,

(青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室，山東 青島 266071)

乙型肝炎病毒(HBV)可通過(guò)血源、性和母嬰垂直途徑等傳播，其中母嬰垂直傳播約占我國(guó)HBV感染者的30%～50%，每年約有80萬(wàn)新生兒通過(guò)母嬰傳播成為HBV表面抗原(HBsAg)攜帶者。HBV母嬰垂直傳播可發(fā)生于產(chǎn)前、產(chǎn)時(shí)和產(chǎn)后等，其中，在妊娠期間病毒通過(guò)胎盤(pán)屏障引起胎兒宮內(nèi)感染是母嬰垂直傳播最重要的方式。如果出生的嬰兒為女性， 未來(lái)會(huì)以同樣的方式使其后代獲得感染，這可能是我國(guó)人群HBV感染率居高不下的重要原因之一。 因此， 研究HBV感染孕婦發(fā)生宮內(nèi)感染的風(fēng)險(xiǎn)度及其對(duì)胎兒的危害，對(duì)采取有效的干預(yù)措施阻斷HBV宮內(nèi)感染或減輕損傷具有重要的意義。本文選取83例HBV感染孕婦，檢測(cè)其新生兒臍帶血中HBsAg, 并同時(shí)檢測(cè)臍帶血淋巴細(xì)胞染色體畸變情況，旨在探討HBV宮內(nèi)感染與新生兒臍帶血淋巴細(xì)胞染色體畸變的相關(guān)性。 現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

取淄博市婦幼保健院住院分娩HBV感染孕產(chǎn)婦83例，年齡22～40歲，其中HBsAg單項(xiàng)陽(yáng)性者12例，HBsAg、抗-HBc雙項(xiàng)陽(yáng)性者8例，HBsAg、HBeAg雙項(xiàng)陽(yáng)性者24例，HBsAg、HBeAg、抗-HBe三項(xiàng)陽(yáng)性者27例，HBsAg、抗-HBe、抗-HBc陽(yáng)性者12例；1年內(nèi)無(wú)X線內(nèi)外照射史及化學(xué)物質(zhì)接觸史。共分娩出新生兒83例，男43例，女40例。對(duì)照組為隨機(jī)選取的20例無(wú)HBV感染的孕產(chǎn)婦及其所生新生兒。

1.2 臍帶血采集與處理

胎兒娩出后，對(duì)臍帶進(jìn)行常規(guī)消毒，用一次性注射器取臍靜脈血3 mL，立即接種入1640培養(yǎng)基，并同時(shí)保留抗凝血送檢。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1新生兒臍帶血HBsAg檢測(cè) 采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)新生兒臍帶血HBsAg，診斷試劑盒由英科新創(chuàng)科技有限公司生產(chǎn)。操作步驟與結(jié)果判斷嚴(yán)格參照說(shuō)明書(shū)的要求。以新生兒臍帶血中HBsAg陽(yáng)性作為宮內(nèi)感染診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.3.2外周血淋巴細(xì)胞染色體制備 采用廣州一生駿1640培養(yǎng)基與廣州達(dá)暉1640培養(yǎng)基兩線培養(yǎng)。臍帶血接種后置37 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)69～72 h，加50 mg/L的秋水仙素40 μL搖勻，再培養(yǎng)30 min后收獲。常規(guī)低滲、預(yù)固定、固定、制片、染色。

1.4 染色體畸變的判斷標(biāo)準(zhǔn)

顯微鏡下每例標(biāo)本每線各計(jì)數(shù)50個(gè)中期細(xì)胞分裂象，觀察、記錄其染色體畸變情況，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié) 果

本文83例HBV感染產(chǎn)婦新生兒臍帶血中共檢出宮內(nèi)感染41例，感染率為49.4%；對(duì)照組20例新生兒中，未檢出HBV宮內(nèi)感染。12例HBsAg單項(xiàng)陽(yáng)性孕婦所生新生兒，檢出HBsAg陽(yáng)性者2例，占16.7%；8例HBsAg、抗-HBc雙項(xiàng)陽(yáng)性孕婦的新生兒中，未檢出HBsAg陽(yáng)性者；24例HBsAg、HBeAg雙項(xiàng)陽(yáng)性孕婦所生新生兒，檢出HBsAg陽(yáng)性者12例，占50.0%；27例HBsAg、HBeAg、抗-HBe三項(xiàng)陽(yáng)性孕婦所生新生兒，檢出HBsAg陽(yáng)性者20例，占74%；12例HBsAg、抗-HBe、抗-HBc陽(yáng)性孕婦所生的新生兒中，檢出HBsAg陽(yáng)性者7例，占58.3%。

將83例新生兒分為宮內(nèi)感染組和未感染組，宮內(nèi)感染組41例臍帶血淋巴細(xì)胞均觀察到染色體畸變，6例染色體畸變率<3%，24例染色體畸變率為3%～5%，11例染色體畸變率>5%，其中1例染色體數(shù)目異常；未感染組29例發(fā)生染色體畸變者占69%，3例染色體畸變率<3%，19例染色體畸變率為3%～5%，7例染色體畸變率>5%；對(duì)照組14例發(fā)現(xiàn)為3%～5%畸變(70%)，其畸變率均<3%。感染組臍帶血淋巴細(xì)胞染色體畸變風(fēng)險(xiǎn)高于非感染組及對(duì)照組(χ2=27.03,P<0.01)。

3 討 論

目前，臨床常用HBV感染的實(shí)驗(yàn)室診斷的指標(biāo)仍為“兩對(duì)半”，由于其中的3種抗體(抗-HBs、抗-HBc和抗-HBe)均為IgG，可通過(guò)胎盤(pán)，故臍帶血HBsAg陽(yáng)性是診斷胎兒宮內(nèi)感染的一個(gè)重要指標(biāo)[1]。刁奇志等[2]的研究結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)，臍帶血HBsAg陽(yáng)性新生兒外周血HBV DNA均為陽(yáng)性，并且臍帶血采集簡(jiǎn)單，對(duì)新生兒無(wú)創(chuàng)傷，因此，用臍帶血HBV標(biāo)志物作為篩查胎兒宮內(nèi)感染指標(biāo)已得到廣泛認(rèn)可。本研究結(jié)果顯示，HBV感染孕婦胎兒獲得先天性感染的概率可高達(dá)近50%，與部分文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果一致。HBV先天性感染的嬰兒治愈率非常低，其成年后一旦發(fā)病，90%左右都呈慢性病程，愈后較差，與成年人HBV感染大多呈急性病程形成鮮明的反差。因此，我國(guó)防治乙型肝炎的重點(diǎn)在于有效阻斷母嬰垂直傳播，包括新生兒強(qiáng)制接種乙型肝炎疫苗及高效價(jià)HBV抗血清的應(yīng)用等。

核型分析結(jié)果顯示， 41例先天性感染的新生兒，其臍帶血淋巴細(xì)胞染色體畸變發(fā)生率為100%，高于未感染組的69%，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著差異,未感染組與對(duì)照組染色體畸變發(fā)生率無(wú)顯著差異；但是對(duì)照組染色體畸變率在1%～3%之間，感染組臍帶血染色體畸變率>3%的構(gòu)成比高于未感染組; 并且感染組中有1例發(fā)生染色體數(shù)目異常, 表明臍帶血染色體畸變的發(fā)生與HBV宮內(nèi)感染密切相關(guān)。 HBV導(dǎo)致染色體畸變可能機(jī)制如下。①患有乙肝的孕婦可以通過(guò)胎盤(pán)將HBV傳給胎兒，HBV通過(guò)抑制和干擾胎兒細(xì)胞 DNA的合成而導(dǎo)致某些染色體發(fā)生斷裂、重接或缺失等畸變。②基因性傳播，即在受精卵形成之前，孕婦體內(nèi)的HBV DNA已整合到卵細(xì)胞的DNA上，并使受精卵的染色體受到損害，也可能HBV在生殖細(xì)胞分裂過(guò)程中介入，由此導(dǎo)致新生兒的染色體發(fā)生畸變甚至形成嵌合型或者純合型染色體畸變(包括結(jié)構(gòu)異常和數(shù)目異常)。

本文結(jié)果顯示，未感染組臍血淋巴細(xì)胞的畸變構(gòu)成比與對(duì)照組相似，但畸變率明顯增高，其原因?yàn)椋弘m然卵細(xì)胞未整合HBV DNA，但是HBV感染孕婦卵細(xì)胞質(zhì)量下降，使受精卵在分裂過(guò)程中出現(xiàn)各種類(lèi)型的畸變，具體原因有待進(jìn)一步探討。

正常人淋巴細(xì)胞染色體畸變率較低，大約為0.55%～ 0.58%，在受到射線、化學(xué)物質(zhì)、病毒等因素刺激后會(huì)引發(fā)染色體畸變，使畸變率增加[3]；也有報(bào)道新生兒臍帶血淋巴細(xì)胞染色體畸變率可達(dá)到1%左右[4]。本研究結(jié)果顯示，對(duì)照組新生兒臍帶血淋巴細(xì)胞染色體畸變率為1%～3%，高于文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果，分析其原因可能為：①本研究?jī)H以孕婦有無(wú)HBV感染為分組依據(jù)，未考慮其他導(dǎo)致染色體損傷的理化因素；②不同實(shí)驗(yàn)室判斷標(biāo)準(zhǔn)略有差異，有一定的主觀性。有待進(jìn)一步研究探討。

[1] 趙澄泉,戴淑真,邵濟(jì)鈞. 先天性巨細(xì)胞病毒、乙型肝炎病毒和弓形體感染的研究[J]. 青島醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 1991,27(2):133-137.

[2] 刁奇志,張丹,王代永. 臍帶血乙型肝炎標(biāo)志物篩查乙型肝炎病毒宮內(nèi)感染的探討[J]. 中國(guó)病原生物學(xué)雜志, 2009,4(1):14-15.

[3] 周煥庚,夏家輝,張思仲. 人類(lèi)染色體[M]. 北京:科學(xué)出版社, 1987:369-371.

[5] 林寶寧,趙玲玲,畢風(fēng)華. 2 269例新生兒臍帶血染色體分析[J]. 中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志, 1997,4:35-36.