苓桂術(shù)甘湯對急性心肌梗死心室重構(gòu)模型大鼠TNF-α、IL-6和ET-1的影響

王 靚，侯曉燕，保永亮，黃金玲，方海雁，施 慧，程曉煜

（安徽中醫(yī)學(xué)院，安徽合肥230038）

苓桂術(shù)甘湯對急性心肌梗死心室重構(gòu)模型大鼠TNF-α、IL-6和ET-1的影響

王 靚，侯曉燕，保永亮，黃金玲，方海雁，施 慧，程曉煜

（安徽中醫(yī)學(xué)院，安徽合肥230038）

目的：觀察苓桂術(shù)甘湯對急性心肌梗死心室重構(gòu)模型大鼠血清TNF-α、IL-6和ET-1的影響，探討其干預(yù)急性心肌梗死后心室重構(gòu)的機制。方法：采用冠狀動脈結(jié)扎法制備急性心肌梗死大鼠模型，造模2 w后將模型大鼠隨機分為模型組、卡托普利組、苓桂術(shù)甘湯?。?.1 g生藥/kg）、中（4.2 g生藥/kg）、大（8.4 g生藥/kg）劑量組，另設(shè)假手術(shù)組，分別灌胃給藥，連續(xù)給藥4 w，采用ELISA法檢測各組大鼠血清TNF-a、IL-6和ET-1的含量。結(jié)果：與假手術(shù)組相比，模型組大鼠血清TNF-α、IL-6和ET-1含量顯著升高（P＜0.01）；而苓桂術(shù)甘湯各劑量組能夠顯著降低模型大鼠血清TNF-α、IL-6和ET-1含量（P＜0.01，P＜0.05）。結(jié)論：苓桂術(shù)甘湯能夠通過調(diào)節(jié)細胞因子網(wǎng)絡(luò)干預(yù)急性心肌梗死后的心室重構(gòu)。

苓桂術(shù)甘湯；急性心肌梗死；TNF-α；IL-6；ET-1

心室重構(gòu)（ventricular remodeling，VR）是急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）患者心功能逐漸惡化并最終走向慢性心力衰竭（chronic heart failure，CHF）的重要環(huán)節(jié)，逆轉(zhuǎn)急性心肌梗死后心室重構(gòu)已成為防治慢性心力衰竭的重要手段［1］。課題組的前期研究結(jié)果顯示，苓桂術(shù)甘湯（Lingguizhugan Decoction，LGZGD）在AMI發(fā)生6 w后給藥能夠有效逆轉(zhuǎn)VR、改善心衰血流動力學(xué)、防止CHF的發(fā)生［2-3］，本實驗在其基礎(chǔ)上進一步觀察苓桂術(shù)甘湯在AMI后2 w用藥，對大鼠血清TNF-α、IL-6和ET-1的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 清潔級SD雄性大鼠，體重180 g～220 g，安徽醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，合格證號：SCXK（皖）2011-002。

1.1.2藥品與試劑 苓桂術(shù)甘湯按原方比例（茯苓∶桂枝∶白術(shù)∶甘草=4∶3∶3∶2）參考文獻［4］方法，由安徽省亳州市興和藥業(yè)有限公司提取制成含4.8 g生藥/g的干浸膏，4℃冰箱保存?zhèn)溆?；卡托普利由中美上海施貴寶制藥有限公司生產(chǎn)，批號：1004031。ET-1試劑盒由上海源葉生物科技有限公司提供，批號：APE448R；TNF-α和IL-6試劑盒由上海森雄科技實業(yè)有限公司提供，批號：20111105248。

1.1.3 實驗儀器 Multiskan MK2型酶標儀、Wellwash 4 MK2型洗板機由Labsystem生產(chǎn)；TGL-16GB型離心機由上海安亭科學(xué)儀器廠生產(chǎn)；HX-300S型小型動物呼吸機由成都泰盟科技有限公司生產(chǎn)。

1.2 實驗方法

1.2.1 造模 參考文獻［5］方法，取SD大鼠130只，戊巴比妥鈉（35 mg/kg）腹腔注射麻醉，背位固定，小型動物呼吸機輔助呼吸，潮氣量300 mL/kg，大鼠胸部去毛、無菌操作，沿左鎖骨中線3～5肋處縱行切開皮膚約2.5 cm，于第三、四肋間，鈍性分離肋間肌，打開胸腔，剪開心包，輕壓右側(cè)胸廓，擠出心臟，在距左冠狀動脈根部3 mm處，用6-0眼科無創(chuàng)縫合絲線結(jié)扎冠狀動脈左前降支。結(jié)扎后左室壁顏色變淺，心電圖S-T段抬高伴肢體導(dǎo)聯(lián)R波高尖，即為結(jié)扎成功，迅速將心臟推回胸腔，縫合胸壁。除假手術(shù)組12只大鼠除只穿線不結(jié)扎冠狀動脈外，其他手術(shù)過程與前相同。大鼠自主呼吸恢復(fù)后停止輔助呼吸，每日腹腔注射青霉素8萬U/只，連續(xù)注射 3 d，預(yù)防感染。

1.2.2 分組及給藥 造模2 w后除假手術(shù)組（蒸餾水灌胃）外，其余存活模型大鼠隨機分為5組（每組12只）：模型組（蒸餾水灌胃），苓桂術(shù)甘湯小劑量組（2.1 g生藥/kg灌胃）、中劑量組（4.2 g生藥/kg灌胃）、大劑量組（8.4 g生藥/kg灌胃），苓桂術(shù)甘湯各劑量組給藥劑量相當(dāng)于臨床成人等效量的0.5倍、1倍、2倍，卡托普利組（4.375 mg/kg，相當(dāng)于臨床成人等效量），各組灌胃給藥容積為10 mL/kg體重，假手術(shù)組與模型組灌胃等容積蒸餾水溶液，連續(xù)給藥4 w。

1.2.3 檢測指標與方法 末次給藥后30 min，各組大鼠腹腔注射20%烏拉坦5 mL/kg體重，麻醉后腹主動脈取血，血液靜置30 min后，3 500 rpm離心10 min，取血清用ELISA法檢測ET-1、TNF-α和IL-6含量。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用統(tǒng)計分析軟件SPSS 17.0進行統(tǒng)計學(xué)處理。連續(xù)型變量用均數(shù)±標準差（±s）表示，多樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

苓桂術(shù)甘湯對AMI模型大鼠血清TNF-α、IL-6和ET-1含量的影響，結(jié)果見表1。

表1 苓桂術(shù)甘湯對AMI模型大鼠血清TNF-α、IL-6和ET-1含量的影響 （±s）

表1 苓桂術(shù)甘湯對AMI模型大鼠血清TNF-α、IL-6和ET-1含量的影響 （±s）

注：與假手術(shù)組比較，1）P<0.01；與模型組比較，2）P<0.05，3）P<0.01

組別 n 劑量（g/kg） IL-6（ng/L） TNF-α（ng/L） ET（ng/L）假手術(shù)組 10 - 52.739±5.326 97.101±13.564 78.679±8.681模型組 8 - 93.207±8.6541） 178.129±24.1601） 110.829±12.8801）卡托普利組 10 0.004 57.767±6.6063） 135.036±9.8563） 83.052±3.7903）LGZGD（?。?9 2.100 72.775±5.6393） 153.346±14.0722） 96.071±13.7132）LGZGD（中） 10 4.200 52.883±10.7303）128.640±19.7043） 82.629±9.1373）LGZGD（大） 10 8.400 58.115±8.1363） 139.939±21.2823） 89.352±13.1853）

由表1可見，與假手術(shù)組相比，模型組大鼠血清IL-6、TNF-α 和 ET-1含量明顯升高（P<0.01）；與模型組比較，苓桂術(shù)甘湯各劑量組和卡托普利組大鼠，連續(xù)給藥4 w后血清IL-6、TNF-α和ET-1含量明顯降低（P<0.05，P<0.01），說明苓桂術(shù)甘湯能夠顯著抑制模型大鼠細胞因子網(wǎng)絡(luò)的過度激活。

3 討論

心室重構(gòu)是CHF發(fā)生、發(fā)展的分子細胞學(xué)基礎(chǔ)，包括心肌細胞肥大和心肌間質(zhì)重構(gòu)兩個方面，表現(xiàn)為心室腔擴大、室壁增厚、心室腔幾何構(gòu)型和功能的改變。研究表明，初始的心肌損傷后，神經(jīng)內(nèi)分泌細胞因子參與了心室重構(gòu)，并貫穿于CHF發(fā)生、發(fā)展的全過程［6］。急性缺血激活的神經(jīng)內(nèi)分泌細胞因子之間相互作用，構(gòu)成一個互相調(diào)節(jié)的神經(jīng)內(nèi)分泌細胞因子網(wǎng)絡(luò)，如刺激內(nèi)皮素-1（endothelin-l，ET-1）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細胞介素-6（interleukin-6，IL-6）等細胞因子在心肌和血漿中高表達，共同促進心室重構(gòu)及CHF的發(fā)生發(fā)展［7-8］。TNF-α是細胞因子網(wǎng)絡(luò)的關(guān)鍵部分，正常心肌細胞不能產(chǎn)生TNF-α，但CHF時，在多種因素刺激下，心肌細胞大量產(chǎn)生TNF-α mRNA及表達TNF-α，進一步激活I(lǐng)L-6，并與IL-6協(xié)同發(fā)揮負性肌力和細胞毒效應(yīng)，誘導(dǎo)細胞凋亡及心肌抑制，在心室重構(gòu)過程中起重要的作用［9］。ET-1作為強縮血管物質(zhì)，可由內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞、心肌細胞、成纖維細胞分泌，以自分泌和旁分泌方式在局部起作用［10］。

課題組的研究結(jié)果表明，苓桂術(shù)甘湯在心梗后2 w給藥，可顯著改善模型大鼠血流動力學(xué)，逆轉(zhuǎn)心室重構(gòu)，同時降低血清TNF-α、IL-6和ET-1含量（P<0.05，P<0.01）。因此，我們認為苓桂術(shù)甘湯在心梗早期用藥可有效干預(yù)心室重構(gòu)、防治CHF，其機制與抑制細胞因子過度激活有關(guān)。

［1］趙丹丹，王階.慢性心力衰竭中醫(yī)藥治療概況［J］.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2011，13（5）：103-105.

［2］方海雁，黃金玲，桑方方，等.苓桂術(shù)甘湯對慢性心衰大鼠AngⅡ、ET-1、TNF-α 和IL-1β 的影響［J］.安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2010，29（2）：53-55.

［3］黃金玲，桑方方，王桐生，等.苓桂術(shù)甘湯對充血性心衰竭大鼠心臟指數(shù)與血流動力學(xué)的影響［J］.安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2009，28（5）：58-60.

［4］黃金玲，王慧慧，陳慧芳，等.正交試驗法優(yōu)選苓桂術(shù)甘湯的提取工藝［J］.安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2011，30（6）：65-67.

［5］王勇，高大中，殷躍輝，等.大鼠心肌梗死模型建立方法選擇及心電圖表現(xiàn)［J］.中國實驗動物學(xué)報，2011，19（6）：525-527.

［6］卞震炯，楊冬花.益氣溫陽活血方對慢性心力衰竭患者炎癥因子的影響［J］.山東中醫(yī)藥雜志，2008，27（3）：158-159.

［7］陳志亮，顧寧.中藥抑制炎性反應(yīng)干預(yù)心室重構(gòu)的研究現(xiàn)狀［J］.中國中醫(yī)急癥，2011，20（2）：291-293.

［8］立春，王勇，仇琪，等.腫瘤壞死因子在冠心病心肌缺血模型證候演變中的表達［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2011，26（5）：1 194-1 196.

［9］李瑩，宋耀明，黃嵐，等.培哚普利與坎地沙坦對慢性心力衰竭患者ET-1、IL-6、MMP-9 及左心室重塑的影響［J］.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2011，33（6）：633-635.

［10］杜優(yōu)優(yōu)，周勝華，周濤，等.骨髓間充質(zhì)干細胞移植對心肌梗死后炎性細胞因子表達的調(diào)節(jié)［J］.中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2008，12（8）：1 440-1 443.

Effects of Lingguizhugan Decoction on TNF-α，IL-6 and ET-1 of Rats With Acute Myocardial Infarction

Wang Liang，Hou Xiaoyan，Bao Yongliang，Huang Jinling，F(xiàn)ang Haiyan，Shi Hui，Cheng Xiaoyu
（Anhui University of TCM，Hefei Anhui 230038）

Objective：To observe the effects of Lingguizhugan decoction on TNF-α，IL-6 and ET-1 of rats with acute myocardial infarction （AMI） for 2 weeks，and explore the mechanism of Lingguizhugan decoction intervene ventricular remodeling of post-AMI.Method：AMI model was established by ligating coronary artery.The model rats were randomly divided into model group，captopril group，Lingguizhugan decoction low（2.1 g/kg），middle（4.2 g/kg）and high（8.4 g/kg）dosage groups.10 rats were selected as sham-operated group.Rats in sham-operated group and the other 5 groups have being administered medicine for 4 weeks constantly.The contents TNF-α，IL-6 and ET-1 in serum of rats were detected by ELISA.Result：Compared with sham-operated group，contents of TNF-α，IL-6 and ET-1 in model group were increased significantly（P＜0.01）.Compared with model group，contents of TNF-α，IL-6 and ET-1 were decreased in Lingguizhugan decoction low，middle，high dosage groups and captopril group（P＜0.01，P＜0.05）.Conclusion：Lingguizhugan decoction can prevent ventricular remodeling through regulating cytokine networks..

Lingguizhugan decoction；acute myocardial infarction；TNF-α；IL-6；ET-1

R285.5

A

1671-0258（2012）04-0023-03

國家自然科學(xué)基金面上項目（30973707）；安徽省自然科學(xué)基金項目（070413262X）；安徽省科技計劃項目（10021303024）

王靚，男，實驗師，從事中藥藥理實驗研究

黃金玲，女，醫(yī)學(xué)博士，教授，碩士研究生導(dǎo)師

2012-04-17