中西藥聯(lián)合應(yīng)用對(duì)大鼠缺血/再灌注心肌的保護(hù)作用機(jī)制

王曉玲，王春光，焦 宏，趙小祺

（1.河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院，河北 張家口075000；2.河北北方學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，河北 張家口75000）

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

Wistar大鼠40只，體質(zhì)量180～220g，雌雄各半，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供。

1.2 中藥制備及藥品試劑

四逆湯由熟附子、干姜、炙甘草按5∶3∶2比例用水煎制成1g·mL－1生藥。福辛普利由上海施貴寶公司生產(chǎn)，規(guī)格：10mg/片，以0.9%生理鹽水配成所需濃度。丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH－Px）測(cè)試盒均由南京建成生物技術(shù)研究所提供。

1.3 分組與給藥方法

隨機(jī)將40只Wistar大鼠分為假手術(shù)（sham）組、AMI模型（model）組、四逆湯（sini decoction，SND）組、福辛普利（fosinopril）組，四逆湯＋福辛普利聯(lián)合（SND＋fosinopril）組，每組8只。四逆湯按5mL·kg－1灌胃，福辛普利按20mg·kg－1灌胃，聯(lián)合用藥組按四逆湯2.5mL·kg－1＋福辛普利10mg·kg－1灌胃，Model組和Sham組灌服公斤體重相符的生理鹽水，每組灌胃容量均為5mL·kg－1，每日一次，連續(xù)3d。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

于末次給藥后1h，按文獻(xiàn)方法[3]：大鼠麻醉后仰臥位固定，剪去胸前鼠毛，先用縫線在開(kāi)胸部位做一荷包，之后開(kāi)胸暴露心臟，在冠狀動(dòng)脈起始點(diǎn)下方2～3mm處用0號(hào)絲線結(jié)扎冠狀動(dòng)脈。術(shù)畢迅速將心臟放回胸腔，擠出胸腔內(nèi)氣體，迅速收攏荷包關(guān)閉胸腔，整個(gè)開(kāi)胸時(shí)間不超過(guò)30s。缺血30min后再次開(kāi)胸，剪斷絲線使血流再通，之后關(guān)閉胸腔。sham組第一次開(kāi)胸時(shí)只穿線繞過(guò)冠狀動(dòng)脈前降支而不結(jié)扎，其他操作與上所述完全相同。除去術(shù)中及術(shù)后死亡大鼠，24h后sham組、fosinopril組各存活大鼠6只；model組、聯(lián)合用藥組各存活大鼠5只；SND組存活7只。術(shù)后24h腹主動(dòng)脈取血，3000r·min－1離心10min，取血清。按試劑盒方法測(cè)血清MDA含量，SOD和GSH－Px活性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0軟件包完成統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料以（±s）表示，組間比較t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

Model組與Sham組比較，血清MDA有明顯升高（P＜0.01）而SOD和GSH－Px有明顯降低（P＜0.05）；SND組、Fosinopril組和聯(lián)合用藥組血清MDA、SOD、GSH－Px較Model組均有顯著改善（P＜0.05或P＜0.01），其中聯(lián)合用藥組的血清MDA含量顯著低于Fosinopril組（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 四逆湯及福辛普利對(duì)缺血—再灌注損傷大鼠心肌血清MDA、SOD、GSH－Px的影響（±s）

表1 四逆湯及福辛普利對(duì)缺血—再灌注損傷大鼠心肌血清MDA、SOD、GSH－Px的影響（±s）

注：與sham組相比＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與 model相比＃P＜0.05，＃＃P＜0.01；與fosinopril組相比△P＜0.05

分組 n MDA（nmol·L－1）SOD（mg·L－1）GSH－Px（kU·L－1）sham 6 4.14±0.31 5.81±0.37 8.97±0.93 model 5 6.16±0.40＊＊ 4.28±0.92＊ 7.49±0.83＊SND 7 4.90±0.34＃ 6.31±0.94＃＃ 8.58±1.01＃fosinopril 6 5.13±0.50＃ 6.07±1.03＃＃ 8.90±0.91＃SND＋fosinopril 5 4.09±0.61＃?！?6.48±1.05＃＃ 9.10±0.90＃＃

3 討 論

心肌缺血－再灌注損傷是冠脈缺血后血流重建的主要并發(fā)癥之一，其機(jī)制尚未徹底闡明，但已有大量研究證實(shí)：氧自由基的作用是重要發(fā)病環(huán)節(jié)之一。再灌注后氧自由基生成增多，氧自由基與細(xì)胞膜上的多聚不飽和脂肪酸反應(yīng)，發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化（LPO），其過(guò)氧化的最終產(chǎn)物MDA對(duì)細(xì)胞膜有很強(qiáng)的破壞作用，導(dǎo)致細(xì)胞膜及細(xì)胞器膜的流動(dòng)性降低而通透性增高，發(fā)生細(xì)胞腫脹和Ca2＋內(nèi)流進(jìn)而引起鈣超載，線粒體膜氧化磷酸化受損，導(dǎo)致ATP生成障礙，進(jìn)而抑制心功能。再灌注時(shí)不僅自由基的生成增多，機(jī)體對(duì)自由基的清除能力也減低，本研究中model組與sham組比較，具有自由基清除功能的SOD、GSH－Px活性降低也證明了這一點(diǎn)。

關(guān)于心肌缺血－再灌注時(shí)氧自由基生成增多的機(jī)制，有研究認(rèn)為與心肌局部腎素－血管緊張素系統(tǒng)（RAS）激活后生成大量血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）有關(guān)[1]。AngⅡ與受體ATI結(jié)合后激活細(xì)胞磷脂酶C或A2，引起膜磷脂降解，之后再通過(guò)花生四烯酸途徑產(chǎn)生大量的氧自由基[2]。另外，AngⅡ可促進(jìn)交感神經(jīng)末梢釋放兒茶酚胺，使心臟局部的氧化產(chǎn)物增多，導(dǎo)致氧自由基大量生成[3]。

福辛普利是血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑（ACEI），它通過(guò)抑制ACE能有效阻斷AngⅡ的生物學(xué)效應(yīng)，從而阻斷自由基的產(chǎn)生。本實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了福辛普利可明顯降低心肌缺血－再灌注大鼠血清中MDA含量并提高具有自由基清除效應(yīng)的SOD及GSH－Px的活性，從而發(fā)揮其保護(hù)缺氧復(fù)氧心肌的作用。

四逆湯由附子、干姜、炙甘草組成，在四逆湯拆方研究中發(fā)現(xiàn)，甘草的主要成分—甘草甜素對(duì)OFR有直接的淬滅效應(yīng)及和顯著的抗氧化作用[4]。體內(nèi)體外大量研究均證實(shí)：四逆湯可顯著降低缺血心肌內(nèi)OFR濃度和丙二醛（MDA）含量，增加SOD活性，對(duì)抗脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)（LPO）[5]，增加機(jī)體防御自由基的能力。

中藥與西藥在治療方面各有優(yōu)缺點(diǎn)，西藥治療迅速可靠，但長(zhǎng)期服藥會(huì)產(chǎn)生耐藥性以及不同程度的毒副作用；中藥配伍常具多方面的調(diào)節(jié)功能，藥勢(shì)相對(duì)緩和，基本無(wú)副作用。中西藥聯(lián)合應(yīng)用可有效降低單一西藥的毒副作用，藥效趨于緩和持久。本研究顯示：四逆湯和福辛普利在大鼠心肌缺血－再灌注中都有對(duì)抗自由基的效應(yīng)，可明顯改善心肌再灌注損傷，二者聯(lián)用在某些方面比單藥效果更好，但臨床應(yīng)用療效有待進(jìn)一步證實(shí)。

[1]Shimizu M，Sjoquist PO，Wang QD，et al.Effects of angiotensinⅡreceptor blocker candesartan on myocardial ischemic/re－perfusion injury [J].J Am See Nephrol，1999，10（Suppl）11：S137－S142.

[2]Zughaib ME，Sun JZ.Effect of angiotensin－converting enzyme inhibitors on myocardial ischemia/reperfusion injury in rats [J].Hypertension，1996，27（1）：7－13.

[3]趙學(xué)忠，秦玲，于小風(fēng)，等.福辛普利對(duì)急性心肌梗死大鼠心室重構(gòu)的影響 [J].中國(guó)心血管病研究雜志，2003，1（1）：50－54.

[4]吳偉康，侯燦，羅漢川，等.四逆湯方藥抗缺血心肌脂質(zhì)過(guò)氧化作用及其量效時(shí)效的研究 [J].中國(guó)中藥雜志，1995，20（4）：235.

[5]吳偉康，侯燦，羅漢川.四逆湯對(duì)缺血心肌NBF、OFR濃度，SOD活性及MDA含量的影響 [J].中山醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1993，14（4）：292－295.