燕艷 李牧 季志會 杜偉 董金 張春蘭 陳健

1.北京市通州區(qū)科學(xué)技術(shù)委員會，北京 101101；2.北京市通州區(qū)植物保護(hù)站，北京 101117

原子吸收分光光度法快速檢測化妝品中金屬硫蛋白含量

燕艷1李牧1季志會1杜偉1董金1張春蘭1陳健2

1.北京市通州區(qū)科學(xué)技術(shù)委員會，北京 101101；2.北京市通州區(qū)植物保護(hù)站，北京 101117

目的快速檢測化妝品中金屬硫蛋白（MT）含量。方法利用原子吸收分光光度法，在檢測波長213.9 nm條件下對化妝品樣品A、B、C、D進(jìn)行分析，外標(biāo)法對化妝品中的MT進(jìn)行定量測定，探討該方法的條件。結(jié)果建立了利用原子吸收分光光度計(jì)快速檢測食品中MT的分析方法，該方法線性良好，重復(fù)性高，加樣回收率為92.4%～96.4%。

結(jié)論該方法檢測化妝品中MT含量具有重大意義，具有一定的先進(jìn)性和實(shí)際意義，可為測定化妝品中的MT提供可靠的手段，能更好地滿足實(shí)際樣品分析。

金屬硫蛋白；原子吸收分光光度法；化妝品

金屬硫蛋白（metallothionein，MT）是一類廣泛存在于生物界、低分子量、富含半胱氨酸、可被金屬和其他因素誘導(dǎo)合成的細(xì)胞內(nèi)金屬結(jié)合非酶蛋白質(zhì)。MT在生物體內(nèi)有很重要的生理作用：清除體內(nèi)自由基、防止機(jī)體衰老；解除重金屬的毒性；參與體內(nèi)微量元素的代謝；增強(qiáng)機(jī)體對各種不良狀態(tài)的適應(yīng)能力；鋅元素的貯存庫；防止細(xì)胞癌變等[1-2]。

利用MT的這些活性，研究其作為食品、化妝品添加劑的應(yīng)用已成為當(dāng)今的前沿課題之一。目前測定MT的方法較多，主要有高效液相色譜法和極譜法等，但這些方法的重復(fù)性較差，在實(shí)際樣品中沒有得到廣泛的應(yīng)用[3-5]。采用原子吸收分光光度法成功地分析蛋白質(zhì)已有了大量報(bào)道，但由于食品、化妝品成分比較復(fù)雜，能成功地測定食品中MT的方法還未見報(bào)道。為此，利用原子吸收分光光度計(jì)檢測食品、化妝品中MT含量具有重大意義，本實(shí)驗(yàn)研究了從化妝品中檢測MT的方法，探討了該方法的條件，建立了利用原子吸收分光光度法快速檢測食品中金屬硫蛋白的分析方法，取得了比較滿意的結(jié)果。

1 儀器與試藥

原子吸收分光光度計(jì)（北京普析通用TAS990AFG）；離心機(jī)（日立公司）；勻漿器（上海標(biāo)本）；0.02 mol/L Tris-HCl（pH 8.6）；Zn標(biāo)準(zhǔn)液0.1、0.3、0.6、1.0μg/mL；MT純度為90%，購于北京盛京華公司；化妝品：A（鳳凰甘油一號，上海百雀羚日用化學(xué)有限公司，產(chǎn)許許可證：XK16-1080418，批號：3B30UJI），B（大寶SOD蜜，北京大寶化妝品有限公司，批號：1310270A），C（海派SOD蜜，上海雅美日用化學(xué)品廠，生產(chǎn)許可證：XK16-1086809,批號：9D161201），D（雅霜，上海家化聯(lián)合股份有限公司，生產(chǎn)許可證：XK16-108 0443，批號：IDDJJ）；硝酸（色譜純）。

2 方法與結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)方法

分別取10 g化妝品樣品A、B、C、D分別加入5 mg/mL MT 10μL定量加入10 mL硝酸，120℃電熱板上加熱至白煙。原子吸收設(shè)備檢測波長：213.9 nm，光譜帶寬：0.4 nm，濾波系數(shù)：0.3，推薦燈電流：3 mA，負(fù)高壓：346.25 V，燃燒頭高度：6 mm，積分時間：3 s，空氣壓力：0.24 mPa，乙炔壓力及流量：0.05mPa及1 300mL/min。

2.2 工作曲線的繪制

分別配制質(zhì)量濃度為0.1、0.3、0.6、1.0μg/mL的Zn標(biāo)準(zhǔn)液制定標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線法求出溶液的Zn含量，按照以下公式計(jì)算金屬硫蛋白含量：

2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3.1 工作曲線和線性范圍對0.1、0.3、0.6、1.0μg/mL標(biāo)準(zhǔn)濃度連續(xù)測定3次，結(jié)果見圖1。平均峰高與含量的線性方程為y=0.503 7x，相關(guān)系數(shù)r為0.997 8，提示線性良好。

2.3.2 方法的準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性取分別取10 g化妝品樣品A、B、C、D分別加入5mg/mLMT標(biāo)準(zhǔn)液。按實(shí)驗(yàn)方法對樣品進(jìn)行處理，定容至10mL連續(xù)做3個平行，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表1。運(yùn)用公式可看出用本法測定化妝品中的MT，加樣回收率為92.4%～96.4%。

表1 MT加樣回收率的測定結(jié)果

3 討論

MT的檢測方法都是建立在MT的理化特性和生物特性以及免疫學(xué)特性基礎(chǔ)上，主要分以下幾大類：金屬親和分析法，它的缺陷在于，采用的金屬除與MT結(jié)合外，還與其他一些小分子量化合物結(jié)合，由于利用金屬含量間接推算MT含量，因此特異性較差；電化學(xué)法是一種可以直接用于測定MT總量的方法，具有一定的特異性；色譜分析法主要有HPLC、RP-HPLC、HPLC-ICP-MS、HPLC-AAS等；蛋白質(zhì)分析法/免疫法，尤其適合于微量檢測[6-8]，原子吸收分光光度法測定MT雖已有一些報(bào)道，但大多數(shù)停留在分離條件的探討和研究方面，未見應(yīng)用于實(shí)際樣品的定量分析，本文利用原子吸收分光光度計(jì)快速檢測化妝品中的MT含量應(yīng)用于實(shí)際樣品的定量分析，該方法重現(xiàn)性較好，操作簡單，適于實(shí)際樣品的分析。因此本文建立的檢測方法，具有一定的先進(jìn)性和實(shí)際意義，為化妝品中的MT檢測方法的確立奠定了基礎(chǔ)。

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Content determ ination of metallothionein in cosmetics by atom ic absorption spectrophotometer rapid ly

YAN Yan1 LIMu1 JIZhihui1 DUWei1 DONG Jin1 ZHANG Chunlan1 CHEN Jian2
1.Science and Technology Committee in Tongzhou District of Beijing,Beijing 101101,China;2.Plant Protection Station in Tongzhou Districtof Beijing,Beijing 101117,China

ObjectiveTo rapidly detectmetallothionein(MT)content in cosmetics.MethodsWith themethod of atomic absorption spectrophotometer,cosmetic sample of A,B,C and D were analyzed under the conditions of 213.9 nm as detection wavelength.And quantitative determination of MT in cosmeticsweremeasured by external standard method to discuss the condition of thismethod.ResultsAn analysismethod in food fast detection of MT by atomic absorption spectrophotometer was established.Thismethod had good linearity,high repeatability.And its adding standard recovery was 92.4%-96.4%.ConclusionThismethod has certain advancement and practical significance for detection of MT content in cosmetics,and it has provided a reliablemeans for detection of MT content in cosmetics to satisfy the actual sample analysis.

Metallothionein;Atomic absorption spectrophotometer;Cosmetic

R927

A

1673-7210（2012）10（a）-0118-02

北京市科技計(jì)劃課題（課題編號：Z0006317043591）。

燕艷（1982.1-），女，河北昌黎人，東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)專業(yè)碩士研究生，工程師；研究方向：生物化學(xué)與分子生物學(xué)。

季志會（1961.9-），女，北京市委黨校行政管理碩士研究生，研究員；研究方向：農(nóng)產(chǎn)品深加工。

2012-05-04 本文編輯：衛(wèi)軻）