微囊藻毒素分析檢測技術(shù)研究

藍藻水華爆發(fā)是水體富營養(yǎng)化特征之一，微囊藻毒素（microcystin，MC）是水華藍藻產(chǎn)生的主要毒素，對水生生物、人類飲水安全、食品安全和人類健康都構(gòu)成嚴重影響。2007年藍藻水華爆發(fā)引發(fā)了無錫市公共飲用水危機，這使得無錫、蘇州與湖州等太湖周邊城市居民有長期暴露于藍藻毒素污染引起健康危害的風險?；谝陨显?，湯堅、孫秀蘭、肖付剛等眾多科研工作者以太湖為研究載體，圍繞微囊藻毒素的分析檢測技術(shù)開展了深入的研究，取得了豐富的研究成果。

CN200710023770.8公開了一種應用可特異性識別藻毒素的抗體來制備一種藻毒素免疫親和層析填料和免疫親和層析柱及其使用方法。其目的是為了方便從水、水產(chǎn)品、藻類及其制品的提取液中“一步法”富集純化藻毒素，純化后的樣品進HPLC或LC-MS等進行定性定量分析。該發(fā)明中所制備的藻毒素免疫親和層析柱對一種藻毒素特異性強，純化效果顯著，明顯優(yōu)于現(xiàn)有的固相萃取方法。該藻毒素免疫親和層析柱提高了富集和純化的效率，從而提高了檢測方法的靈敏度和準確性，制備方法簡單，可重復使用。CN200810242516.1公開了一種微囊藻毒素-LR(MC-LR)多抗免疫親和柱(IAC)的制備和使用方法，其研制的IAC是將MC-LR多抗固定于柱中，從而吸附樣品溶液中的MC-LR，洗脫后起到富集和凈化的效果，然后進HPLC進行定性定量分析。作為前處理過程，IAC富集優(yōu)于現(xiàn)有的固相萃取(SPE)法。在HPLC圖中顯示MC-LR多抗IAC能將MC-LR的峰與其它雜質(zhì)峰分開，不至影響測定結(jié)果，而SPE凈化由于雜質(zhì)太多，MC-LR峰甚至難以分辨。由于MC-LR多抗與MC-LR能夠特異性結(jié)合使IAC有很好的特異性，一次凈化能除去絕大部分干擾物。肖付剛，趙曉聯(lián)，湯堅等（2009）應用自制的微囊藻毒素免疫親和層析柱為凈化工具，建立了固相萃取柱富集、免疫親和層析柱凈化、液質(zhì)聯(lián)用法檢測藍藻樣品中MC的方法。結(jié)果顯示:只用固相萃取柱富集,會殘留大量雜質(zhì),干擾MC(尤其是MC-LR)的測定結(jié)果。而用免疫親和層析柱凈化能有效去除藻樣中的雜質(zhì)，排除干擾，通過液質(zhì)聯(lián)用法定量,能準確測定藻樣中的微囊藻毒素-RR(MC-RR)和-微囊藻毒素-LR(MC-LR).方法的檢出限為2.5 μg/L;線性范圍為5～500 μg/L;MC-RR和MC-LR平均回收率高于84%;相對標準偏差低于5%。孫秀蘭在CN200810242879.5中公開了一種微囊藻毒素-LR定量快速檢測生物傳感器的制備及應用。該檢測傳感器為阻抗型電化學傳感器，由CHI760C型電化學工作站，三電極體系：免疫電極為工作電極，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為對電極組成；將L-半胱氨酸，膠體金，微囊藻毒素抗體復合物分別包被于裸金電極表面作為工作電極；當微囊藻毒素抗體與樣液中的抗原(MC-LR)結(jié)合時將引起參比電極與工作電極之間電勢差的變化，與樣品中抗原濃度呈定量關(guān)系，以此進行微囊藻毒素的檢測；成功建立了快速、特異、靈敏的檢測微囊藻毒素抗原的生物傳感器；檢測線性范圍：0.05～300 ng/mL，檢出限1.82×10-2ng/mL。既可以對天然湖泊水進行實時監(jiān)測，又可以對水廠飲用水的制備過程進行實時監(jiān)控。閆建秀,虞銳鵬,湯堅等（2008）建立一種高效液相色譜法測定太湖螄螺中微囊藻毒素RR和LR的方法。該方法采用固相萃取法進行純化富集,用2極管陣列檢測器檢測，比較不同提取溶劑、提取時間和淋洗液等因素對樣品中微囊藻毒素提取效率的影響。 色譜條件:色譜柱 300SB Zorbax C18柱(250 mm×4.6 mm I.d.,5 μm),流動相為乙腈∶水(V∶V)=35∶65，檢測波長為238 nm。在2.5～100 ng的范國內(nèi),進樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。該方法靈敏度高，簡便快捷，可作為水生物中藻毒素風險評價和監(jiān)測水生物體內(nèi)蓄積的藻毒素較可靠的分析方法。鈕偉民，何恩奇等（2011）建立了微囊藻毒素-LR(MC-LR)的納米均相時間分辨熒光免疫分析法。該方法所得回歸方程為y=-1 812x2-6 075x+12 424(R2=0.9976),檢出限為0.02 ng/mL，批內(nèi)RSD為5.8%～7.2%，批間RSD為9.5%～9.9%，平均回收率為85.0%～120.0%。該方法具有特異性強、靈敏度高、穩(wěn)定性好、操作簡便、耗時短、測定范圍寬、試劑壽命長的優(yōu)點，尤其適合于生活飲用水中微量MC-LR的分析。

多種適用于不同種類樣品的微囊藻毒素檢測技術(shù)的建立及其應用，為水體中微囊藻毒素污染的早期預警提供了理論依據(jù)，從而降低居民通過飲水途徑對于微囊藻毒素的暴露。

（江南大學圖書館 張群 供稿）