楊麗 張永梅 喬姝 胡同平 張利霞 李得春 彭忠忠 楊玉梅

蓯蓉沖劑是由肉蓯蓉、海馬、淫羊藿、黃芪、干姜、菟絲子等組成的純中藥制劑，是一老中醫(yī)臨床用于健脾益氣、補腎壯陽、強身壯體的經(jīng)驗處方[1]。為探討蓯蓉沖劑對免疫功能的作用，本實驗根據(jù)使用環(huán)磷酰胺后白細胞減少的機理，研究蓯蓉沖劑對于白細胞減少癥模型小鼠機體免疫力的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究對象 健康昆明種小鼠：體重18～22 g，雌雄各半，購自內(nèi)蒙古大學實驗動物中心，許可證號SCXK（蒙）2002-0001。

1.1.2 藥品和試劑 蓯蓉沖劑 （包頭市藥物研究所，批號050616），注射環(huán)磷酰胺（200 mg/支，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號：10102921）。

1.1.3 儀器 sysmex KX-21全自動血液分析儀檢測（日本東亞醫(yī)用電子株式會社）、酶標儀（芬蘭雷勃公司）。

1.2 方法

1.2.1 模型制備 將150只小鼠采用隨機化原則分成5組，每組30只：即空白對照組、模型組、蓯蓉沖劑大劑量組（2.8 g/kg）、蓯蓉沖劑中劑量組 （1.4 g/kg）和蓯蓉沖劑小劑量組 （0.7 g/kg）。除空白對照組外，其余小鼠都進行腹腔注射環(huán)磷酰胺50 g/kg，1次/d，共7 d，建立化療白細胞減少癥模型（標準：白細胞下降至2.0×109～4.0×109/L）[2]。

1.2.2 藥物干預 建模成功后即日起持續(xù)灌胃給藥，1次/d，0.2 ml/10 g，連續(xù)灌胃15 d?？瞻讓φ战M和模型組給等容量體積生理鹽水。

1.2.3 檢測IL-6水平及WBC計數(shù) 分別于造模前和造模后5、10、15 d 取靜脈血，WBC計數(shù)使用sysmex KX-21全自動血液分析儀檢測，細胞因子IL-6按試劑盒（上海鑫樂試劑有限公司）操作說明采用酶聯(lián)免疫吸附試驗進行檢測。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料以（±s）表示，采用獨立樣本t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 蓯蓉沖劑對白細胞減低癥模型小鼠白細胞計數(shù)的影響 建模前各組小鼠白細胞計數(shù)無明顯差異（P>0.05）。正常對照組與模型組比較，白細胞計數(shù)明顯降低，與建模后5 d比較有極顯著差異（P<0.01）， 與建模后10、15 d比較有顯著差異（P<0.05），表明制備白細胞減低癥模型成功。與模型組比較，蓯蓉沖劑給藥后5、10 d各劑量組外周血白細胞數(shù)量比模型對照組有所增高，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），使用蓯蓉沖劑15 d大劑量組與模型組白細胞計數(shù)比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），中、小劑量組與模型組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表1。

2.2 蓯蓉沖劑對小鼠IL-6的影響 與空白對照組比較，模型組中IL-6水平降低（P<0.01）；蓯蓉沖劑 3個劑量組與模型組比較，建模后5、 10、15 d IL-6水平明顯增高（P<0.01），且表現(xiàn)出劑量間的依賴關系。見表2。

3 討論

白細胞減少癥按中醫(yī)辨證屬于“虛勞、血虛癥” 范圍，與心、肝、脾、腎陽氣精血不足相關。蓯蓉沖劑正是采用肉蓯蓉、海馬、淫羊藿、黃芪等純中藥制劑為主選藥合成，是臨床上用于健脾益氣、補腎壯陽、強身壯體的經(jīng)驗處方。

IL-6是一種主要由免疫活性細胞分泌的多功能因子，在活化的B細胞產(chǎn)生免疫球蛋白中起重要作用，不僅具有免疫調(diào)節(jié)及抗腫瘤作用[3]，且能促進細胞的增殖分化，誘導肝細胞急性期蛋白的合成。因此選擇IL-6免疫活性因子作為本次實驗的檢測指標。本實驗對于注射環(huán)磷酰胺的小鼠制造白細胞減少癥模型后，對其給予不同劑量的蓯蓉沖劑于給藥后5、10、15 d分別檢測IL-6水平及WBC計數(shù)，結果顯示造模成功后IL-6水平及WBC計數(shù)與空白對照組比較明顯降低（P<0.05），蓯蓉沖劑治療后IL-6水平及WBC計數(shù)顯著升高（P<0.05），說明蓯蓉沖劑誘導小鼠細胞因子IL-6的釋放，同時使用蓯蓉沖劑治療后第5、10、15天的IL-6水平及WBC計數(shù)依次增高，且使用后15 d大劑量組與模型組白細胞計數(shù)比較有極顯著差異（P<0.01），說明蓯蓉沖劑對白細胞減少癥有較好的治療效果，且隨使用劑量的增加WBC計數(shù)增高。有研究表明，蓯蓉沖劑中肉蓯蓉能興奮垂體，有類似腎上腺皮質(zhì)激素樣的作用，能調(diào)節(jié)機體免疫功能，同時可加強小鼠巨噬細胞的吞噬能力，其多糖可調(diào)節(jié)小鼠淋巴細胞免疫功能[4-6]。本實驗結果正印證了這一點。同時蓯蓉沖劑中主要成分肉蓯蓉對半乳糖致衰老模型小鼠具有抗衰老作用，提高模型小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化能力、腹腔巨噬細胞吞噬功能，可明顯增強模型小鼠的免疫功能[7-8]。因此認為蓯蓉沖劑作用機制可能與提高免疫力有關。

表1 蓯蓉沖劑對白細胞減低癥模型小鼠白細胞計數(shù)的影響（±s） ×109/L

表1 蓯蓉沖劑對白細胞減低癥模型小鼠白細胞計數(shù)的影響（±s） ×109/L

*與正常組比較，P<0.05；**與正常組比較，P<0.01；#與模型組比較，P<0.05，##與模型組比較，P<0.01

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表2 蓯蓉沖劑對白細胞減低癥模型小鼠IL-6的影響（±s） pg/ml

表2 蓯蓉沖劑對白細胞減低癥模型小鼠IL-6的影響（±s） pg/ml

*與正常組比較，P<0.05；#與模型組比較，P<0.05；△與模型組比較，P<0.01

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綜上表明，蓯蓉沖劑對白細胞減少癥模型小鼠免疫力低下有較好的治療效果，其機制可能與提高免疫力有關。蓯蓉沖劑具有補腎壯陽、提高免疫功能的作用，但對白細胞減少癥免疫功能的影響目前國內(nèi)外尚未見報道。本次將蓯蓉沖劑與白細胞減少癥模型小鼠免疫功能聯(lián)系起來，對提高民族藥物的臨床使用價值具有重要意義。

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[2]馬駿，劉興國，張朋，等.升白膠囊對環(huán)磷酰胺所致小鼠白細胞減少癥影響的研究[J].甘肅中醫(yī)學院學報，2010，27（2）：20-22.

[3]Mule J J， Mc Int osh J k， Jabon D M， et al.Antitum or ac2tivity of recombinant interleukin-6 in mice [J]. J ExpMed，1990，171（45）：629.

[4]曾群力，鄭一凡，呂志良.肉蓯蓉多糖的免疫活性作用及機制[J].浙江大學學報 （醫(yī)學版），2002，31（4）：248-251 .

[5]楊冬梅，賈敏，周玲玲，等.茂棗顆粒對小鼠免疫功能的影響[J].中國中醫(yī)急癥，2006，15（10）：1136-1137.

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[7]楊錯，邢立國，劉玉蘭.柴胡乳劑對小鼠免疫功能的影響[J].沈陽藥科大學學報，2006，23（3）：169-171.

[8]李淑蓮，付克，劉賽妹.柴羊清肝膠囊對小鼠單核吞噬細胞吞噬功能的影響[J].中醫(yī)藥信息，2009，26（1）：88.