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      結(jié)核感染T細胞斑點試驗在結(jié)核診斷中的應用分析

      2012-12-15 02:31:16
      中外醫(yī)療 2012年24期
      關鍵詞:結(jié)核結(jié)核病一致性

      申 杰

      衡陽市第三人民醫(yī)院,湖南衡陽 421001

      早期診斷和治療是結(jié)核病防治措施中最重要的環(huán)節(jié)。 結(jié)核菌素試驗(TST)雖是目前臨床最常用于結(jié)核篩查的方法,但假陽性率高,且易受患者身體狀況影響。結(jié)核感染T 細胞斑點試驗(T SPOT.TB)是一項診斷結(jié)核的有效輔助手段,其敏感性和特異性均較高[1]。 我們采T SPOT.TB 和TST 2 種檢測方法在疑患結(jié)核病人中進行對比研究,探討兩者在結(jié)核診斷中的敏感性和特異性。

      1 資料與方法

      1.1 一般資料

      選取2010年12月—2012年3月該院住院及門診疑診或待排除結(jié)核的患者90 例和對照組—健康體檢者35 名,年齡在20~25 歲,平均年齡23 歲。90 例患者中,男性47 例,女性43 例,平均年齡44 歲。 最后確診結(jié)核患者共28 例 (31.1%), 男性16 例(57.1%),女性12 例(42.9%),平均年齡49 歲。 28 例患者中15 例(53.6%)為肺結(jié)核,最后確診均有影像學異常發(fā)現(xiàn),痰涂片發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌3 例;13 例(46.4%)為肺外結(jié)核,其中1 例胰頭附近腹膜后淋巴結(jié)結(jié)核患者,CT 考慮為胰頭癌, 最后通過開腹活檢發(fā)現(xiàn)肉芽腫樣病變明確診斷。 收集每位患者臨床資料以及既往結(jié)核病史、結(jié)核接觸史、家族史以及其他疾病和治療史。

      1.2 方法

      1.2.1 T SPOT.TB 檢測 根據(jù)T SPOT.TB 試劑盒 (Oxford Immunotec,Oxford,UK)操作。 肝素抗凝管采集5 mL 外周靜脈血,密度梯度離心法分離外周血單個核細胞。 在已包被抗體的微量板的4 個孔中,分別加人陽性對照植物血凝素,陰性對照細胞培養(yǎng)液,A 抗原早期分泌性靶抗原6(ESAT-6)以及B 抗原濾液培養(yǎng)蛋白10(CFP-10)。 然后每孔加入外周血單個核細胞,一起置于培養(yǎng)箱溫孵育16~20 h。 PBS 洗脫,再加入堿性磷酸酶標記的抗干擾素抗體孵育2 h,PBS 洗脫,顯色,PBS 終止[2]。 采用放大鏡人工計數(shù)斑點數(shù)。 陽性結(jié)果定義為:測量孔點數(shù)是陰性對照的2 倍以上或者比陰性對照多5 個點。

      1.2.2 結(jié)核菌素實驗 采用Mantoux 法,取PPD0.1 mL(含5 單位結(jié)核菌素) 行前臂尺側(cè)皮內(nèi)試驗,48~72 h 后觀察結(jié)果。 硬結(jié)直徑≥10 mm 為TST 陽性結(jié)果。

      1.2.3 結(jié)核診斷 綜合考慮臨床表現(xiàn)、放射學、病原學以及組織病理學、 對經(jīng)驗性抗癆治療反應等最后作出肺結(jié)核及肺外結(jié)核的臨床診斷。

      1.2.4 評價指標 采用敏感性、特異性、準確度、陽性預測值(PPV)、陰性預測值(NPV)、陽性似然比(LR+)、陰性似然比(LR-)等作為診斷試驗的評價指標[3]。

      1.3 統(tǒng)計方法

      連續(xù)變量采用均數(shù)±標準差表示。 率的比較采用χ2檢驗或Fisher 確切概率法。 分析兩種試驗方法診斷效能的一致性用McNemar 檢驗,一致性強度采用K 系數(shù)。

      2 結(jié)果

      2.1 TST 與T SPOT.TB 診斷效能一致性分析

      TST 與T SPOT.TB 診斷效能的一致性分析發(fā)現(xiàn),兩種檢驗方法雖然總體檢測結(jié)果陽性率未有顯著差異(P=0.377),但一致性較弱。在結(jié)核患者和非結(jié)核患者中,T SPOT.TB 的診斷效能均顯著高于TST(P=0.021,P=0.004),兩者一致性差。

      2.2 肺結(jié)核和肺外結(jié)核患者TST 及T SPOT.TB 結(jié)果分析

      T SPOT.TB 在肺結(jié)核患者中陽性率達100%(15/15),與TST 在肺結(jié)核中的陽性率66.7%(10/15)相比,顯著增高(P=0.042)。在肺外結(jié)核,T SPOT.TB 陽性率達76.9%(10/13),雖明顯高于TST 在肺外結(jié)核的陽性率53.8%(7/13),但未達統(tǒng)計學意義(P=0.411)。 與T SPOT.TB 評價指標比較:TST 與T SPOT.TB 評價指標比較結(jié)果顯示:T SPOT.TB 的敏感性、特異 性、PPV、NPV、 準確度等均顯著高于TST (P<0.05);T SPOT.TB 的LR+值明顯高于TST,LR-值明顯低于TST。 見表1。

      表1 TST 與T SPOT.TB 檢測評價指標(%)

      2.3 38kD-IgG 和T SPOT-TB 試驗的敏感性分別為73.1%和92.3%; 聯(lián)合檢測菌陽者和菌陰者的陽性率的均數(shù)為96.3%。38kD-IgG、T SPOT-TB 試驗檢測非結(jié)核對照人員的特異性分別為70.0%、94.0%,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01),聯(lián)合檢測的特異性為66.0%。 見表2。

      表2 38kD-IgG 和T SPOT-TB 的試驗結(jié)果的比較(%)

      3 討論

      快速診斷和早期治療結(jié)核是發(fā)展中國家結(jié)核防治的重點。由于我國卡介苗接種率高,TST 假陽性率高;且TST 易受機體免疫狀態(tài)影響,在免疫功能受抑制人群中的低反應率限制了其應用。 結(jié)核病原學診斷是金標準,但受標本中細菌的數(shù)量影響大,且結(jié)核菌培養(yǎng)周期長,不利于早期快速診斷;因此,尋找新的快捷診斷方法對結(jié)核控制及預防至關重要。 1996年Mahairas 發(fā)現(xiàn)結(jié)核分支桿菌中存在一段名為“RDI”的基因序列,RDI 編碼產(chǎn)生的CFP-10 以及ESAT-6 為結(jié)核分支桿菌所特有。

      該研究顯示,11 例TST 假陰性患者均與高齡、嚴重疾病狀態(tài)或合并免疫抑制劑治療、嚴重營養(yǎng)不良、結(jié)締組織疾病等有關,說明了TST 對免疫抑制或免疫低下合并結(jié)核感染患者容易出現(xiàn)假陰性。 該研究中T SPOT.TB 假陰性患者未發(fā)現(xiàn)有接受免疫抑制治療及合并結(jié)締組織病、HIV 等,初步顯示T SPOT.TB 受免疫狀態(tài)影響較TST 少,更適用于免疫低下、接受免疫抑制劑治療患者結(jié)核感染的檢測。最近有研究顯示,嚴重肺結(jié)核患者對RDI 肽段反應性低,對RDI 肽段反應性的高低與細菌抗原負荷相關,該研究中3 例T SPOT.TB 假陰性患者是否可歸結(jié)于上述原因,尚須進一步探討。

      我國是結(jié)核高發(fā)大國,隱匿性結(jié)核發(fā)病率高,這不可避免會削弱T SPOT.TB 在診斷活動性肺結(jié)核時的特異性,但由于樣本量限制,未對活動性結(jié)核人群進行分析。 有報道顯示,在隱匿性肺結(jié)核發(fā)病率高的國家,T SPOT.TB 在診斷活動性肺結(jié)核的特異性僅47%(95%CI:36%~59%),在我國具體情況還需深入研究,有關T SPOT.TB 斑點數(shù)與結(jié)核活動的相關性也需進一步探討。

      [1] 樂軍,梁莉,李蘇輝,等.酶聯(lián)免疫斑點試驗快速診斷結(jié)核分枝桿菌感染的臨床應用價值[J].中華檢驗醫(yī)學雜志,2010,29(11):1005-1008.

      [2] 彭衛(wèi)生,王英年,肖成志.新編結(jié)核病學[M].2 版.北京:中國醫(yī)藥出版社,2008:104.

      [3] 全國結(jié)核病流行病學抽樣調(diào)杏技術指導組, 全國結(jié)核病流行病學抽樣調(diào)查辦公室.2000年全國結(jié)核病流行病學抽樣調(diào)查報告[J].中國防癆雜志,2002(24):98-102.

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