金曉紅，桂紅武，耿偉（1.諸暨市人民醫(yī)院藥劑科，浙江諸暨11800；.新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院北院，烏魯木齊 80054；.新疆醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院藥學部，烏魯木齊 80054）

寒喘祖帕顆粒為《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準維吾爾藥分冊》[1]收載，由神香草、鐵線蕨、甘草浸膏、小茴香、芹菜子、胡蘆巴、蕓香草、玫瑰花、蕁麻子9味藥材組成，具有鎮(zhèn)咳、化痰、溫肺止喘等功效，用于治療急性感冒，寒性“乃孜來”所致的咳嗽及異常黏液質性哮喘。為了有效地控制產(chǎn)品質量，筆者采用薄層色譜（TLC）法對制劑中玫瑰花、小茴香進行定性鑒別；采用高效液相色譜（HPLC）法對制劑中的甘草酸銨進行含量測定，結果該方法操作簡單、專屬性和重復性良好，可有效控制寒喘祖帕顆粒的質量。

1 儀器與試藥

SPD-10 AVP型HPLC儀（日本島津公司）。

寒喘祖帕顆粒為市售品，批號：090310、090311、090312，由新疆某公司生產(chǎn)；甘草酸銨對照品（批號：11703-200615）和小茴香（批號：121198-200301）、玫瑰花（批號：121508-200702），均購于中國食品藥品檢定研究院；硅膠G（層析用，青島海洋化工有限公司）；甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 TLC鑒別[2～4]

2.1.1 玫瑰花的TLC鑒別 取本品6 g，研細，加乙醇30 mL，置水浴中加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30 mL使溶解，加乙酸乙酯20 mL提取，分取乙酸乙酯層，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液；另取玫瑰花對照藥材1 g，加水30 mL，煎煮30 min，濾過，濾液加乙酸乙酯20 mL提取，分取乙酸乙酯層，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為對照藥材溶液；另按處方比例取除玫瑰花以外其余藥材，同法制成陰性對照溶液。照TLC法[2]試驗，吸取上述3種溶液各10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮-醋酸乙酯-甲酸（8∶4∶3∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鋁乙醇溶液，待乙醇揮干后，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結果，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；陰性對照無干擾。玫瑰花的TLC見圖1。

2.1.2 小茴香的TLC鑒別 取本品15 g，研細，加乙醚50 mL，置水浴中加熱回流30 min，放冷，濾過，濾液揮干，殘渣加氯仿1 mL使溶解，作為供試品溶液；另取小茴香對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液；另按處方比例取除小茴香以外其余藥材，同法制成陰性對照溶液。照TLC法[2]試驗，吸取上述3種溶液各10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-（17∶2.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼試液，日光下檢視。結果，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；陰性對照無干擾。小茴香的TLC見圖2。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗[5，6]色譜柱：Hypersil ODS-2C18（250 mm×4.6 mm ，5 μm）；流動相：甲醇-1%乙酸銨溶液-冰醋酸（67∶33∶1）；檢測波長：250nm；流速：1mL·min－1；柱溫：30℃；進樣量：10μL。在此色譜條件下，甘草酸銨與相鄰峰可達到基線分離。理論板數(shù)按甘草酸銨色譜峰計應不低于3000，分離度＞1.5。色譜見圖3。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品適量，研細，精密稱取1 g，置100 mL量瓶中，加甲醇50 mL，密塞，超聲處理30min，取出，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，過微孔濾膜（0.45μm），即得。

2.2.3 對照品溶液的制備 取甘草酸銨對照品適量，加甲醇制成每1 mL含甘草酸銨0.05 mg的溶液，即得。

2.2.4 線性關系考察 精密稱取甘草酸胺對照品適量，加甲醇制成每1 mL含甘草酸胺1.031mg的溶液，作為貯備液。精密吸取此貯備液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。分別吸取上述對照品溶液10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以檢測濃度（X）為橫坐標，峰面積積分值（Y）為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程為Y＝6895.3 X+1526.8（r＝0.9998）。結果表明，甘草酸銨檢測濃度在20.62～206.2 μg·mL－1范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關系。

2.2.5 精密度試驗 精密吸取同一供試品溶液10μL，按上述色譜條件連續(xù)進樣6次，測定。結果，RSD＝0.59%（n＝6），表明方法精密度良好。

2.2.6 重復性試驗 取同一批樣品適量，共6份，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，分別精密吸取10μL，注入液相色譜儀，記錄甘草酸銨峰面積。結果，甘草酸銨的平均含量為3.96 mg·g－1，RSD＝1.71%（n＝6），表明本方法重復性良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗 取同一批供試品溶液適量，室溫放置，分別于 0、2、4、6、8、12、24、36h依法測定。結果，RSD＝0.95%（n＝8），表明供試品溶液在36 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

圖1 玫瑰花的TLCFig 1 TLC of Rose.rugosa

圖2 小茴香的TLCFig 2 TLC of Fructus foeniculi

圖3 高效液相色譜圖Fig 3 HPLC chromatograms

2.2.8 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的樣品0.5 g，共9份，分別精密加入1.031 mg·mL－1的甘草酸銨對照品溶液1.5、2.0、2.5 mL，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，分別精密吸取10μL，依次注入液相色譜儀，記錄峰面積，計算加樣回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果（n＝9）Tab 1 Results of recovery test（n＝9）

2.2.9 樣品含量測定 取適量樣品3批，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，分別精密吸取10μL，依次注入液相色譜儀，記錄峰面積，計算甘草酸銨的含量。結果，3批樣品（批號：090310、090311和090312）中甘草酸銨的含量分別為4.01、3.98、3.93 mg·g－1。

3 討論

寒喘祖帕顆粒收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準維吾爾藥分冊》[1]，標準號為WS3-BW-0195-98，原標準中鑒別項下有2項，第一項為揮發(fā)油理化鑒別，第二項為甘草酸的TLC鑒別，無含量測定項。筆者對原標準進行提高，刪除了原標準中的鑒別項，增加了玫瑰花和小茴香的TLC鑒別項，增加了甘草酸銨的含量測定項，使寒喘祖帕顆粒質量標準的可控性增強。筆者還對處方中神香草、鐵線蕨、芹菜子、胡蘆巴、蕓香草和蕁麻子分別進行了定性鑒別，由于無對照藥材，TLC展開后斑點不清晰，故不能作為制劑定性鑒別的依據(jù)。

本品共由9味藥材組成，工藝是除甘草浸膏粉碎成細粉外，其余8味用水提取后，濃縮至浸膏，加輔料制粒而成，所以在工藝過程中揮發(fā)性成分損失較大，不宜作為含量測定指標。其他藥材中，預試胡蘆巴中的成分發(fā)現(xiàn)總堿含量較高，其中膽堿含量最高，但膽堿無紫外吸收。胡蘆巴堿在本品中含量低，且常以內(nèi)鹽形式存在，結構特殊，在普通的以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱上保留時間過短。綜合考慮，選擇甘草酸銨為本制劑含量測定的指標。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準維吾爾藥分冊[S].1998：198.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄34.

[3]古麗巴哈爾·阿巴拜克力.小茴香果實中總黃酮含量測定方法研究[J].生物技術通訊，2009，20（6）：830.

[4]陰 健.中藥現(xiàn)代研究與臨床應用[M].北京：中醫(yī)古籍出版社，1997：14.

[5]李 莉，師永清.HPLC法測定加味藿香正氣丸中甘草酸的含量[J].中國藥房，2007，18（33）：2605.

[6]于立軍.HPLC法測定雙香排石顆粒中甘草酸的含量[J].中國藥房，2007，18（18）：1404.