孟連仲，董耀勇

（唐山市豐南區(qū)農(nóng)牧局，河北 唐山 063300）

唐山市豐南區(qū)南孫莊鄉(xiāng)某特種養(yǎng)殖場(chǎng)總共飼養(yǎng)1 851只獺兔，于2013年5月1日發(fā)生疫情。其中有906只發(fā)病，主要以急性發(fā)病、咳嗽、呼吸急促、鼻流漿液或濃性鼻液、腹瀉、排血樣稀便、突發(fā)死亡為特征。場(chǎng)方獸醫(yī)按兔魏氏梭菌性腸炎治療，先后使用恩諾沙星、鏈霉素、頭孢菌素并緊急接種A型魏氏梭菌疫苗。一周未見(jiàn)好轉(zhuǎn)，反而加劇，死亡種兔25只、幼兔259只、青年兔301只，疫情向全場(chǎng)蔓延。接到疫情報(bào)告后，筆者會(huì)同區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心的有關(guān)專(zhuān)家立即趕赴兔場(chǎng)。經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查，臨床觀(guān)察，病體解剖，實(shí)驗(yàn)室診斷最終確診為兔病毒性出血癥、巴氏桿菌病、大腸桿菌病、球蟲(chóng)病混合感染。通過(guò)采取及時(shí)有效的措施，兩周后疫情得到有效控制，現(xiàn)總結(jié)報(bào)告如下。

1 流行病學(xué)調(diào)查

發(fā)病以幼兔、青年兔為主，種兔發(fā)病率較低。

經(jīng)調(diào)查：2013年4月25日，該場(chǎng)從天津某種兔場(chǎng)購(gòu)入18只種公兔，進(jìn)場(chǎng)時(shí)未采取檢疫隔離等措施，隨即放入兔群中飼養(yǎng)。4月29日又逢降雨天氣，由于兔舍年久失修，房屋漏雨嚴(yán)重，造成舍內(nèi)陰冷潮濕，通風(fēng)不良。5月1日發(fā)現(xiàn)5只幼兔急性死亡，次日死亡8只，第3d 有半數(shù)以上幼兔發(fā)病，死亡率達(dá)50.6%。查閱養(yǎng)殖檔案發(fā)現(xiàn)種兔普遍接種了兔瘟疫苗，而幼兔、青年兔接種率不足40%，大多數(shù)因病未及時(shí)免疫，另該場(chǎng)從未接種過(guò)大腸桿菌、巴氏桿菌疫苗，存在嚴(yán)重的免疫缺失。病兔常突然死亡，日死率達(dá)10.9%。此外該場(chǎng)使用疫苗并非從國(guó)家認(rèn)可的廠(chǎng)家及機(jī)構(gòu)采購(gòu)。

2 臨床癥狀

最急性：突然發(fā)病，沒(méi)有明顯臨床癥狀，發(fā)病后10～12h 體溫41℃～42℃。死前采食正常，突然抽搐，慘叫幾聲即刻死亡。

急性型：病兔表現(xiàn)精神抑郁，體溫41℃～42℃，食欲減退或不食，飲水量增加，從鼻腔中流出漿液性鼻液或濃性分泌物，病兔打噴嚏咳嗽，呼吸困難，被毛粗亂無(wú)光澤。臥伏不動(dòng)，迅速消瘦，腹瀉排帶血的稀便。病程2～3d。臨死前，短期興奮，掙扎狂奔，咬籠架，前肢俯臥，后肢支起，震顫，四肢痙攣，角弓反張，尖叫，迅速死亡。部分病死前鼻孔流出泡沫狀血液，癥程 1～2d。

慢性型：感染兔體溫升高41℃左右，精神萎頓，食欲不振，被毛粗亂無(wú)光澤，排稀便或血樣糞便，迅速消瘦，病程5～7d，最后衰竭死亡。

3 病理變化

共剖檢15只病死兔，其中幼兔5只、青年兔5只、種公兔3只、母兔2只，病理變化基本一致。病死兔鼻腔、喉頭和支氣管黏膜嚴(yán)重瘀血、出血，最為顯著的為彌漫性出血，在氣管、支氣管腔內(nèi)有大量的淡紅色泡沫狀液體，呈現(xiàn)紅氣管外觀(guān)。肺臟水腫膨脹、嚴(yán)重出血，表面有針尖大小出血點(diǎn)，呈灰黃肝肺外觀(guān)。切開(kāi)肺組織流出多量紅色泡沫狀液體，心臟擴(kuò)張，心包水腫，心內(nèi)膜有出血點(diǎn)，肝臟腫大瘀血有出血點(diǎn)和出血斑，表面上有灰白色壞死灶，質(zhì)地脆弱，膽囊腫大，膽汁充盈。脾臟瘀血、出血，腎臟瘀血腫大，腎外膜有少量出血點(diǎn)。胃膨大，充滿(mǎn)大量液體和氣體，胃黏膜瘀血，呈暗紅色。十二指腸、空腸、回腸、盲腸的腸壁血管充血、出血、水腫，十二指腸病變明顯腫脹，內(nèi)腔擴(kuò)張，呈急性、卡他性或纖維素性腸炎，腸系膜淋巴結(jié)腫大、出血。

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1 病毒分離與鑒定

4.1.1 無(wú)菌取樣。無(wú)菌采取病死兔的肝、脾、腎病變組織，研碎按1∶10 加入生理鹽水制成乳劑，再用雙抗處理30min，3 000r/min 離心15min 取上清液作被檢病料備用。

4.1.2 回歸實(shí)驗(yàn)。取被檢病料按1mL/kg 體重給3只體重1.5kg 的未免疫的健康兔皮下注射，結(jié)果3只兔分別在32h、40h、48h 后死亡，并出現(xiàn)兔病毒性出血病臨床癥狀和病理變化。

4.1.3 血凝（HA）試驗(yàn)。取被檢病料按用生理鹽水作1:10 稀釋?zhuān)缓蟀?2倍連續(xù)遞進(jìn)稀釋成 1∶20、1∶40，至1∶2 560時(shí)充分搖勻，同時(shí)設(shè)置生理鹽水對(duì)照，每管分別加入人O型紅細(xì)胞懸液進(jìn)行微量血凝試驗(yàn)，室溫下作用30min，結(jié)果出現(xiàn)凝集反應(yīng)，凝集效價(jià)均在1∶128 以上，而生理鹽水對(duì)照組未出現(xiàn)凝集反應(yīng)。

4.1.4 血凝抑制（HI）試驗(yàn)。取被檢病料等量，加入稀釋的已知兔病毒性出血癥病毒陽(yáng)性血清搖均，再加入1%的人O型血紅細(xì)胞懸液，未發(fā)生凝集反應(yīng)表明被檢病料中存在兔病毒性出血癥病毒。

4.2 直接涂片鏡檢

采取病死兔的心血、肝、脾、淋巴結(jié)涂片，革蘭氏染色后鏡檢可見(jiàn)兩端鈍圓的陰性中等大小桿菌，以堿性美蘭液或瑞士染色液鏡檢可見(jiàn)典型的兩極著色的短桿菌。

4.3 細(xì)菌分離培養(yǎng)

4.3.1 無(wú)菌取樣。無(wú)菌采取病死兔肝、脾組織，接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、鮮血瓊脂培養(yǎng)基上，置于37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h，在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上形成一種圓形、凸起光滑、濕潤(rùn)、邊緣整齊、中等大小的灰白色菌落；在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上形成一種中央凹的紅色菌落；在鮮血培養(yǎng)基上生長(zhǎng)出灰白色露珠狀半透明、濕潤(rùn)、表面光滑、邊緣整齊的小菌落，不溶血。分別抽取菌落涂片，用革蘭氏瑞氏染色鏡檢，可見(jiàn)細(xì)菌形態(tài)與直接用心血、肝、脾、淋巴結(jié)涂片相同。

4.3.2 生化試驗(yàn)。通過(guò)生化試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上形成的菌落能夠發(fā)酵葡萄糖、乳糖、甘露醇，產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，甲基紅實(shí)驗(yàn)為陽(yáng)性，V-P 實(shí)驗(yàn)陰性，三糖鐵瓊脂穿刺培養(yǎng)斜面不產(chǎn)生H2S,管底變黃實(shí)驗(yàn)結(jié)果可判定有大腸桿菌感染，在鮮血瓊脂培養(yǎng)基上形成的菌落能發(fā)酵葡萄糖、果糖，產(chǎn)酸、不產(chǎn)氣，發(fā)酵乳糖、鼠李糖、山梨醇、水楊素、甲基紅、V-P 試驗(yàn)（+）、尿酸酶試驗(yàn)（-）、靛基質(zhì)試驗(yàn)、接觸酶、硫化氫試驗(yàn)（+）；不液化明膠實(shí)驗(yàn)結(jié)果可判定有巴氏桿菌感染。

4.3.3 動(dòng)物試驗(yàn)。采集病死兔的肝、脾組織研碎，用生理鹽水制成1∶10 的乳劑，靜止后取清液0.2mL，接種3只小白鼠作試驗(yàn)，分別取3只注射生理鹽水作對(duì)照，在20～32h內(nèi)試驗(yàn)組小白鼠死亡，采集心血涂片進(jìn)行檢查，其形態(tài)與培養(yǎng)特性都和病料分離的細(xì)菌相同，對(duì)照組無(wú)死亡。

4.3.4 藥敏試驗(yàn)。挑取典型菌落均勻涂于鮮血瓊脂平板上，用多種抗菌藥物紙片做抑菌試驗(yàn)，結(jié)果以上兩菌對(duì)頭孢噻呋、氟苯尼考、替米考星高敏，對(duì)泰妙菌素、強(qiáng)力霉素中敏，對(duì)慶大霉素、土霉素、阿莫西林低敏。

4.4 糞便、腸病變部刮屑物檢查

4.4.1 腸黏膜刮取物檢查。刮取小腸、盲腸有病變部位的黏膜，放載玻片上，滴加5%甘油生理鹽水1～2滴，充分調(diào)和均勻，加蓋玻片后用高倍顯微鏡檢查，可見(jiàn)大量球形橘子瓣?duì)畹牧阎丑w和呈香蕉形或月牙形的裂殖子以及圓形的卵囊。

4.4.2 糞便檢查。取病兔糞便應(yīng)用飽和生理鹽水進(jìn)行漂浮過(guò)濾后，靜置0.5h 后，用直徑0.5～1.0cm 的金屬圈，蘸取表面液膜抖落于載玻片上，加蓋后鏡檢，可見(jiàn)大量球形以及圓形的卵囊。

通過(guò)流行病學(xué)、臨床癥狀、病理解剖及實(shí)驗(yàn)室診斷，確診該場(chǎng)暴發(fā)的疾病為兔病毒性出血癥、巴氏桿菌、大腸桿菌及球蟲(chóng)病混合感染。

5 防治措施

5.1 隔離治療

隔離病兔，用兔用病毒性出血癥高免血清肌注，成年兔 3mL，青年兔 2.5mL、幼兔 2mL，1次/d，連用3d。發(fā)病兔同時(shí)肌注氟苯尼考20mg/kg 體重，1次/d，連用5d。用應(yīng)激電解多維12.5g、黃芪多糖粉5g、葡萄糖25g 兌水50kg 全群飲用，飼料中添加氯苯胍0.3g/kg 飼料，連用5d，第6d 用磺胺間甲氧嘧啶按0.01%濃度混入飼料中，連用5d。病情嚴(yán)重者可用5%葡萄糖30mL、地塞米松0.1mg/kg 體重、硫酸慶大小諾霉素0.15mL/kg 體重，藥液加溫至37℃左右進(jìn)行腹腔注射，2次/d，連用3d。以補(bǔ)充體液調(diào)整電解質(zhì)平衡。

5.2 緊急接種

對(duì)未出現(xiàn)臨床癥狀的假定健康兔，注射兔病毒性出血癥、巴氏桿菌病二聯(lián)滅活苗，1月齡以上皮下注射2mL，乳兔、幼兔注射1mL，成年兔、青年兔注射3mL，同時(shí)100kg 水中添加黃芪多糖10g、電解多維25g 飲水1次/d，連用1周，1周后補(bǔ)注兔大腸桿菌滅活疫苗，幼兔1mL、成兔2mL，皮下注射。

5.3 消毒滅源

加強(qiáng)飼養(yǎng)場(chǎng)地消毒工作，舍內(nèi)地面、糞板、尿溝等用2%的火堿噴灑消毒，帶兔消毒用衛(wèi)康1∶500倍、百毒殺 1∶1 000倍交替使用，1次/d，連用 2周。對(duì)病死兔進(jìn)行焚燒深埋，防止疫源擴(kuò)散。

5.4 加強(qiáng)管理

提高舍內(nèi)溫度，及時(shí)修補(bǔ)兔舍，合理通風(fēng)，降低飼養(yǎng)密度，保持舍內(nèi)清潔衛(wèi)生，提供全價(jià)營(yíng)養(yǎng)日糧和清潔飲水。

5.5 藥物預(yù)防

對(duì)假定健康兔飲水中加入球蟲(chóng)殺（主要成分：磺胺二甲基嘧啶）100g 兌水300kg，連用5d，然后使用氯苯胍按33mg/kg 飼料均勻拌入飼料，連喂一周。

采用上述防制措施，兩周后病情得到有效控制，兔群恢復(fù)了健康。此次共治療321只病兔，治愈306只，治療無(wú)效死亡15只，治愈率達(dá)95.32%，為養(yǎng)殖戶(hù)挽回了重大經(jīng)濟(jì)損失。