乳巖寧湯急性毒性實驗研究

潘 琳 殷東風 遼寧中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院（沈陽110032）

乳巖寧湯是在臨床經驗方的基礎上研制而成，用于治療乳腺癌，并具有顯著療效，但未經毒理實驗檢驗。為給臨床用藥提供安全的實驗依據下。我們對其進行了安全毒理學評價，為臨床用藥提供可靠的科學數據。

1 實驗材料 1.1 實驗藥物 乳巖寧湯由柴胡、黃芩、法半夏、太子參、炙甘草、莪術15g，生龍骨、生牡蠣、半枝蓮、白花蛇舌草各15g組成。

1.2 實驗動物 昆明種小鼠50只，雌雄各半，4～6周齡，體重20±2g，一次性購自遼寧中醫(yī)藥大學實驗動物中心，分籠飼養(yǎng)，顆粒飼料喂養(yǎng)，自由飲水。

1.3 主要器材 灌胃器、燒杯、量筒、天平。

2 方 法 2.1 乳巖寧方及其制備 由柴胡、黃芩、法半夏、太子參、甘草、半枝蓮、莪術、龍骨、牡蠣、白花蛇舌草等14味中藥組成，一次性購于北京同仁堂藥房，藥液煎煮按照中藥常規(guī)煎法進行，濃縮至終濃度為2.7g·mL－1，無菌實驗陰性，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 急性毒性實驗 2.2.1 預實驗：取昆明種小鼠10只，雌雄各半，體重20±2g，給藥前禁食12h，以乳巖寧含生藥3.57g／mL濃度按0.4mL／10g體重灌胃，給藥2次，上午、下午各1次，中間間隔8h，給藥后觀察小鼠一般情況。見小鼠活動自如，進食、飲水正常，大便呈濕潤顆粒狀，10只小鼠72h內無一只死亡，也無明顯中毒反應，提示本品難以測出LD50，故選擇最大給藥量實驗。

2.2.2 正式實驗：最大耐受量（MTD）測定：取昆明種小鼠40只，雌雄各半，體重20±2g，隨機分為空白對照組、乳巖寧低、中、高劑量4組。4組小鼠在灌胃給藥前均先禁食12h，均按0.4mL／10g體重灌胃，給藥2次，上午、下午各1次，中間間隔8h，最后一次給藥后2h結束禁食?？瞻讓φ战M予等體積生理鹽水，乳巖寧低、中、高劑量組分別按照142.8g／kg、285.3g／kg、428.2g／kg灌胃，連續(xù)觀察1周。

2.3 觀察指標 2.3.1 每天觀察并記錄各組小鼠的體重、皮膚毛發(fā)、眼和粘膜的變化、呼吸、中樞神經系統、四肢活動等及其中毒和死亡情況。

2.3.2 于用藥后24、48、72h、第7天分別檢測小鼠血常規(guī)、肝腎功。

2.3.3 實驗結束時，脫頸處死小鼠，取心、肝、脾、肺、腎標本固定、石蠟包埋、切片、HE染色，光鏡觀察藥物對上述各臟器的影響。

2.4 統計學方法 采用SPSS15.0軟件，單因素方差分析（ANOVA），數據以平均值±標準差（±s）表示，以P＜0.05為顯著性差異的標準。

3 結 果 3.1 給藥后實驗組小鼠飲食正常 體重增加，活動自如，皮毛光滑，大小便正常，無異常分泌物，無任何不良反應，至實驗結束無小鼠死亡。實驗前各組小鼠體重比較無明顯差異，實驗后各組體重比較無統計學差異（P＞0.05），如表1。

3.2 血常規(guī)及肝腎功的變化情況 血液指標見表2。

3.3 大體病理形態(tài)學觀察 經大體解剖和病理檢查，主要臟器無異常。

表1 各實驗組小鼠體重情況

討 論 乳巖寧湯是由《傷寒論》的柴胡加龍骨牡蠣湯加減而來，主要由柴胡、黃芩、法半夏、太子參、炙甘草、生龍骨、生牡蠣、半枝蓮、莪術、白花蛇舌草等14味中藥組成，其以小柴胡湯［1］為主方和解少陽、調暢氣機，加入龍骨、牡蠣鎮(zhèn)定安神，輔以山慈菇、莪術、白花蛇舌草、浙貝母等解毒化瘀，軟堅散結。研究表明方中人參的有效活性成分（人參皂苷Rg3）、黃芩甙、莪術油等［2－3］均有抑制腫瘤細胞增殖與浸潤、抗腫瘤細胞轉移、促進腫瘤細胞凋亡等多重作用。乳巖寧湯是臨床治療乳腺癌的經驗方，臨床上未發(fā)現任何明顯毒性反應，故進行本動物實驗以更好的指導臨床。因其毒性較小，在預實驗時給昆明種小鼠灌胃無法測出其半數致死量（LD50），故改做小鼠最大給藥量實驗。

乳巖寧湯臨床常用生藥口服劑量為2.77g／（kg·d），（按照成人體重60kg計算），受藥物濃度和給藥體積的影響，本實驗設定小鼠的最大給藥量為428.2g生藥／（kg·d），即可供灌胃的最大濃度3.57g／mL，小鼠灌胃可承受的最大體積（0.8mL／20g體重），1d2次灌胃給藥，根據公式計算約為臨床患者擬用劑量的154.6倍（＞100倍）。據文獻［4］，按體重計算，小鼠ld最大給藥量相當于成人臨床日用量的100倍以上則較為安全，可以提供臨床研究試用。本實驗結果顯示，給予小鼠最大給藥量后未見任何中毒癥狀及死亡現象，給藥后實驗組小鼠飲食正常，體重增加，活動自如，皮毛光滑，大小便正常，說明該藥無明顯毒性，臨床應用是安全可靠的。

表2 用藥前后各實驗組小鼠血常規(guī)及肝腎功的情況

［1］邢向榮，殷東風.運用柴胡劑從肝論治提高惡性腫瘤患者生存質量的臨床分析［J］.實用中醫(yī)內科雜志，2007，21（1）：58－59.

［2］孫 燕，林洪生，朱允中等.長春瑞濱合并順鉑（NP）加參一膠囊或安慰劑治療晚期非小細胞肺癌的多中心雙盲隨機臨床研究報告［J］.中國肺癌雜志，2006，9（3）：254－258.

［3］林小聰，劉新光陳小文等.黃芩甙對重組人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其動力學分析［J］.癌癥，2004，23（8）：874－878.

［4］謝秀瓊.中藥劑制劑開發(fā)與應用［M］.第二版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：540.