溴氰菊酯在急性中毒大鼠體內(nèi)的分布

（山西醫(yī)科大學法醫(yī)學院，山西 太原 030001）

溴氰菊酯（deltamethrin）是一種常見擬除蟲菊酯類低毒性農(nóng)藥，農(nóng)業(yè)上多與其他種類的殺蟲劑混配使用。由含溴氰菊酯的殺蟲劑引起中毒或服用溴氰菊酯自殺的事件時有報道[1-2]。目前，溴氰菊酯的檢測大多局限于水樣、水產(chǎn)品及果蔬等農(nóng)藥殘留量的測定，部分學者[3]還對溴氰菊酯代謝物的檢測進行了研究，而動物體內(nèi)溴氰菊酯的研究少有報道。本研究建立溴氰菊酯灌胃急性中毒大鼠模型，氣相色譜-電子捕獲檢測器法（gas chromatography-electron capture detector，GCECD）定量檢測，探討溴氰菊酯在急性中毒大鼠體內(nèi)的分布情況。

1 材料與方法

1.1 動物與試劑

實驗動物：雄性大鼠24只，體質(zhì)量約200g，由山西醫(yī)科大學實驗動物中心提供。

溴氰菊酯標準品（2mg/mL）購自公安部物證鑒定中心；溴氰菊酯乳油（25 g/L）購自拜耳生物科學（中國）有限公司；石油醚、丙酮、乙醚、甲醇、無水硫酸鈉、中性氧化鋁等均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 氣相色譜條件

Agilent 7890A氣相色譜儀（美國安捷倫科技有限公司），色譜柱為Agilent HP-5毛細管柱（30 m×320μm×0.25μm），柱溫 100℃，保持 1min，以 35℃/min程序升溫至260℃，保持1min；再以5℃/min升溫至280℃，保持 5min；進樣口溫度 250℃；載氣（N2）流速6 mL/min；分流模式進樣，分流比 20∶1；檢測器（μ-ECD）溫度300℃。

1.2.2 動物模型及樣品提取

雄性大鼠24只，隨機分成4組，實驗前隔夜禁食，其中2組分別以512mg/kg和1024mg/kg劑量溴氰菊酯灌胃染毒，另2組為空白對照，分別以等量生理鹽水灌胃，實驗前隔夜禁食。灌胃1.5h后，乙醚麻醉致死，迅速解剖，取血液、心、肝、肺、腎、腦等，4℃保存待檢。

1.2.3 樣品處理

取血液1mL或組織1g于研缽內(nèi)，少量多次加入無水硫酸鈉研磨至干砂狀，移至150mL碘量瓶中，加入混合溶劑［V（石油醚）∶V（丙酮）=4∶1］ 25 mL，振蕩浸提10 min，提取液過凈化柱（無水硫酸鈉、中性氧化鋁）過濾，濾液于30℃水浴中揮發(fā)至干，殘留物用20μL甲醇定容，1μL進樣，GC-ECD分析。

1.2.4 工作曲線

分別取空白血液1 mL、空白肝1 g若干份，添加溴氰菊酯標準品適量，配制成溴氰菊酯質(zhì)量濃度（或質(zhì)量分數(shù)）分別為 0.1、0.5、1、2、5、10、20、40μg/mL（或μg/g）的系列質(zhì)控樣品，按1.2.3項處理并檢測。以溴氰菊酯峰面積（y）對血液（或肝）中溴氰菊酯質(zhì)量濃度（或質(zhì)量分數(shù)）（x）進行線性回歸（溴氰菊酯以兩個峰面積之和計）。

1.2.5 回收率和精密度

取空白血液1mL共15份，分別添加溴氰菊酯標準品適量，配制成溴氰菊酯質(zhì)量濃度分別為0.5、5、40μg/mL的質(zhì)控樣品，每個質(zhì)量濃度點5份，按1.2.3項方法處理并檢測，計算方法回收率。計算每個質(zhì)量濃度點5份質(zhì)控樣品中溴氰菊酯質(zhì)量濃度的相對標準差，作為日內(nèi)精密度；再重復測定3日，計算溴氰菊酯質(zhì)量濃度的相對標準差，作為日間精密度。

1.2.6 統(tǒng)計方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，結果以±s進行統(tǒng)計描述。檢驗水準α=0.05。

2 結 果

2.1 氣相色譜圖

空白對照組肝、溴氰菊酯添加肝和溴氰菊酯染毒肝的氣相色譜圖分別見圖1～3。通過空白對照樣品、添加樣品以及染毒樣品的氣相色譜圖比較，表明大鼠肝中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾目標物的測定。

圖1 空白對照組肝氣相色譜圖

圖2 添加溴氰菊酯（20μg/g）肝氣相色譜圖

圖3 染毒大鼠肝氣相色譜圖

2.2 工作曲線

溴氰菊酯在血液和肝中的線性方程、線性范圍及定量限（LOQ）見表1。

表1 血液和肝中溴氰菊酯的線性方程、線性范圍和定量限

2.3 回收率和精密度

溴氰菊酯在血液中的回收率和精密度見表2。從表2中可以看出，血液中溴氰菊酯的回收率為91.55%～134.37%，日內(nèi)精密度和日間精密度均小于5.67%。

表2 血液中溴氰菊酯的回收率和精密度 （ ±s，%）

表2 血液中溴氰菊酯的回收率和精密度 （ ±s，%）

溴氰菊酯添加量/（μg/mL） 溴氰菊酯實測值/（n=6，μg/mL） 回收率 日內(nèi)精密度（n=5） 日間精密度（n=3）0.5 0.67±0.03 134.37±6.84 2.53 3.58 5 4.58±0.50 91.55±10.04 4.12 5.67 40 41.76±6.22 104.41±15.55 3.64 4.45

2.4 中毒癥狀

以512 mg/kg劑量溴氰菊酯灌胃染毒大鼠時，在給藥約30min后，大鼠興奮狀態(tài)消失，出現(xiàn)流涎或嘔吐、呼吸頻率減慢、行動緩慢、站立不穩(wěn)等癥狀。以1 024 mg/kg劑量溴氰菊酯灌胃染毒大鼠時，在給藥約10 min后，大鼠即出現(xiàn)流涎、行動緩慢、全身震顫等中毒癥狀。

2.5 溴氰菊酯在急性中毒大鼠體內(nèi)分布

將提取的染毒大鼠樣品按1.2.3項處理并檢測，測得各生物檢材中溴氰菊酯含量，結果見表3。

表3 溴氰菊酯在不同劑量染毒大鼠體內(nèi)含量（n=6， ±s，μg/g）

表3 溴氰菊酯在不同劑量染毒大鼠體內(nèi)含量（n=6， ±s，μg/g）

器官 512mg/kg 1024mg/kg心1.4950±0.3239 1.1582±0.3399肝1.6678±0.9126 0.3204±0.0455肺2.2709±1.3223 2.7916±1.3343腎0.7786±0.2208 1.1555±0.7773腦0.3195±0.0683 0.4004±0.0964血液/（μg/mL） 0.6340±0.0012 1.5465±0.6427

3 討 論

3.1 方法學建立

溴氰菊酯是含苯醚和環(huán)丙烷結構及鹵素的有機物，氣相色譜分析時，電子捕獲檢測器（ECD）只對含有電負性強的元素（如鹵素）的物質(zhì)有選擇性地產(chǎn)生信號，可摒除生物樣品中內(nèi)源性雜質(zhì)的干擾。本研究建立的溴氰菊酯GC-ECD檢測方法靈敏度較高，可滿足農(nóng)藥中毒案件生物檢材中溴氰菊酯的檢測。此外，擬除蟲菊酯類農(nóng)藥在合成過程中因藥物中間體的存在或順反異構體的影響，溴氰菊酯在本研究色譜條件下出現(xiàn)兩個色譜峰，經(jīng)氣質(zhì)聯(lián)用法確證，兩個色譜峰均為溴氰菊酯。

3.2 染毒劑量選擇

溴氰菊酯大鼠急性經(jīng)口LD50為128mg/kg[4]，但用市售溴氰菊酯乳油灌胃大鼠LD50劑量和2倍LD50劑量時，大鼠未出現(xiàn)明顯中毒癥狀。農(nóng)藥中毒致死案例以口服自殺居多，自殺者一般服用藥物劑量較大。本研究以4倍LD50劑量（512 mg/kg）和8倍LD50劑量（1 024 mg/kg）溴氰菊酯灌胃染毒大鼠，中毒癥狀明顯。

3.3 溴氰菊酯在大鼠體內(nèi)分布特征與法醫(yī)學意義

從表3可見，不同劑量溴氰菊酯在大鼠體內(nèi)分布不盡相同。4倍LD50或8倍LD50劑量溴氰菊酯灌胃染毒1.5 h后，溴氰菊酯在大鼠體內(nèi)含量由高至低順序分別為：肺＞肝＞心＞腎＞血液＞腦；肺＞血液＞心＞腎＞腦＞肝（P＜0.05）。兩個劑量組中均在肺組織中檢出較高濃度的溴氰菊酯，可能是因給藥后大鼠出現(xiàn)嘔吐、胃內(nèi)容物反流進入氣管所致。有文獻[5]報道口服溴氰菊酯中毒者消化道癥狀較明顯，多出現(xiàn)嘔吐、腹瀉，并伴有流涎、肌肉震顫。本研究大鼠模型也符合報道所述。馬曉梅等[6]研究發(fā)現(xiàn)溴氰菊酯慢性染毒大鼠后，大鼠肝有較明顯的毒性損傷。而肝和腎分別作為藥（毒）物的轉化和排泄器官，不同劑量灌胃后可能導致其代謝轉化速度不同，8倍LD50劑量染毒組大鼠排泄更快，提示溴氰菊酯在體內(nèi)分布存在劑量依賴。張增利等[7]研究了氰戊菊酯與辛硫磷等毒配比后在小鼠體內(nèi)的代謝和分布，發(fā)現(xiàn)氰戊菊酯在小鼠肺中分布最高，其次為肝、心和腦。這也與本研究8倍LD50劑量灌胃大鼠后在體內(nèi)分布情況一致。因此建議法醫(yī)在提取檢材時應盡早，且應注意劑量不同所致體內(nèi)濃度分布不一致的現(xiàn)象。

譚滇湘等[8]對溴氰菊酯在山羊體內(nèi)藥動學進行了研究，表明溴氰菊酯在山羊組織中分布廣泛、組織濃度低、體內(nèi)殘留時間長，組織中溴氰菊酯含量由高至低順序為腎＞脂肪＞肌肉＞血漿＞肝。本研究用大鼠作動物模型，盡管給藥量較大、檢測方法回收率高，但樣品中檢出量依然較低，這可能與溴氰菊酯在體內(nèi)代謝、排泄快，不易從器官內(nèi)檢出溴氰菊酯原體有關[1，9]。

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