張云昌 趙衛(wèi)強 王鳳安

1.邢臺礦業(yè)集團總醫(yī)院消化外科，河北邢臺 054000；2.邢臺威縣章臺中心衛(wèi)生院，河北威縣 054702；3.河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院胃腸外科，河北石家莊 050000

大腸癌中NDRG-1及P53的表達及其與腫瘤浸潤轉移的關系

張云昌1趙衛(wèi)強2王鳳安3

1.邢臺礦業(yè)集團總醫(yī)院消化外科，河北邢臺 054000；2.邢臺威縣章臺中心衛(wèi)生院，河北威縣 054702；3.河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院胃腸外科，河北石家莊 050000

目的探討抑癌基因NDRG-1及P53在大腸癌組織中的表達及其與腫瘤浸潤轉移的關系。方法用免疫組化法檢測NDRG-1及P53蛋白在大腸癌組織及正常大腸組織中的表達情況。結果NDRG-1在大腸癌組織中的表達明顯降低，與腫瘤浸潤、淋巴轉移情況密切相關（P＜0.05）。P53（突變型）基因在大腸癌組織中的表達明顯增高，與腫瘤浸潤密切相關（P＜0.05），而與腫瘤轉移無關（P＞0.05）。結論抑癌基因NDRG-1與P53（野生型）在大腸癌浸潤過程中具有較為明顯的協(xié)同或調(diào)控作用，在淋巴結轉移過程中兩者無明顯的協(xié)同作用，NDRG-1與P53在大腸癌組織中的表達具有相關性。檢測兩基因對臨床的大腸癌手術治療及預后具有一定的參考意義。

大腸癌；NDRG-1；P53

大腸癌是最常見的惡性腫瘤之一，在我國近20年來發(fā)病率逐年遞增，但腫瘤的病因尚未明確。目前的研究表明抑癌基因在大腸癌的發(fā)展轉移中起著非常的重要作用，NDRG-1和P53均為抑癌基因，且NDRG-1抑制大腸癌發(fā)展轉移的過程與P53基因相關。本研究采用免疫組化（S-P）法，檢測正常大腸組織及大腸癌中NDRG-1及P53的表達，觀察兩者在大腸癌組織中的表達情況及相關性，探討這兩種抑癌基因與腫瘤浸潤及轉移的關系，以期對臨床大腸癌治療及預后的判斷提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2007～2008年河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院手術切除并經(jīng)病理組織學證實的大腸癌標本38例（腫瘤組），其中，男21例，女17例，平均年齡58歲，入選病例皆未進行任何化療或放療。15例正常大腸組織取自經(jīng)病理證實的外傷或良性疾病患者（正常組），其中，男9例，女6例，平均年齡56歲。兩組一般情況比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 試劑

NDRG-1兔抗人多克隆抗體和P53鼠抗人單克隆抗體分別購自英國Abcam公司和美國Santa Cruz公司；免疫組化染色SP試劑盒購自北京中杉公司。

1.3 方法

標本切片厚4μm，采用免疫組化法，按試劑盒使用說明書操作，PBS代替一抗作為陰性對照。

1.4 結果判斷

P53蛋白定位于細胞核，連續(xù)觀察10個高倍視野，出現(xiàn)黃或褐色細胞數(shù)≥25%為陽性。NDRG-1蛋白定位于細胞漿內(nèi)，連續(xù)觀察10個高倍視野，每個視野記數(shù)100個細胞，陽性為出現(xiàn)黃至棕褐色顆粒，結果判斷采用半定量積分法。①據(jù)陽性細胞所占百分比：≤5%計為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，＞50%為3分；②據(jù)著色強弱：無顯色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。兩項乘積為最終結果：0分為陰性，1～2分為弱陽性（±），3～6分為陽性（+），＞6分為強陽性（++），其中，≥3分統(tǒng)計為陽性。

1.5 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗；采用Spearman秩相關分析兩種蛋白表達的相關性。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 NDRG-1及P53蛋白在腫瘤組及正常組中的表達情況

腫瘤組中NDRG-1蛋白表達陽性率為21.05%（8/38），正常組中其表達陽性率為66.67%（10/15）；兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。腫瘤組中P53蛋白表達陽性率為81.58%（31/38），正常組中其表達陽性率為6.67%（1/15）；兩組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 NDRG-1及P53在腫瘤組及正常組中的表達情況（例）

2.2 NDRG-1及P53與腫瘤浸潤、轉移的關系

NDRG-1在大腸癌組織中的表達與腫瘤浸潤程度及淋巴結轉移密切相關（P＜0.05），P53的表達與腫瘤浸潤程度有關（P＜0.05），與淋巴結轉移無關（P＞0.05）。見表2。

表2 NDRG-1及P53在大腸癌組織中的表達及其與腫瘤浸潤、轉移的關系

2.3 NDRG-1與P53（突變型）基因在大腸癌組織中表達的相關性

Spearman秩相關分析發(fā)現(xiàn)，NDRG-1與P53（突變型）基因在大腸癌組織中表達呈負相關，相關系數(shù)（r）為-0.402（P= 0.01）。見表3。

表3 NDRG-1與P53（突變型）在大腸癌組織中表達的相關性

3 討論

腫瘤發(fā)生發(fā)展及轉移是個非常復雜的過程，到目前還不確切清楚其原因。抑癌基因具有抑制腫瘤生長的作用，NDRG-1基因為新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，是由Van等[1]通過觀察結腸癌細胞株HT29-D4體外誘導分化過程中基因表達的變化發(fā)現(xiàn)并首先命名的。NDRG-1基因在結腸上皮細胞分化過程中高表達，而在結腸腫瘤細胞中呈現(xiàn)低表達。研究發(fā)現(xiàn)，NDRG-1對腫瘤有比較明顯的抑制作用，可能是通過參與P53和PTEN基因的調(diào)控，抑制VEGF基因表達，抑制腫瘤形成新生血管，達到抑制腫瘤浸潤和轉移的目的[2]。Stein等[3]也發(fā)現(xiàn)，NDRG-1是P53的一個靶基因，通過P53基因的調(diào)控作用來抑制腫瘤的發(fā)展。Kurdistani等[4]通過檢測多種瘤株和瘤組織中NDRG-1基因的表達情況，發(fā)現(xiàn)瘤株和瘤組織中NDRG-1基因均為低表達，而在NDRG-1基因高表達時則明顯可以抑制腫瘤細胞的生長。在體外試驗中已經(jīng)證明，NDRG-1可以抑制腫瘤生長。馬薇等[5]研究發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌淋巴結轉移中NDRG-1低表達，表明與腫瘤轉移有關。

野生型P53基因是重要的抑癌基因，在細胞增殖、凋亡過程中起重要的作用，但P53基因不穩(wěn)定，易突變，突變后的P53基因失去對細胞增殖、凋亡的調(diào)控作用，易導致腫瘤發(fā)生。人類幾乎所有腫瘤中都有不同程度的P53基因突變，包括乳腺癌、肝癌、直腸癌、胃癌等許多腫瘤中突變型P53表達均明顯增高[6]。

本研究發(fā)現(xiàn)，NDRG-1在大腸癌組織中的表達明顯降低。NDRG-1的表達情況與大腸癌浸潤程度、淋巴結轉移情況密切相關，表明其在大腸癌的浸潤轉移中起著抑制作用。劉瑛瑛等[7]研究也發(fā)現(xiàn)，NDRG-1對HT-29人結腸癌細胞株侵襲和遷移有抑制作用。本研究顯示，P53（突變型）基因在大腸癌組織中的表達明顯增高，與腫瘤浸潤程度密切相關，與淋巴結轉移無關，表明P53基因突變可能參與調(diào)控大腸癌的發(fā)展過程，且兩種基因在大腸癌組織中的表達呈負相關。說明野生型P53與NDRG-1同為抑癌基因，在大腸癌的發(fā)展、浸潤過程中起著協(xié)同作用，且可能P53基因對NDRG-1在大腸癌浸潤及轉移的作用起著控制作用。Wang等[2]的研究也說明了NDRG-1通過P53調(diào)控參與抑制腫瘤浸潤、轉移。因此，檢測該兩種基因在大腸癌組織中的表達情況及其與腫瘤浸潤、轉移的關系對腫瘤診斷治療有較大的幫助。

[1]Van BN，Dinjens WN，Diesveld MP，et al.A novel gene which is upregulated during colon epithelial cell differentiation and down-regulated in colorectal neoplasms[J].Lab Invest，1997，77（1）：85-92.

[2]Wang Z，Liu Q，Chen Q，etal.Over expression of NDRG-1：relation ship with pro-liferative activity and invasiveness of breast cancer cell line and breast cancermeta stasis[J].Chin JPathol，2006，35：333-338.

[3]Stein S，Thomas EK，Herzog B，et al.NDGR-1 is necessary for p53-dependent apoptosis[J].JBiochem，2004，11（19）：48930-48940.

[4]Kurdistani SK，Arizti P，Reimer C，et al.Inhibition of tumor cell growth by RTP/rit42 and its responsiveness to p53 and DNA damage[J].Cancer Res，1998，58（19）：4439-4444.

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[7]劉瑛瑛，王芳，鄒英鷹，等.NDRG-1基因轉染對HT-29人結腸癌細胞株增殖、侵襲和遷移能力的影響[J].實用腫瘤雜志，2011，26（2）：139-143.

The relationship between P53,NDRG-1 expression in colorectal carcinoma tissue and tumor invasion and metastasis

ZHANG Yunchang1 ZHAOWeiqiang2 WANG Fengan3
1.Department of Digestive Surgery,XingtaiMining General Hospital,Heibei Province,Xingtai 054000,China;2.Zhangtai Center Hospital ofWei County in Xingtai City,Heibei Province,Weixian 054702,China;3.Department of Gastrointestinal Surgery,the Second Hospital of HebeiMedical University,Heibei Province,Shijiazhuang 050000,China

ObjectiveTo investigate the expression of NDRG-1,P53 tumor suppressor genes in colorectal carcinoma tissue and its relationship with tumor invasion and metastasis.MethodsImmunohistochemistrymethod was used to detect the expression of NDRG-1 and P53 in colorectal carcinoma tissue and normal colorectal tissue.ResultsThe expression of NDRG-1 in colorectal cancer tissue decreased significantly,and its closely related to the invasion and lymph nodemetastasis of tumor(P＜0.05).The expression of P53(mutant)in colorectal cancer tissue significantly increased,its closely related to tumor-infiltrating(P＜0.05),but unrelated with tumormetastasis(P＞0.05).ConclusionTumor suppressor gene P53 and NDRG-1(wild-type)have obvious synergy or regulation effect in the process of colorectal carcinoma invasion,but they have no obvious synergy in lymph node metastasis.The expression of NDRG-1 and P53 is relevant in colorectal cancer tissue.Therearecertain referencesignificancein colorectalcancersurgicaltreatmentand prognosisbydetectionof the twogenes.

Colorectal carcinoma;NDRG-1;P53

R735.3+4

A

1673-7210（2012）11（b）-0054-02

張云昌（1966-），外科副主任醫(yī)師，主要從事胃腸外科的研究。

2012-06-26 本文編輯：程銘）