鄒 容，趙萍萍，陳 熙，屈元姣，曹軼林，劉陶文

(廣西壯族自治區(qū)南溪山醫(yī)院腫瘤科，廣西 桂林541002)

淋巴管生成在腫瘤的淋巴轉移過程中起重要作用。血管內皮生長因子A(VEGF-A)通過結合血管內皮生長因子受體2(VEGFR-2)促進淋巴管新生，從而使腫瘤發(fā)生淋巴轉移［1-3］。目前關于VEGF-A 及VEGFR-2 在鼻咽癌中的臨床意義尚未見報道。作者檢測了鼻咽癌患者血清VEGF-A 及VEGFR-2 的水平，并探討這些分子的水平與鼻咽癌臨床病理特征的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年5月至2011年5月廣西壯族自治區(qū)南溪山醫(yī)院腫瘤科收治的68 例鼻咽癌患者，均經病理診斷為低分化鱗狀細胞癌。其中男性53 例，女性15 例;年齡21 ～63 歲，中位年齡42 歲;初治者32 例(治療前組)，按鼻咽癌2008年分期標準進行分期:I期1 例，Ⅱ期5 例，Ⅲ期18 例，Ⅳa 期8 例;復發(fā)者15 例，其中單純原發(fā)灶和(或)頸部復發(fā)9 例，單純遠處轉移6 例(以骨、肝、肺為主);完全緩解者21例。排除在觀察期間存在明顯感染或組織創(chuàng)傷患者。健康對照組20 例為同期在該院健康體檢者，并排除近期組織創(chuàng)傷、感染以及糖尿病和妊娠期等，均無腫瘤病史，男性15 例，女性5 例;年齡23 ～59 歲，中位年齡41歲。

1.2 標本采集 清晨空腹取外周靜脈血2 mL，室溫自然凝固，2 000 r·min-1，10 min 分離血清，置-70 ℃冰箱保存，備測。所有標本無溶血、黃疸、脂濁。實驗前30 min 取出平衡至室溫。

1.3 血清VEGF-A、VEGFR-2 的測定方法 嚴格按照VEGF-A、VEGFR-2 ELISA 試劑盒(購自武漢華美生物工程有限公司)說明書進行操作。所有受檢樣本和試劑盒內的標準品同批次檢測。采用ELISA 法定量檢測游離狀態(tài)的VEGF-A 及VEGFR-2 水平，于450 nm處測OD值。根據(jù)標準曲線計算出相應的測定值。每份標本均采用復孔檢測。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 17.0 進行統(tǒng)計分析。定量數(shù)據(jù)以±s表示，2 組間比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析、q檢驗，參數(shù)間的相關性分析采用Spearman相關分析。檢驗水準α= 0.05。

2 結果

2.1 不同患者血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平 初治、復發(fā)組患者血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平均高于健康對照組、完全緩解組(P均＜0.05);復發(fā)組患者兩者水平高于初治組(P＜0.05);完全緩解組與健康對照組兩者水平比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。見表1 。

表1 健康對照組與鼻咽癌患者血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平比較

2.2 初治鼻咽癌患者血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平與臨床病理特征的關系 初治組鼻咽癌患者T3+T4期、Ⅲ+Ⅳ期患者血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平明顯高于T1+T2期、I+Ⅱ期患者(P均＜0.05)。見表2 。

表2 初治組鼻咽癌患者血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平與臨床病理特征的關系

2.3 血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平與鼻咽癌淋巴轉移的關系 32 例初治患者中，有淋巴轉移、遠處轉移鼻咽癌患者血清VEGF-A 及VEGFR-2 水平明顯高于無淋巴轉移、無遠處轉移者(P均＜0.05);隨著N分期增高，血清VEGF-A、VEGFR-2 水平相應上升，且不同N 分期之間兩者差異均有統(tǒng)計學意義(P均＜0.05)。見表3。

表3 血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平與鼻咽癌淋巴轉移的關系

2.4 血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平的關系 32 例初治鼻咽癌患者血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平呈正相關(r=0.810，P＜0.05)。

3 討論

鼻咽癌是我國常見的惡性腫瘤之一，以早期發(fā)生頸部淋巴轉移為特點，淋巴轉移也是鼻咽癌治療未控和復發(fā)的主要原因。腫瘤淋巴轉移涉及淋巴管新生，而淋巴管新生的調控機制尚不清楚。目前有報道［1-3］認為VEGF-A 對腫瘤淋巴結轉移有促進作用。

VEGF 家 族 包 括 VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E、胎盤生長因子和VEGF-F［4］。VEGFR 包括VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3。上述VEGF與其相應受體結合后所產生的生物學效應在血管和淋巴管生成方面發(fā)揮不同作用。目前研究已證實VEGFC/D 可通過VEGFR-3 信號通路促進淋巴管新生［5］。既往認為，VEGF-A 是最主要的促血管生長因子，能促進血管內皮細胞分裂和增殖，并增強血管內皮通透性以促進腫瘤的生長和轉移［6］。然而，近年來國外報道VEGF-A 能通過激活淋巴管上的VEGFR-2 促進淋巴轉移。Nagy 等［1］將表達VEGF-A 的腺病毒導入小鼠，發(fā)現(xiàn)VEGF-A 發(fā)揮強大的促淋巴管生成作用，而且生成的淋巴管具有管壁大、無功能瓣膜、淋巴液流動緩慢及淋巴清除率低等特點，這同高表達VEGF-A 的腫瘤中淋巴管特點極其相似。此外，Hirakawa 等［2］將VEGF-A 植入轉基因腫瘤老鼠皮膚中，發(fā)現(xiàn)VEGF-A不僅有力地推動多級皮膚癌變，同時與VEGFR-2 結合表達在發(fā)生轉移的前哨淋巴結和遠處淋巴結的新生淋巴管中，該研究還發(fā)現(xiàn)VEGF-A 不僅促進原發(fā)腫瘤中的淋巴管新生，同時促進淋巴結中的淋巴管新生。Hong 等［3］在小鼠淋巴內皮細胞中發(fā)現(xiàn)VEGF-A 與VEGFR-2 表達，阻斷VEGF-A 與VEGFR-2 可抑制淋巴管新生。在動物皮膚黑色素瘤模型中，阻斷VEGF-A與VEGFR-2 可抑制腫瘤細胞的增殖和擴散［7］。上述結果提示:VEGF-A 與VEGFR-2 能促進腫瘤細胞通過淋巴系統(tǒng)發(fā)生遠處轉移。

沙丹等［8］用免疫組化法檢測了鼻咽癌組織中VEGF 與VEGFR-2 的表達，發(fā)現(xiàn)VEGF 和VEGFR-2 蛋白表達與原發(fā)腫瘤侵犯范圍、淋巴結轉移、臨床分期有關，且兩者表達呈正相關。本研究觀察到鼻咽癌臨床晚期患者血清VEGF-A、VEGFR-2 水平明顯高于早、中期患者，提示兩者與鼻咽癌發(fā)生、進展有密切關系。復發(fā)組兩者水平明顯高于初治組、健康對照組、完全緩解組，這可能是殘留的腫瘤細胞進行增殖、分化，并釋放大量VEGF-A 進入血循環(huán)所致。初治鼻咽癌患者血清VEGF-A 和VEGFR-2 含量高于健康對照者，此與黃小紅等［9］對結腸癌的研究結果相似。完全緩解組患者血清VEGF-A 和VEGFR-2 水平顯著降低，但略高于健康人，此可能與完全緩解患者仍處于癌癥狀態(tài)，體內仍存在微小癌灶有關。VEGF-A 除了與VEGFR-2 結合還可通過VEGFR-1 促進微血管的生成，從而促進淋巴和血行轉移［10］。本研究結果表明，VEGF-A、VEGFR-2水平在T3～T4期與T1～T2期、淋巴結轉移與否、遠處轉移與否之間差異有統(tǒng)計學意義，提示兩者在鼻咽癌直接侵犯和淋巴轉移中均發(fā)揮重要作用。

本文結果顯示，有遠處轉移患者兩分子水平高于無遠處轉移者，不同N 分期之間VEGF-A、VEGFR-2 分子水平比較差異均有統(tǒng)計學意義，且兩分子之間呈正相關，推測兩分子共同作用對促進淋巴轉移有重要作用，其機制可能為:1)VEGF-A 與VEGFR-2 結合后導致內皮細胞增殖和新生淋巴管形成［11］，不僅誘導在腫瘤外周形成新的淋巴管，還使現(xiàn)存的淋巴管增生;2)腫瘤組織淋巴管增多，淋巴管占據(jù)的面積增大，使腫瘤細胞有更多機會與淋巴管接觸，進而侵襲淋巴管并形成轉移。在對其他腫瘤的臨床研究中，VEGF-A 與VEGFR-2 表達與腫瘤臨床病理特征均關系密切，如在肺癌、輸卵管癌、胃癌、乳腺癌中明顯增高［12-15］。

檢測VEGF-A 與VEGFR-2 水平可作為判斷腫瘤淋巴轉移的參考指標，并對鼻咽癌患者預后的臨床評估具有重要的參考價值。對于主要經淋巴道轉移的腫瘤采用針對阻抑新生淋巴管治療，可能成為繼抗腫瘤新生血管治療之后的又一腫瘤生物治療新靶點。目前針對VEGF 信號通路的阻抑新生血管的新藥顯示了良好的發(fā)展前景，但易導致器官出血、傷口愈合延遲等毒副反應［16］。因此進一步深入研究VEGF-A 及其受體在鼻咽癌組織中的表達及作用機制，將有助于了解鼻咽癌發(fā)病機制及為其藥物治療提供新的理論依據(jù)。

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