付 建，蘇貴勇，趙海橋

(1.山東方明藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，山東菏澤274500;2.中國(guó)藥科大學(xué)，江蘇南京210009;3.山東大學(xué)藥學(xué)院，山東 濟(jì)南250012)

鹽酸氨溴索(Ambroxol hydrochloride)為溴己新的體內(nèi)活性代謝物，適用于伴有痰液分泌不正常及排痰功能不良的急性、慢性肺部疾病的治療;手術(shù)后肺部并發(fā)癥的預(yù)防性治療;早產(chǎn)兒及新生兒的嬰兒呼吸窘迫癥(IRDS)的治療?！吨袊?guó)藥典》2010年版［1］僅收載了原料藥及口服制劑的含量和有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法，對(duì)注射液并未收載，進(jìn)口藥品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)(標(biāo)準(zhǔn)號(hào):JX20030067)及文獻(xiàn)［2］雖采用高效液相色譜法測(cè)定其含量和有關(guān)物質(zhì)，但對(duì)鹽酸氨溴索中可能存在的雜質(zhì)沒有控制，流動(dòng)相組成及方法各不相同，本文建立了新的高效液相色譜法測(cè)定鹽酸氨溴索注射液的含量和有關(guān)物質(zhì)，該方法快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好、靈敏度高，可用于鹽酸氨溴索注射液的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀(日本Shimadzu系列，LC－10Avp泵，SPD－10Avp紫外檢測(cè)器，CBM－10A plus系統(tǒng)控制器)，F(xiàn)ive Easy 20型精密 pH計(jì)(瑞士 Mettler Toledo)，AB265S型電子天平(瑞士Mettler Toledo)。

1.2 試藥及試劑 鹽酸氨溴索注射液(Boehringer Ingelheim Espana，S.A.西班牙勃林格殷格翰公司生產(chǎn)，規(guī)格 2 mL∶15 mg，批號(hào)S0423;山東方明藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司試制樣品，規(guī)格 2 mL∶15 mg，批號(hào) 081201，081202，081203)。鹽酸氨溴索對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):100694－200401;含量:100.0%)，鹽酸氨溴索雜質(zhì) B［反式 －4 －(6，8－二溴－1，4二氫喹唑啉－3(2H)－基)環(huán)己醇，批號(hào):05.04.08.06;含量:97.9%］，鹽酸氨溴索雜質(zhì) C(反式 －4 －［［(E)－2－氨基 －3，5－二溴芐基］氨基］環(huán)己醇，批號(hào):05.03.09.03;含量:96.6%)，鹽酸氨溴索雜質(zhì) D(順式 －4 －［(2 － 氨基 －3，5 二溴芐)氨基］環(huán)己醇，批號(hào):05.05.09.12;含量:98.6%)，以上三種有關(guān)物質(zhì)均為歐洲藥典標(biāo)準(zhǔn)品，購(gòu)于德國(guó)LGC有限公司。乙腈為色譜純;其他試劑為分析純，水為本公司制水車間生產(chǎn)純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 鹽酸氨溴索含量測(cè)定

2.1.1 樣品溶液的制備 精密量取本品樣品2 mL，兩份平行樣，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。

2.1.2 色譜條件 用 Welchrom －C18(4.6 mm ×200 mm，5 μm)色譜柱;以0.01 mol·L－1磷酸氫二銨溶液(用磷酸調(diào)pH值至7.0)－乙腈(50∶50)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為248 nm;流速為1.0 mL·mL－1;理論板數(shù)按鹽酸氨溴索峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.1.3 線性關(guān)系試驗(yàn) 精密稱取鹽酸氨溴索對(duì)照品15.21 mg，置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取 0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL，各置 10 mL 量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。分別精密量取供試品溶液20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，量取峰面積。以峰面積A為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為:A=32 395 046C+104 717，相關(guān)系數(shù) r=0.999 9，即鹽酸氨溴索在0.091 ～0.212 mg· mL－1的濃度范圍內(nèi)，其濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.1.4 回收率試驗(yàn) 取鹽酸氨溴索對(duì)照品約12、15、18 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，按處方量加入輔料，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。每個(gè)濃度配制3份，共9份，分別編號(hào)為1～9。另稱取鹽酸氨溴索對(duì)照品約15 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。精密量取上述溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖;計(jì)算回收率。試驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

由上述試驗(yàn)結(jié)果可知，本法回收率良好。

2.1.5 精密度試驗(yàn) 將線性項(xiàng)下濃度為 0.152 1 mg·mL－1的鹽酸氨溴索對(duì)照品溶液重復(fù)進(jìn)樣，測(cè)其峰面積，結(jié)果RSD=0.62%(n=6)，說(shuō)明本法儀器精密度良好。

2.1.6 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密量取本品2 mL，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。在室溫(25 ℃)條件下分別于第0、1、2、4、6、8 h，精密量取 20 μL 注入液相色譜儀，記錄色譜圖，量取峰面積，結(jié)果RSD=0.44%(n=6)，說(shuō)明供試品溶液在室溫(25℃)條件下8 h內(nèi)具有良好穩(wěn)定性。

2.1.7 空白輔料干擾試驗(yàn) 按處方比例配制空白輔料溶液，用與含量測(cè)定項(xiàng)下相同方法處理該溶液并在本實(shí)驗(yàn)色譜條件下進(jìn)樣，色譜圖見圖1。說(shuō)明空白輔料對(duì)鹽酸氨溴索的含量測(cè)定無(wú)干擾。

圖1 鹽酸氨溴索對(duì)照品色譜圖

2.1.8 樣品含量測(cè)定 精密量取本品2 mL，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，另取鹽酸氨溴索對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1 mL約含0.15 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液，分別精密量取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，量取峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果四批樣品(S0423，081201，081202，081203)含量分別為 99.6%，101.6%，102.0%，100.9%。

2.2 有關(guān)物質(zhì)分析

2.2.1 色譜條件 條件同“2.1.2”。

2.2.2 保留時(shí)間的測(cè)定 取有關(guān)物質(zhì)B、C、D對(duì)照品，分別用流動(dòng)相制成1.5 μg· mL－1的溶液，立即進(jìn)樣，有關(guān)物質(zhì)B、C、D 的保留時(shí)間分別為 11.1、46.0、16.2 min。

2.2.3 有關(guān)物質(zhì)色譜圖 取有關(guān)物質(zhì) B、C、D對(duì)照品及鹽酸氨溴索對(duì)照品適量，用流動(dòng)相溶解后，取20 μL進(jìn)樣。在本實(shí)驗(yàn)條件下，有關(guān)物質(zhì)B、C、D及鹽酸氨溴索色譜峰分離良好，色譜圖見圖2。

圖2 鹽酸氨溴索注射液有關(guān)物質(zhì)HPLC色譜圖

2.2.4 破壞性試驗(yàn) 酸破壞溶液:精密量取供試品溶液2 mL，置20 mL 量瓶中，加0.1 mol·L－1的鹽酸溶液0.5 mL，加流動(dòng)相適量，水浴加熱1 h，取出冷卻，用0.1 mol·L－1氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至中性，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，過濾，即得。取空白輔料溶液2 mL同法操作，作為酸破壞空白溶液。

堿破壞溶液:精密量取供試品溶液2 mL，置20 mL量瓶中，加 0.1mol·L－1氫氧化鈉溶液 0.5 mL，加流動(dòng)相適量，水浴加熱1 h，取出冷卻，用0.1 mol·L－1鹽酸溶液調(diào)節(jié) pH 值至中性，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，過濾，即得。取空白輔料溶液2 mL同法操作，作為堿破壞空白溶液。

氧化破壞溶液:精密量取供試品溶液2 mL，置20 mL量瓶中，加雙氧水1滴，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，過濾，即得。取空白輔料溶液2 mL同法操作，作為氧化破壞空白溶液。

高溫破壞溶液:精密量取供試品溶液2 mL，置20 mL量瓶中，加流動(dòng)相適量，水浴加熱2 h，取出冷卻，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，過濾，即得。

光照破壞溶液:精密量取供試品溶液2 mL，置20 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，在照度為4 500 Lx的條件下放置2 d，過濾，即得。

精密量取上述溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。主峰與各降解產(chǎn)物峰分離度均大于1.5，說(shuō)明該色譜條件適用于有關(guān)物質(zhì)的檢查。

2.2.5 線性關(guān)系試驗(yàn) 精密稱取鹽酸氨溴索對(duì)照品18.73 mg，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取 0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL，置 50 mL 量瓶中，各加流動(dòng)相稀釋至刻度，作為供試品溶液。量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖;以鹽酸氨溴索峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，得回歸方程為 Y=33 198X+6 318.4(r=0.999 8)，結(jié)果表明，鹽酸氨溴索在 2.25 ～5.24 μg·mL－1的濃度范圍內(nèi)，其濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密稱取鹽酸氨溴索雜質(zhì)B對(duì)照品5.14 mg，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取3 mL，置20 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL，置 10 mL 量瓶中，各加流動(dòng)相稀釋至刻度，分別精密量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖;以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，得回歸方程為Y=24 881X+742.9(r=0.999 9)，結(jié)果表明，鹽酸氨溴索雜質(zhì) B溶液在 0.91 ～2.11 μg·mL－1的濃度范圍內(nèi)，其濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密稱取鹽酸氨溴索雜質(zhì)C對(duì)照品5.08 mg，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取3 mL，置20 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL，置 10 mL 量瓶中，各加流動(dòng)相稀釋至刻度，分別精密量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖;以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，得回歸方程為Y=33 153X+9 335.3(r=0.999 6)，結(jié)果表明，鹽酸氨溴索雜質(zhì)C 溶液在0.88 ～2.06 μg·L－1的濃度范圍內(nèi)，其濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密稱取鹽酸氨溴索雜質(zhì) D對(duì)照品10.71 mg，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取3 mL，置20 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取 0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL，置 10 mL 量瓶中，各加流動(dòng)相稀釋至刻度，分別精密量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖;以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，得回歸方程Y=29 720.5X+98.74(r=0.999 9)，結(jié)果表明，鹽酸氨溴索雜質(zhì)D 溶液在0.95 ～2.22 μg·L－1的濃度范圍內(nèi)，其濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.2.6 定量限試驗(yàn) 精密稱取鹽酸氨溴索對(duì)照品12.62 mg，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，精密量取1 mL，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，量取溶液20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，由圖知，信噪比約為10∶1，即鹽酸氨溴索的定量限為0.5 ng。連續(xù)進(jìn)樣6針，RSD為 2.63%。

精密稱取鹽酸氨溴索雜質(zhì)B對(duì)照品5.16 mg，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，精密量取2 mL，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，量取溶液20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，由圖知，信噪比約為10∶1，即鹽酸氨溴索雜質(zhì)B的定量限為0.81 ng。連續(xù)進(jìn)樣6針，RSD為3.85%。

精密稱取鹽酸氨溴索雜質(zhì)D對(duì)照品5.27 mg，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，精密量取2 mL，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，量取溶液20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，由圖知，信噪比約為10∶1，即鹽酸氨溴索雜質(zhì)D的定量限為0.83 ng。連續(xù)進(jìn)樣6針，RSD為2.55%。

精密稱取鹽酸氨溴索雜質(zhì)C對(duì)照品5.09 mg，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，精密量取1 mL，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，精密量取2 mL，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，量取溶液20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，由圖知，信噪比約為10∶1，即鹽酸氨溴索雜質(zhì)C的定量限為1.57 ng。連續(xù)進(jìn)樣6針，RSD為8.83%。

由以上試驗(yàn)數(shù)據(jù)可知，本品連續(xù)進(jìn)樣6針，除雜質(zhì)C峰面積變化比較大，其他峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差均小于5.0%，符合規(guī)定。在試驗(yàn)過程中觀察雜質(zhì)C在溶液中不穩(wěn)定。詳細(xì)數(shù)據(jù)見精密度試驗(yàn)及穩(wěn)定性試驗(yàn)。

2.2.7 檢測(cè)限試驗(yàn) 精密量取鹽酸氨溴索定量限試驗(yàn)項(xiàng)下溶液3 mL，置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，信噪比約為3∶1，即鹽酸氨溴索的最小檢出量為0.25 ng。

精密量取鹽酸氨溴索雜質(zhì)B定量限試驗(yàn)項(xiàng)下溶液3 mL，置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，信噪比約為3∶1，即鹽酸氨溴索雜質(zhì)B的最小檢出量為0.24 ng。

精密量取鹽酸氨溴索雜質(zhì)D定量限試驗(yàn)項(xiàng)下溶液3 mL，置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，信噪比約為3∶1，即鹽酸氨溴索雜質(zhì)D的最小檢出量為0.25 ng。

精密量取鹽酸氨溴索雜質(zhì)C定量限試驗(yàn)項(xiàng)下溶液3 mL，置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，信噪比約為3∶1，即鹽酸氨溴索雜質(zhì)C的最小檢出量為0.47 ng。

2.2.8 精密度試驗(yàn) 精密稱取鹽酸氨溴索對(duì)照品9.75 mg，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，精密量取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，連續(xù)進(jìn)樣6次，量取峰面積，RSD為0.55%，鹽酸氨溴索溶液精密度良好。

取鹽酸氨溴索雜質(zhì)B、雜質(zhì)C、雜質(zhì)D對(duì)照品，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1 mL約含1.5 μg的混合溶液，搖勻，精密量取20 μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，量取峰面積，雜質(zhì)B的RSD=1.39%，雜質(zhì)C的RSD=6.88%。雜質(zhì)D的RSD=0.56%。由以上數(shù)據(jù)可以看出，雜質(zhì)B與雜質(zhì)D溶液比較穩(wěn)定，雜質(zhì)C溶液峰面積變小，說(shuō)明雜質(zhì)C溶液不穩(wěn)定。

2.2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn) 供試品溶液穩(wěn)定性:精密量取本品5 mL，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，在室溫(25 ℃)條件下，分別于0、1、2、4、6、8 h，精密量取20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按面積歸一化法計(jì)算。結(jié)果本品有關(guān)物質(zhì)檢查供試品溶液在室溫(25℃)條件下，8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

雜質(zhì)穩(wěn)定性:取鹽酸氨溴索雜質(zhì)B、雜質(zhì)C、雜質(zhì)D對(duì)照品，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1 mL約含1.5 μg的混合溶液，搖勻，在室溫(25 ℃)條件下，分別于 0、2、4、6、8 h，精密量取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，量取峰面積，雜質(zhì)B的RSD=1.77%，雜質(zhì)C的RSD=17.45%，雜質(zhì)D的RSD=1.91%。雜質(zhì)B與雜質(zhì)D溶液在室溫(25℃)條件下，8 h內(nèi)基本穩(wěn)定;雜質(zhì)C溶液變化比較大，故雜質(zhì)溶液需臨用新配。

2.2.10 耐用性 調(diào)整有關(guān)物質(zhì)測(cè)試條件，分別考察流動(dòng)相比例(45∶55、55∶45)、流動(dòng)相 pH 值(6.8、7.2)、柱溫變化(30℃、35 ℃、40 ℃)、流速變化(0.8 mL·min－1、1.0 mL·min－1、1.2 mL·min－1)、檢測(cè)波長(zhǎng)變化(243 nm、253 nm)及色譜柱變化時(shí)，測(cè)定結(jié)果的變化。在各條件下進(jìn)樣，供試品溶液雜質(zhì)峰均能與主峰有效分離，且在混合溶液中各雜質(zhì)峰均能與主峰分離，故本色譜條件適合本品有關(guān)物質(zhì)檢查。

2.2.11 樣品溶液的測(cè)定 精密量取本品5 mL，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液;精密量取供試品溶液1 mL，置200 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液;另取鹽酸氨溴索雜質(zhì)B、雜質(zhì)C、雜質(zhì)D對(duì)照品，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1 mL約含1.5 μg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液(臨用新配)。照

2.1.2 項(xiàng)下的色譜條件，取對(duì)照溶液20 μL注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的25%，精密量取供試品溶液、對(duì)照溶液及對(duì)照品溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分色譜峰保留時(shí)間的4倍。供試品溶液記錄的色譜圖中如顯與雜質(zhì)B、雜質(zhì)C或雜質(zhì)D峰保留時(shí)間一致的色譜峰(雜質(zhì)對(duì)照品溶液出峰順序?yàn)殡s質(zhì)B、雜質(zhì)D、雜質(zhì)C)，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算各雜質(zhì)的含量，各雜質(zhì)的量不得過鹽酸氨溴索標(biāo)示量的0.2%，量取各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照溶液的主峰面積(0.5%)。各批樣品測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 鹽酸氨溴索注射液有關(guān)物質(zhì)檢查

3 討論

本實(shí)驗(yàn)對(duì)HPLC法測(cè)定鹽酸氨溴索注射液含量和有關(guān)物質(zhì)的方法學(xué)進(jìn)行了研究，結(jié)果顯示，鹽酸氨溴索在0.091～0.212 mg·mL－1的濃度范圍內(nèi)，其濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù) r=0.999 9，回收率為 99.60%，RSD 為0.82%(n=9)，精密度、穩(wěn)定性都較好，故該法用于測(cè)定鹽酸氨溴索注射液的含量和有關(guān)物質(zhì)，專屬性強(qiáng)、簡(jiǎn)便，重復(fù)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。在有關(guān)物質(zhì)測(cè)定中，隨著放置時(shí)間的延長(zhǎng)，有關(guān)物質(zhì)會(huì)增加，因此待測(cè)樣品及對(duì)照品配制好應(yīng)立即進(jìn)樣，而且應(yīng)注意避光。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版(二部)［S］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:765－768.

［2］崔嵐，沈金芳.反相高效液相色譜法測(cè)定鹽酸氨溴索注射液的含量［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2005，24(10):943 －944.