Ang-2在大腸癌中的表達(dá)及其與病理和臨床特征的關(guān)系*

馬志蘭 劉新蘭 魏建敏 陳 萍

近年來，我國大腸癌發(fā)病呈日益上升趨勢(shì)，已上升到惡性腫瘤譜中的第3～5位，成為我國最常見的惡性腫瘤之一[1]。血道轉(zhuǎn)移在大腸癌中相當(dāng)常見，如果能減少或消除血道轉(zhuǎn)移，則可明顯改善大腸癌患者的預(yù)后。近年來發(fā)現(xiàn)的血管生成素家族是與血管形成、成熟有關(guān)的因子[2]，其中血管生成素2（Ang-2）可與血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）起協(xié)同作用，在腫瘤血管生成中發(fā)揮重要的作用。本文采用免疫組化方法檢測(cè)了Ang-2在大腸癌組織中的表達(dá)，旨在分析其表達(dá)與病理和臨床特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2002年1月—2008年11月在寧夏醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院住院治療，進(jìn)行手術(shù)、經(jīng)病理證實(shí)并有詳細(xì)隨訪和預(yù)后資料的大腸癌患者54例，男28例，女26例，年齡18～76歲，中位年齡56歲。癌變發(fā)生于直腸者24例，乙狀結(jié)腸者18例，升結(jié)腸者4例，降結(jié)腸者6例，橫結(jié)腸者2例。所有患者術(shù)前均未行化療、放療等抗腫瘤治療。取距癌組織≥5 cm作為癌旁正常組織18例，男10例，女8例，中位年齡56歲。選擇同期良性病變組20例，男12例，女8例，年齡24～66歲，中位年齡49歲。其中腸息肉14例，大腸腺瘤6例。均無惡性腫瘤病史。3組間性別（χ2=0.404）、年齡（Z=5.326）比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2 主要試劑 免疫組化試劑盒KIT-9902及DAB顯色試劑盒DAB-0031（福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司），兔抗人Ang-2多克隆抗體（北京博奧森生物技術(shù)有限公司）。

1.3 病理切片的制備 標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，連續(xù)制成4μm厚切片若干張。每例標(biāo)本選5張切片，1張用于HE染色，其余4張用于免疫組化染色。病理特征和免疫組化的結(jié)果由2位病理科醫(yī)師獨(dú)立單盲閱片。

1.4 免疫組化結(jié)果判定 所有染色結(jié)果判定均采用統(tǒng)一評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，所有評(píng)分過程均重復(fù)3次以上。于高倍鏡下隨機(jī)取10個(gè)不同視野，各計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，采用半定量法，同時(shí)對(duì)染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞所占百分比進(jìn)行評(píng)分。陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；對(duì)陽性細(xì)胞所占百分比陰性為0分，陽性細(xì)胞≤25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分；染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞百分比的積分相加，0～1分為（-），2～3分為（±），4～5分為（+），6～7分為（++）；（-）和（±）判為陰性，（+）和（++）判為陽性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)分析軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，Ang-2的表達(dá)與病理及臨床特征的關(guān)系采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以中位數(shù)表示，3組間比較采用秩和檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Ang-2在大腸癌組織中的表達(dá) Ang-2陽性表達(dá)主要定位于腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞漿，見圖1、2。在大腸癌組織、癌旁正常組織及大腸良性病變組織中的陽性表達(dá)率分別為77.78%（42/54）、27.78%（5/18）和30.00%（6/20），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.356，P<0.05）。大腸癌組織與癌旁正常組織（χ2=11.734）及大腸良性病變組織（χ2=11.622）相比，陽性表達(dá)率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）。癌旁正常組織與良性病變組織中Ang-2陽性表達(dá)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.012，P>0.05）。

2.2 Ang-2表達(dá)與大腸癌病理特征的關(guān)系 Ang-2陽性表達(dá)率與腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（P<0.05或P<0.01），而與腫瘤的大小和分化程度均無關(guān)（P>0.05），見表1。

Table 1 Correlation between positive Ang-2 expression and pathologic featuresin patientswith colorectal cancer表1 Ang-2陽性表達(dá)與大腸癌病理特征的關(guān)系 例（%）

2.3 Ang-2的表達(dá)與大腸癌一般臨床特征的關(guān)系 Ang-2陽性表達(dá)率與患者性別、年齡、民族、職業(yè)、良性疾病史及腫瘤家族史均無相關(guān)性（P>0.05），見表2。

2.4 Ang-2表達(dá)與大腸癌臨床特征的關(guān)系 Ang-2陽性表達(dá)率與腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及臨床分期呈正相關(guān)（P<0.05），與腫瘤的部位無關(guān)（P>0.05），見表3。在隨訪的32例大腸癌患者中有25例行根治手術(shù)，其中術(shù)后5年內(nèi)發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移者中，Ang-2陽性表達(dá)率與5年內(nèi)未發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的患者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=3.376，P<0.05）。

3 討論

Table2 Correlation between positive Ang-3 expression and clinical symptomsin patients with colorectal cancer表2 Ang-3陽性表達(dá)與大腸癌一般臨床特征的關(guān)系例（%）

Table 3 Correlation between positive Ang-2 expression and clinical features in patients with colorectal cancer表3 Ang-2陽性表達(dá)與大腸癌臨床特征的關(guān)系 例（%）

血管生成是腫瘤生長的關(guān)鍵,與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān),腫瘤本身或宿主組織建立的新生血管網(wǎng)供給瘤體營養(yǎng)，促使腫瘤血管的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移。腫瘤血管是為腫瘤細(xì)胞輸送氧及營養(yǎng)物質(zhì)的通道，也是實(shí)現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移的重要通道之一。許多因素參與腫瘤的血管生成，如各種生長因子及其受體、多種蛋白酶、黏附分子、細(xì)胞外基質(zhì)成分等[2]。

血管生成素家族是近年來發(fā)現(xiàn)的，它既含受體激動(dòng)劑又含受體抑制劑,是與血管新生密切相關(guān)的一類血管生長調(diào)節(jié)因子。Ang-2是該家族目前已發(fā)現(xiàn)的4個(gè)成員（Ang-1～4）之一，它是分泌型糖蛋白，位于人類染色體的8p23.1。Ang-2可能參與血管生成的早期啟動(dòng)和激發(fā)階段，拮抗Ang-1穩(wěn)定血管的作用，離斷血管外周細(xì)胞間的相互作用，導(dǎo)致血管不穩(wěn)定，使其更易接受其他促血管生成因子的刺激，在后者的共同作用下，致使腫瘤的血管生成，從而促進(jìn)腫瘤生長[3]。Ang-2對(duì)血管生成的調(diào)節(jié)具有雙向性，呈VEGF依賴性，當(dāng)VEGF存在時(shí)，Ang-2可以拮抗Ang-1穩(wěn)定血管結(jié)構(gòu)的作用，消除血管基底膜和管周細(xì)胞對(duì)血管形成的限制，使內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)VEGF的敏感性增加，促進(jìn)血管出芽生長；當(dāng)VEGF缺乏時(shí)，Ang-2可以抑制Ang-1，有利于血管的消退[4]。Ang-2可能是腫瘤血管生成的早期信號(hào)，與腫瘤血管生成的數(shù)目和侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

本研究中癌組織與癌旁正常組織、良性病變組織相比，Ang-2表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而癌旁正常組織和良性病變組織中Ang-2表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這與文獻(xiàn)報(bào)道一致[5-6]。提示Ang-2與大腸癌的發(fā)生有關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，Ang-2陽性表達(dá)率與大腸癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及臨床分期呈正相關(guān)，與患者性別、年齡、民族、職業(yè)、良性疾病史及腫瘤家族史、腫瘤的部位、大小及分化程度均無關(guān)，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[7-8]。提示Ang-2在大腸癌的進(jìn)展過程中起促進(jìn)作用。

復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是影響患者預(yù)后的重要因素。目前研究認(rèn)為Ang-2表達(dá)是腫瘤血管新生的起始和加強(qiáng)因素，與預(yù)后關(guān)系密切[9]。在本組資料中，復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組的Ang-2陽性表達(dá)率高于未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組，提示Ang-2的表達(dá)與大腸癌患者預(yù)后密切相關(guān)。

綜上所述，Ang-2可能在大腸癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要的作用，檢測(cè)Ang-2的表達(dá)可能為臨床判斷潛在的轉(zhuǎn)移、指導(dǎo)治療和預(yù)測(cè)預(yù)后提供參考。

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