咳喘順丸治療慢性支氣管炎的實驗研究

甘海寧、黃萍、吳清和 、操紅纓、郭起岳

慢性支氣管炎是氣管、支氣管粘膜及其周圍組織的慢性非特異性炎癥。臨床上以咳嗽、咳痰或伴有喘息以及反復發(fā)作的慢性過程為特征，其本質是氣道的炎癥。有資料表明，老年人慢性支氣管炎的發(fā)病率可高達15%以上，是一種嚴重危害人民健康的常見病。其發(fā)病機制極為復雜，氣道炎癥及多種細胞、體液因子綜合作用下發(fā)生的小氣道平滑肌細胞增殖、纖維組織沉積等氣道重構可能為其發(fā)病機制之一[1]?？却樛杈哂薪∑⒃餄?、宣肺平喘、化痰止咳的功效，可用于慢性支氣管炎、支氣管哮喘、肺氣腫所致的氣喘胸悶、咳嗽痰多等癥。本研究主要觀察咳喘順丸對慢性支氣管炎模型小鼠的氣管和肺組織的保護作用和抗炎作用。

1 材料

1.1 受試藥物

咳喘順丸，由廣州陳李濟藥廠提供，批號:08136；麻杏止咳片，吉林本草堂制藥有限公司產品，批號：20080202；地塞米松片，廣東華南藥業(yè)集團有限公司產品，批號：070803；阿司匹林腸溶片， Bayer Vital GmbH產品，批號：BTA7X22。

1.2 主要試劑、儀器

氯化鈉注射液，太極集團西南藥業(yè)有限公司生產，批號：08060010；二甲苯，天津市富宇精細化工有限公司，批號：080823；甲醛，天津市科盟化工工貿有限公司，批號：20080423；JA1203N型電子天平，上海精密儀器有限公司產品。

1.3 實驗動物

SD系大鼠，SPF級，雄性，體重180～200g，由廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供（許可證號SCXK（粵）2003-0002粵監(jiān)證字2008A020）；NIH系小鼠，SPF級，體重18～22g，分別由廣東省醫(yī)學實驗動物中心、廣州中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供（許可證號SCXK（粵）2003-0002粵監(jiān)證字2008A022、SCXK（粵）2003-0020粵監(jiān)證字2008A003）。

2 實驗方法

2.1 對小鼠慢性支氣管炎模型的作用

取健康NIH小鼠，雌雄各半，隨機分為正常對照組、模型對照組、咳喘順丸低、中、高劑量及麻杏止咳片組，每組10只。造模方法：煙熏法復制小鼠慢支模型，采用特制塑料箱，容積0.1 m3，塑料箱頂部留有直徑1.5 cm通氣孔，以塑料管連接一圓錐形玻璃罩，將煙絲置于玻璃罩內點燃，煙霧沿連接管進入塑料箱內，每個塑料箱放置小鼠10只。除正常對照組外，各組動物每天均以煙熏造模，前10天每天上、下午各煙熏1次，后10天每天煙熏1次，每次30 min，煙絲用量為5 g/次，連續(xù)煙熏30次。從造模開始各組動物灌胃給藥（0.2 mL/10g），每天1次，對照組給予等容積蒸餾水，造模結束后繼續(xù)給藥7天。末次給藥后24 h處死動物，取氣管及肺，用10%福爾馬林固定，石蠟包埋切片，HE常規(guī)染色，光鏡觀察。

2.2 抗炎作用實驗

2.2.1 對大鼠棉球肉芽腫的影響 取雄性SD大鼠60只，隨機分為正常對照組、麻杏止咳片組、地塞米松組、咳喘順丸低、中、高劑量組，每組10只。試驗時，10%水合氯醛麻醉，剪除大鼠胸部毛，碘酒消毒，切開胸部皮膚，從切口向兩前肢腋下分別塞入25 mg無菌棉球各一個（棉球經高壓滅菌，并以青霉素和鏈霉素混合液浸泡后植入），縫合皮膚。術后第2天開始灌胃給藥（10 mL﹒kg-1），1次/天，對照組給予等容積蒸餾水，連續(xù)7天，末次給藥后24 h，頸椎脫臼處死大鼠，剝離棉球肉芽組織，90℃烘箱中干燥1 h，于電子天平精密稱重（1/1000g），將稱得的肉芽組織重量減去棉球原重即得肉芽腫凈重量，計算肉芽腫系數。肉芽腫系數=肉芽腫凈重（mg）/大鼠體重（g）×100%。

2.2.2 對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響 取小鼠NIH 60只，隨機分為正常對照組、咳喘順丸低、中、高劑量組、麻杏止咳片組、阿司匹林組，每組10只。灌胃給藥（0.2 mL/10g），每天1次，連續(xù)3天，對照組給予等量蒸餾水。末次給藥后1 h，將二甲苯50 μL均勻涂于小鼠右耳兩面，1 h后將小鼠頸椎脫臼處死，用8 mm打孔器分別在左、右耳同一部位打下圓耳片，稱重，以左、右耳重量之差作為耳腫脹度，比較各組差異。

2.2.3 對大鼠蛋清性足腫脹的影響 取SD大鼠60只，雄性，隨機分為對照組、咳喘順丸低、中、高劑量組、麻杏止咳片組、阿司匹林組，每組10只。每天灌胃給藥（1mL/100g）1次，連續(xù)3天，對照組給予等容積蒸餾水。試驗前每鼠左后足踝關節(jié)處用記號筆作一清晰橫線，排水法測鼠足正常體積作為基礎值，末次給藥1 h后每鼠左后足跖皮下注射鮮雞蛋清0.05 mL，測量致炎后1、2、3、4 h的足腫容積，減去基礎值，作為足腫脹度，比較各組間差異。

2.3 統(tǒng)計方法

所有實驗數據采用統(tǒng)計軟件SPSS13.0進行統(tǒng)計處理。

3 實驗結果

3.1 對小鼠慢性支氣管炎模型的作用

3.1.1 對小鼠慢性支氣管炎模型氣管的作用 正常對照組：氣管粘膜表面為假復層纖毛柱狀上皮，上皮完整，細胞表面可見纖毛，杯狀細胞較少。粘膜下層為疏松結締組織，偶見散在淋巴細胞。（圖1-A、B）

模型對照組：氣管表面粘膜出現(xiàn)細胞脫落，部分細胞表面纖毛倒伏或脫落，粘膜下層較多淋巴細胞浸潤。（圖1-C、D）

低劑量組、中劑量組、高劑量組、陽性組（麻杏止咳片）：鏡下所見相似，氣管粘膜上皮基本完整，為假復層纖毛柱狀上皮，細胞表面可見纖毛，偶見杯狀細胞，粘膜下層偶見散在淋巴細胞。（圖2-A、B、C、D）

實測距離采用商用精度為1 mm的激光測距儀定標，圖7(a)為實際采樣到的波形，前一個為激光發(fā)射波形，后一個為接收回波波形，飽和度為500%.圖7 (b)中傳統(tǒng)形心算法、窗寬自適應形心修正算法的誤差頻率分布分別為-3.3～-2.4 ns、0～0.7 ns，窗寬自適應形心修正算法精度有較大提升，但由于實測波形的微變形導致誤差范圍偏移.在飽和度50%～1 000%下計算窗寬自適應形心修正算法誤差平均值Ec，并基于實測波形對偏移進行修正，即

3.1.2 對小鼠慢性支氣管炎模型肺臟的作用 正常對照組：肺組織結構正常，肺泡壁未見血管擴張充血，肺泡壁及肺泡腔內未見滲出液及炎細胞浸潤。支氣管上皮粘膜完整，細胞排列整齊，管腔內未見滲出物，管壁周圍未見炎細胞浸潤。（圖3-A、B）

模型對照組：肺泡壁血管擴張充血，肺泡腔內未見滲出液及炎細胞浸潤。支氣管粘膜上皮完整，周圍可見血管充血及淋巴細胞為主的炎細胞浸潤。（圖3-C、D）

低劑量組、中劑量組、高劑量組、陽性組（麻杏止咳片）：鏡下所見相似，肺泡壁薄未見充血，肺泡腔清亮，無滲出物，支氣管粘膜上皮完整，無細胞脫落及炎細胞浸潤現(xiàn)象。（圖4-A、B、C、D）

綜上所述，咳喘順丸對小鼠慢性支氣管炎模型有治療效果，對肺組織及支氣管炎癥性改變有改善作用，其療效與實驗所用陽性藥物相似。

3.2 抗炎作用實驗結果

3.2.1 對大鼠棉球肉芽腫的影響

表1 咳喘順丸對大鼠棉球肉芽腫的影響（x±S ）

表1結果顯示，與對照組比較，咳喘順丸各劑量和麻杏止咳片對大鼠棉球肉芽腫均無明顯影響（p＞0.05）；地塞米松可明顯降低肉芽腫系數（p＜0.01）。

3.2.2 對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響

表2 咳喘順丸對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響（x±S ）

表2結果顯示，咳喘順丸中、高劑量均能夠顯著減輕二甲苯所致小鼠耳廓腫脹（p＜0.05～0.01）；麻杏止咳片和阿司匹林亦顯著減輕二甲苯所致小鼠耳廓腫脹（p＜0.01）。

3.2.3 對大鼠蛋清性足腫脹的影響

表3 咳喘順丸對大鼠蛋清性足腫脹的影響（x±S）

表3結果顯示，與空白組比較，咳喘順丸中、高劑量能夠抑制大鼠致炎后第2 h的足腫脹（p＜0.05）；阿司匹林可抑制大鼠致炎后1、2、3h的足腫脹（p＜0.05～0.01）。

4 討論

在傳統(tǒng)中醫(yī)的體系中并沒有支氣管炎的病名，根據其臨床的表現(xiàn)主要屬于“咳嗽”、“痰飲”、“氣喘”等。中醫(yī)認為，其病因病機主要為六淫之邪侵襲人體，衛(wèi)表受擾、肺失肅降、氣機失調、痰濁滋生，或嗜好煙酒、飲食肥甘、情志不遂等所致。有研究指出，慢性支氣管炎急性發(fā)作期主要病機為痰濁/痰火阻肺，肺失宣發(fā)肅降，肺氣上逆則咳嗽、喘促[2]。

慢性支氣管炎是氣管、支氣管粘膜及其周圍組織的慢性非特異性炎癥，其病理特點為支氣管腺體增生和粘膜分泌增多。采用煙熏法造模成功后絕大多數實驗小鼠的氣管以及各級支氣管鏡下可見不同程度的慢性炎細胞（包括淋巴細胞、漿細胞、單核細胞）和少數中性粒細胞浸潤。粘膜上皮可見纖毛倒伏、粘連或脫落，杯狀細胞明顯增多，胞體增大。管腔內有較多的分泌物以及巨噬細胞，伴行各級氣管的小血管周圍亦可見明顯的炎細胞浸潤。肺泡間隔增寬，內有炎細胞浸潤及毛細血管擴張、充血,肺邊緣可見支氣管擴張以及肺氣腫[3]。由圖1-C、D和圖3-C、D顯示，模型組小鼠的氣管和肺部病理改變與文獻報道相符，說明動物模型成功；與模型組相比，咳喘順丸能有效地改善氣管和肺部的病變，明顯改善肺泡壁充血和滲出，減少炎細胞浸潤。

研究表明，不少的炎癥介質、炎癥因子參與慢性支氣管炎的的進程，如IL-8、IL-6、IL-4、TNF-α、SIgA、ICAM-1等[4～9]，引發(fā)炎癥反應。咳喘順丸能夠顯著減輕二甲苯所致小鼠耳廓腫脹和抑制大鼠蛋清致炎后的足腫脹，說明咳喘順丸具有一定的抗炎作用。

咳喘順丸由魚腥草、茯苓、瓜蔞仁、蘇子、半夏、陳皮、紫菀、冬花、杏仁等藥物組成，主治痰濕蘊肺引起的咳嗽，喘息等病癥，具有健脾燥濕，宣肺平喘，化痰止咳之功。本次實驗從咳喘順丸對慢性支氣管炎小鼠模型的保護作用和對炎癥的影響這兩方面，初步探討了咳喘順丸治療支氣管炎的藥理學基礎。

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