換算成商業(yè)酶活力，人體每天分泌的胃蛋白酶與每天攝入的蛋白的比值為１∶７ ５００（ｗ／ｗ）。振蕩的速率應該和胃腸道消化過程中蠕動的速率相關。胃中的轉(zhuǎn)動和短波的移動通常大約為每分鐘３次。而在小腸中的蠕動速率則不同，十二指腸中為１１．７次／ｍｉｎ，回腸為８．９～９．８次／ｍｉｎ。因此，把胃和小腸的蠕動速率調(diào)到３次／ｍｉｎ和１０次／ｍｉｎ是相對合理的［２６］。在ｐＨ １．２蛋白質(zhì)消化率比ｐＨ ２．０的高［２７］。ｐＨ和胃蛋白酶濃度的差異，只輕微影響中等穩(wěn)定的蛋白質(zhì)消化：刀豆素Ａ、卵清蛋白、溶菌酶；不影響極易消化或穩(wěn)定的蛋白質(zhì)。通過胃蛋白酶活性的驗證和消化的目標端點的確定，食物中新蛋白質(zhì)的安全性評估結(jié)果更具有可比性［２８］。

２．３．２模擬胃腸液消化研究王興等［２９］探索苦蕎蛋白質(zhì)體外消化過程中的動力學特性及其抗氧化活性變化，建立苦蕎蛋白質(zhì)體外消化動力學模型，所得水解度指標與抗氧化活性指標有較強的相關性，建立模型與實際觀測結(jié)果符合良好。研究轉(zhuǎn)基因大豆的消化穩(wěn)定性評估下的生理體外消化和發(fā)酵模型，未經(jīng)胃腸液完全降解的蛋白片段，可能會導致結(jié)腸癌。研究蛋白在結(jié)腸發(fā)酵后的降解情況，結(jié)合美國藥典和模仿人類生理條件的胃腸道分泌，食物的攝入量與唾液、胃液、膽汁、胰液的比例分別為２．５∶１．０∶１．５∶１．０∶１．０。結(jié)果顯示結(jié)腸發(fā)酵２４ ｈ后沒有發(fā)酵產(chǎn)物，證實新的蛋白質(zhì)不會導致結(jié)腸癌；在胃液中其完全消化的時間很短，轉(zhuǎn)基因大豆ＣＰ４ＥＰＳＰＳ沒有潛在的致敏性［３０］。王利民等［３１］將大豆凝集素設為１、２、３、４、５ ｍｇ／ｍL ５個濃度梯度，分別與等體積的模擬胃液或模擬腸液混合，胃蛋白酶降解大豆凝集素主要發(fā)生在反應的初始階段，隨著反應時間的延長降解速率逐漸變慢，但反應一直在進行；隨著大豆凝集素濃度的增加，降解速率增大，但徹底降解所需的時間延長，底物濃度從1 ｍｇ／ｍＬ增加到５ ｍｇ／ｍＬ，完全降解的時間為９．５和２３.0 ｍｉｎ。

蛋白質(zhì)消化穩(wěn)定性是評價其潛在致敏性的重要參考依據(jù)，其與食物過敏的關系須考慮試驗條件、食物致敏原類別和食物基質(zhì)及食物加工等多因素的影響［３２］。進一步促進體外消化穩(wěn)定性試驗的標準化，建立成熟、完整的體外消化模型進行外源蛋白質(zhì)的消化穩(wěn)定性評價。

２．４動物模型研究

根據(jù)２００１年ＦＡＯ／ＷＨＯ生物技術食品過敏性聯(lián)合專家咨詢會議的轉(zhuǎn)基因食品潛在致敏性樹狀評估策略，定向篩選血清學試驗和動物模型成為探測未知過敏原的新方法，并明確提出動物模型是評價轉(zhuǎn)基因作物潛在致敏性的更有決定性的、也更為整體的一種方法［８］。

２．４．１嚙齒類動物模型許多動物模型如小鼠、大鼠、豬等在揭示食品過敏機理方面已有較多報道［３３－３８］。其中嚙齒動物相對容易飼養(yǎng)，費用低，試驗時間短，便于研究致敏和激發(fā)期不同階段的過敏反應，小鼠模型具有高水平ＩｇＥ反應、多樣的免疫學和分子學反應物，小鼠和人類之間相似的抗體決定簇也證明小鼠是用于人類食品過敏研究的有效模型。建立動物模型試驗系統(tǒng)標準，對過敏性反應表征的測試，包括免疫、過敏性反應的測量、材料標準化、驗證資格和程序等［３９］。理想的模式應試驗方法簡單，重現(xiàn)性好，可區(qū)分出與人類的過敏性反應有關的過敏性預測閾值以及足夠的特異性和敏感性［４０］。

通過大米過敏原的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠經(jīng)口灌胃模型，了解大米蛋白的致敏性和免疫學潛在的食物過敏癥發(fā)展的病理、生理機制。結(jié)果顯示搔抓行為和血管通透性增加，大米蛋白特異ＩｇＥ、小腸上皮炎癥損傷等出現(xiàn)陽性結(jié)果。水稻過敏ＢＡＬＢ／ｃ小鼠模型的研究，將為進一步分析免疫機制、評價各種大米或其他谷物過敏原的致敏性、大米過敏原免疫療法等提供基礎［４１］。孫拿拿等［４２］研究Ｃ３Ｈ／ＨｅＪ小鼠可以作為食品致敏性評價動物模型，經(jīng)口灌胃途徑及腹腔注射途徑的最佳致敏周期分別為１４和２８ ｄ。然而也有對ＢＡＬＢ／ｃ小鼠作為食物過敏動物模型的可行性持懷疑態(tài)度的，呂相征等［４３］發(fā)現(xiàn)常見致敏食物蛋白質(zhì)卵清蛋白（ＯＶＡ）和大豆胰蛋白酶抑制劑（ＴＩ）、不常見致敏食物蛋白質(zhì)牛血清白蛋白（ＢＳＡ）和無致敏史食物蛋白質(zhì)馬鈴薯酸性磷酸酶（ＰＡＰ）均可使ＢＡＬＢ/ｃ小鼠產(chǎn)生過敏反應。

２．４．２其他模型研究用短尾猴經(jīng)口灌胃含７Ｃｒｐ（７－Ｔ細胞來自杉樹花粉的抗原表位過敏原，可被利用來控制人類的花粉過敏）轉(zhuǎn)基因水稻，進行２６周以上的安全評估試驗，各組之間血液或生化值無顯著差異。也沒有病理癥狀和組織病理學異常的變化，表明經(jīng)口灌胃含有７Ｃｒｐ轉(zhuǎn)基因水稻無不良影響，是安全的［４４］。轉(zhuǎn)基因Ｂｔｌ７６玉米的安全性研究［４５］，用含該種抗蟲基因玉米的飼料喂養(yǎng)母羊及它們的后代３年，未發(fā)現(xiàn)試驗對受試動物的健康和各種性狀有不利影響，也未檢測到瘤胃中微生物或動物組織有任何橫向基因變化。用電鏡對肝臟和胰腺的初步分析顯示，小羊羔由于含較小細胞核而增加了異染色質(zhì)顆粒和染色質(zhì)旁顆粒的數(shù)量。許多研究仍在繼續(xù)，以期找到合適的動物模型，能較好地模擬人的抗體反應，甚至與致敏性病人同樣的臨床反應。

３食品致敏原潛在過敏性的解決方法

２００６年國際生命科學學會健康和環(huán)境科學研究所蛋白質(zhì)致敏技術委員會組織［４６］，討論食品加工對食品潛在致敏性的影響，調(diào)查食物過敏機制，通過適當?shù)姆椒炞C和確定蛋白過敏原。食品抗原表位的多重模式、食物過敏患病率的地理變異和遺傳因素等都需要進一步探索。食品加工可能增加或減少蛋白質(zhì)的內(nèi)在過敏性，然而目前的數(shù)據(jù)沒有精確地確定影響蛋白質(zhì)的致敏性的特定變量。對過敏患者最重要的是避免接觸過敏原，減少過敏反應的發(fā)生，不僅要求對過敏原的精確研究和鑒定，還要有降低食品過敏原潛在致敏性的科學方法。

３．１加工處理

發(fā)芽和熱處理對可溶性蛋白質(zhì)（包括１４～１６ｋＤａ和２６ｋＤａ的過敏原）降解的影響表明，２６ｋＤａ和１４～ １６ｋＤａ的過敏原降解的最適ｐＨ分別為４、５～７，半胱氨酸蛋白酶參與降解。兩大過敏原以不同的方式降解，可能是谷物在發(fā)芽過程中產(chǎn)生不同蛋白酶的作用［４７］。

３．２體外免疫

建立體外免疫產(chǎn)生抗原特異性的人類單克隆抗體。對大米過敏蛋白（ＲＡ）的可溶性蛋白進行體外免疫，對ＡＣ７－１／Ｆ９、ＣＢ７－１／Ｅ２和ＣＢ７－８／Ｆ５ ３個Ｂ細胞克隆，產(chǎn)生ＲＡ特定的人類單克?。桑纾涂贵w。ＲＡ分子可能會引發(fā)過敏反應抗原表位區(qū)域的信息，可以對大米過敏進行特異性免疫［４８］。

３．３過敏治療

目前對過敏治療，接種疫苗是最有效的科學方法。重組基因主要是改造過敏原，減少過敏活性分子和內(nèi)在抗原性。制定的過敏疫苗能顯著降低與ＩｇＥ抗體特異性結(jié)合作用，不會導致過敏性反應。１４～１６ ｋＤａ的水稻鹽溶蛋白，能與對水稻過敏的患者ＩｇＥ抗體反應。從水稻種子的ｃＤＮＡ文庫中分離編碼這些過敏性蛋白，采用反義ＲＮＡ抑制成熟水稻種子過敏原基因的表達。免疫印跡和１６ ｋＤａ過敏原的單克隆抗體酶聯(lián)免疫吸附分析表明，轉(zhuǎn)基因水稻種子的過敏原的含量明顯低于父母的野生型水稻種子［４９］。血清學和２Ｄ－ＤＩＧＥ分析相結(jié)合是一種在質(zhì)量和數(shù)量上評估轉(zhuǎn)基因食品過敏原的有效方法［５０］。分子生物學、生物化學和營養(yǎng)學的結(jié)合將為食品安全評估提供更有效的信息［５１］?？梢赃M一步改善未來的測試方法。

４總結(jié)

轉(zhuǎn)基因水稻的安全性一直是各國政府及消費者十分重視的問題，各國也在對不斷涌現(xiàn)的轉(zhuǎn)基因水稻進行極為嚴格、審慎的評估，評價方法和決策都在不斷地發(fā)展。結(jié)合我國轉(zhuǎn)基因作物的發(fā)展態(tài)勢，建立針對轉(zhuǎn)基因水稻完善的致敏性評估體系，加快完善我國轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品潛在致敏性的評估系統(tǒng)，借鑒國際先進的風險評估標準和技術，完善轉(zhuǎn)基因水稻風險評估方法和策略，特別是對有關數(shù)據(jù)庫資料和特異性血清庫的不斷完善，以及測試方法的標準化工作亟待加強。實現(xiàn)轉(zhuǎn)基因水稻的安全、合理發(fā)展，實現(xiàn)轉(zhuǎn)基因作物技術持續(xù)發(fā)展。

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［４４］ ＤＯＭＯＮ Ｅ， ＴＡＫＡＧＩ Ｈ， ＨＩＲＯＳＥ Ｓ， ｅｔ ａｌ． ２６－wｅｅｋ oｒａｌ sａｆｅｔｙ sｔｕｄｙ ｉｎ mａｃａｑｕｅｓ ｆｏｒ tｒａｎｓｇｅｎｉｃ rｉｃｅ cｏｎｔａｉｎｉｎｇ mａｊｏｒ hｕｍａｎ Ｔ－cｅｌｌ eｐｉｔｏｐｅ pｅｐｔｉｄｅｓ ｆｒｏｍ jａｐａｎｅｓｅ cｅｄａｒ pｏｌｌｅｎ aｌｌｅｒｇｅｎｓ［Ｊ］． Ｊ Ａｇｒｉｃ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ，２００９，５７（１２）：５６３３-５６３８．

［４５］ ＴＲＡＢＡＬＺＡ-ＭＡＲＩＮＵＣＣＩ Ｍ， ＢＲＡＮＤＩ Ｇ，ＲＯＮＤＩＮＩ Ｃ，ｅｔ ａｌ． Ａ ｔｈｒｅｅ－ｙｅａｒ ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａ ｄｉｅｔ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｂｔｌ７６ ｍａｉｚｅ ｏｎ ｔｈｅ ｈｅａｌｔｈ ｓｔａｔｕｓ ａｎｄ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｏｆ ｓｈｅｅｐ［Ｊ］． Ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００８，１１３（２－３）：１７８－１９０．

［４６］ ＴＨＯＭＡＳ Ｋ， ＨＥＲＯＵＥＴ－ＧＵＩＣＨＥＮＥＹ Ｃ， ＬＡＤＩＣＳ Ｇ， ｅｔ ａｌ． Ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｆｏｏｄ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｏｎ ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｈｕｍａｎ ａｌｌｅｒｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ｎｏｖｅｌ ｐｒｏｔｅｉｎｓ： ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｗｏｒｋｓｈｏｐ ｒｅｐｏｒｔ［Ｊ］． Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ Ｔｏｘｉｃｏ，２００７，４５（７）：１１１６－１１２２．

［４７］ ＹＡＭＡＤＡ Ｃ， ＩＺＵＭＩ Ｈ， ＨＩＲＡＮＯ Ｊ， ｅｔ ａｌ． ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｏｌｕｂｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｓｏｍｅ ａｌｌｅｒｇｅｎｓ ｉｎ ｂｒｏｗｎ ｒｉｃｅ ｇｒａｉｎｓ ｂｙ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｄｕｒｉｎｇ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ ｈｅａｔ－ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ［Ｊ］． Ｂｉｏｓｃｉ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｃｅｍ，２００５，６９（１０）：１８７７－１８８３．

［４８］ ＳＵＮ－ＹＵＰ Ｓ， ＫＡＴＡＫＵＲＡ Ｙ， ＩＣＨＩＫＡＷＡ Ａ ，ｅｔ ａｌ． Ｅｐｉｔｏｐｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｓｐｅｃｉfiｃ ｆｏｒ ｒｉｃｅ ａｌｌｅｒｇｅｎｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｂｙ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ［Ｊ］． Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００１，３６（１－３）：１０９－１１５．

［４９］ ＮＡＫＡＭＵＲＡ Ｒ， ＭＡＴＳＵＤＡ Ｔ． Ｒｉｃｅ ａｌｌｅｒｇｅｎｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ－ｇｅｎｅｔｉｃ ａｐｐｒｏａｃｈ ｆｏｒ ｈｙｐｏａｌｌｅｒｇｅｎｉｃ ｒｉｃｅ［Ｊ］． Ｂｉｏｓｃｉ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ，１９９６，６０（８）：１２１５－１２２１．

［５０］ ＮＡＫＡＭＵＲＡＲ，ＮＡＫＡＭＵＲＡ Ｒ，ＮＡＫＡＮＯ Ｍ，ｅｔ ａｌ． Ａｌｌｅｒｇｅｎｉｃｉｔｙ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ＥＧＦＰ－ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｃｈｉｃｋｅｎ ｍｅａｔ ｂｙ ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ２Ｄ－ＤＩＧＥ ａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］． Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ Ｔｏｘｉｃｏｌ，２０１０，４８（５）：１３０２－１３１０．

［５１］ ＫＯＮＩＧ Ａ，ＣＯＣＫＢＵＲＮ Ａ，ＣＲＥＶＥＬ Ｒ Ｗ Ｒ，ｅｔ ａｌ． Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｓａｆｅｔｙ ｏｆ ｆｏｏｄｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｍｏｄｉfiｅｄ（ＧＭ） ｃｒｏｐｓ［Ｊ］． Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ Ｔｏｘｉｃｏｌ，２００４，４２（７）：１０４７－１０８８．