益母草顆粒工藝改進(jìn)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高的研究

鄭艷春 李 君 崔雅慧 李俊芳 董海榮 朱 磊

承德頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司，河北省中藥新輔料工程技術(shù)研究中心，河北承德 067000

益母草顆?，F(xiàn)收載于《中國藥典》2010年版一部，為婦科經(jīng)產(chǎn)之要藥，主要用于經(jīng)閉、痛經(jīng)、產(chǎn)后瘀血、腹痛等婦科疾病[1]?，F(xiàn)在市面上規(guī)格是每袋裝15 g，由于服用量相對較大，輔料用量多，不利于患者的服用，顆粒干燥時(shí)間長，沒有控制質(zhì)量的指標(biāo)性成分。為此，通過對制劑工藝進(jìn)行改造，制劑規(guī)格由原來的每袋裝15 g變更為每袋裝5 g，每袋療效不改變，輔料量減少了60%以上，有效地控制了成品的質(zhì)量，方便了患者的使用，增強(qiáng)患者依從性，降低企業(yè)生產(chǎn)成本。

1 儀器與試藥

多功能提取罐（武漢制藥機(jī)械廠），DBP-3 多功能制粒包衣機(jī)（重慶廣廈生產(chǎn)），UV-2401 紫外-可見分光光度儀（日本島津公司生產(chǎn)），醫(yī)用型超聲清洗器KQ-700DE（昆山市超聲儀器有限公司），鹽酸水蘇堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號(hào)：110702-200709），硫氰酸鉻銨（上海天蓮精細(xì)化工有限公司，批號(hào)：2006-08-12-520），益母草藥材、糊精、蔗糖均有承德頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)提供，水為二次蒸餾水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 制劑工藝的研究

益母草顆粒原工藝為提取浸膏濕法擠壓制粒，藥物與輔料的比例相差較大，特別是干燥過程較慢，導(dǎo)致生產(chǎn)周期也較長，工藝改進(jìn)后采用沸騰制粒技術(shù)制備顆粒，降低了制劑中輔料的用量，減少了顆粒干燥的時(shí)間，降低了生產(chǎn)的成本。

2.1.1 提取浸膏比例的選擇

按照益母草提取工藝，提取濃縮后浸膏的比重為1.36～1.38，浸膏較黏稠，濃縮過程黏附在濃縮罐中的浸膏較多，損失較大，采用沸騰制粒技術(shù)，浸膏比重調(diào)整在1.15～1.30 范圍內(nèi)，浸膏損耗少，優(yōu)選后發(fā)現(xiàn)浸膏在1.20～1.25 時(shí)，制粒效果較好。

2.1.2 藥物、輔料比例的確定

根據(jù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)規(guī)格，確定制劑中輔料的用量，以顆粒的制備狀態(tài)、顆粒的粒度為考察點(diǎn)，分別設(shè)定糊精∶蔗糖比為5∶4、4∶5、3∶6 三個(gè)比例進(jìn)行優(yōu)選，而以糊精∶糖粉比例為 4∶5 時(shí)制得的顆粒大小均勻，粒度好，過程控制穩(wěn)定。

2.1.3 工藝對比研究

試驗(yàn)中將變更前后兩種工藝進(jìn)行對比，結(jié)果采用噴霧制粒技術(shù)，浸膏相對密度降低到1.20～1.25；藥物與輔料的比例降低到1.0∶2.2；干燥溫度和干燥時(shí)間最為明顯，由原來的22～24 h降低到2～3 h。結(jié)果制得的顆粒硬度適中，粒度均勻，明顯縮短了生產(chǎn)周期，降低了生產(chǎn)成本。

2.2 質(zhì)量研究

2.2.1 薄層色譜鑒別

取本品 5 g，研細(xì)，加乙醇 50 mL，超聲 30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)尤?.1 mol/L鹽酸溶液10 mL使溶解，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為供試品溶液。取除去益母草，按益母草顆粒工藝制備的陰性樣品，照供試品溶液的制備方法制成陰性樣品溶液。另取鹽酸水蘇堿對照品，加乙醇制成每1 mL含2 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，分別吸取供試品溶液、陰性樣品溶液各10 μL及對照品溶液5 μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-正丁醇-鹽酸（3∶2∶1）為展開劑展開，取出，晾干，105℃烘干10 min，晾涼。噴以碘化鉍鉀-碘化鉀碘（1∶1）試液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性樣品無干擾。

2.2.2 方法學(xué)考察

2.2.2.1 線性關(guān)系考察 精密吸取鹽酸水蘇堿對照品溶液（1 mg/mL）4、6、8、10、12、14 mL， 分別置 25 mL 容量瓶中，加0.1 mol/mL的鹽酸溶液使成20 mL，另取鹽酸溶液20 mL，置另一25 mL容量瓶中，作為空白樣品溶液，采用含量測定的方法測定，以鹽酸水蘇堿的濃度（X）為橫坐標(biāo)，吸收度的差值（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，測得鹽酸水蘇堿的線性回歸方程：Y=0.605 6X-0.003 1，r=0.999 4，線性范圍為 0～8.153 6 mg。

2.2.2.2 精密度試驗(yàn) 精密稱取上述對照品溶液6份，各8 mL，按照樣品含量測定方法進(jìn)行測定，測定的平均吸收度值為0.283 6，RSD 值為 0.26%（n=6）。

2.2.2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批號(hào)的供試品溶液，分別在放置0、2、4、6、8 h 后，測定其吸收度，結(jié)果樣品溶液在 8 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好，樣品吸收度值的RSD值為1.34%（n=6），

2.2.2.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取益母草顆粒（批號(hào)：080508）40 g，研細(xì)，精密稱取 9份，分為三組，每組分別為 1.6、2.0、2.4 g，按“2.2.1”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制成供試品溶液，另取對照品溶液，按上述樣品測定方法分別測定鹽酸水蘇堿的吸收度，記錄吸收度值，計(jì)算樣品含量。樣品平均含量為18.7 mg/袋，RSD 值為 1.81%（n=9）。

2.2.2.5 加樣回收率試驗(yàn) 取益母草顆粒（批號(hào)：080508）40 g，研細(xì)，精密稱取9份，每份約1.0 g，精密加入不同量的鹽酸水蘇堿對照品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制成供試品溶液，按上述測定方法測定各樣品的吸收度，計(jì)算回收率，鹽酸水蘇堿的平均回收率為98.5%（n=9），RSD=1.03%（n=9）。

2.2.2.6 專屬性試驗(yàn) 按照處方配比，除去益母草，參照“2.2.1”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制成陰性樣品溶液。按上述樣品測定方法進(jìn)行測定，陰性樣品與空白試劑的吸收度無顯著性差異，說明輔料不干擾鹽酸水蘇堿的測定。

2.2.2.7 對照品溶液的制備 精密稱取105℃干燥至恒重的鹽酸水蘇堿對照品適量，用0.1 mol/L鹽酸溶液溶解，制成每1 mL含鹽酸水蘇堿1 mg的溶液，即得。

2.2.2.8 供試品溶液的制備 取本品，研成細(xì)粉，精密稱取2.0 g，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇50 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25 mL，置蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，精密加入0.1 mol/L鹽酸溶液 10 mL，使溶解，加活性炭0.5 g，置水浴中加熱半分鐘，攪拌、濾過，濾液置25 mL量瓶中，用0.1 mol/L鹽酸溶液分次洗滌蒸發(fā)皿及濾器，洗液并入同一量瓶中，備用。

2.2.2.9 測定方法 精密量取對照品溶液10 mL，置量瓶中，另取0.1 mol/L鹽酸溶液20 mL，置25 mL量瓶中，作為空白樣品溶液。在對照品溶液、0.1 mol/L鹽酸空白樣品溶液及上述備用供試品溶液的量瓶中，各精密加入新配制的2%硫氰酸鉻銨溶液3 mL，搖勻，加0.1 mol/L鹽酸溶液至刻度，搖勻，置冰浴中放置1 h，過濾，取續(xù)濾液，以0.1 mol/L鹽酸溶液為空白，照紫外-可見分光光度法（《中國藥典》2010年版一部附錄ⅤA），在520 nm的波長處測定吸收度，用空白樣品的吸收度分別減去對照品及供試品的吸收度，計(jì)算，即得。各批的測定結(jié)果見表1。

表1 益母草顆粒中鹽酸水蘇堿含量測定結(jié)果（mg/袋，n=3）

2.2.3 質(zhì)量對比研究

取同一批次的藥材，分別采用以上兩種方法制備不同規(guī)格的益母草顆粒各三批，兩種規(guī)格的樣品所含的生藥量相同，輔料的用量不同。從檢測的結(jié)果看，鑒別項(xiàng)沒有明顯的變化，主斑點(diǎn)顏色清晰；含量測定項(xiàng)，平均含量分別為4.14 mg/g和4.18 mg/g，RSD=0.68%。提示沸騰制粒技術(shù)制備的顆粒不會(huì)對原規(guī)格顆粒的成分產(chǎn)生影響，但在一定的程度上提高了質(zhì)量的可控性。

2.2.4 含量限度確定

從以上10 批樣品測定結(jié)果看，益母草顆粒中鹽酸水蘇堿的含量在16.5～28.5 mg/袋范圍內(nèi)不等，平均含量為21.5 mg/袋。由于不同產(chǎn)地、規(guī)格、批次的益母草藥材差異較大[2]，導(dǎo)致制劑中鹽酸水蘇堿的含量也有較大的波動(dòng)。因此，在上述測得平均值的基礎(chǔ)上適當(dāng)調(diào)整，根據(jù)生產(chǎn)的實(shí)際情況及檢測的方法，將每袋顆粒含鹽酸水蘇堿確定為18.0 mg。

3 討論

3.1 展開系統(tǒng)和條件的選擇

對于益母草鑒別的展開系統(tǒng)，文獻(xiàn)報(bào)道很多，常用的有正丁醇-鹽酸-水（4.0∶1.0∶0.5）[3]、正丁醇-鹽酸-乙酸乙酯（4.0∶1.5∶0.5）[3]、丙酮-無水乙醇-鹽酸（10∶6∶1）[4]，乙酸乙酯-正丁醇-鹽酸（3∶2∶1）[5]等。 考察了各種展開劑對鹽酸水蘇堿的分離情況。前兩種的展開系統(tǒng)，展開時(shí)間長，對薄層板的選擇性強(qiáng)，展開的重現(xiàn)性差，斑點(diǎn)分散、不穩(wěn)定；丙酮-無水乙醇-鹽酸（10∶6∶1）展開系統(tǒng)展開速度快，樣品的分離效果不明顯；乙酸乙酯-正丁醇-鹽酸（3∶2∶1）展開系統(tǒng)，用時(shí)短，分離度好，因此選用其作為該項(xiàng)的展開系統(tǒng)。

3.2 顯色劑的選擇

選用了鹽酸水蘇堿常用的顯色劑：稀碘化鉍鉀試液、碘化鉍鉀試液、改良碘化鉍鉀試液、改良碘化鉍鉀-1%三氯化鐵無水乙醇液（5∶1）等，均不能使斑點(diǎn)保持圓潤、穩(wěn)定不褪色，而使用碘化鉍鉀-碘化鉀碘（1∶1）進(jìn)行顯色，鹽酸水蘇堿斑點(diǎn)顯色快，清晰，穩(wěn)定。

[1] 李文仕.益母草顆粒的質(zhì)量控制[J].中國藥師，2008，11（4）：471-472.

[2] 張清民，朱穎虹，熊艷，等.益母草不同制劑鹽酸水蘇堿含量的測定[J].中成藥，2001，23（6）：437-438.

[3] 國家藥典委員會(huì).中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：1025-1026.

[4] 張玲，時(shí)延增，于宗淵，等.雙波長薄層掃描法測定益母口服液中水蘇堿的含量[J].中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，1996，27（l）：15-16.

[5] 嚴(yán)優(yōu)勺.益母草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、提取工藝劑型的改進(jìn)研究[D].廣州：廣州中醫(yī)藥大學(xué)，2005.