閆 濤 錢 香 樓正青 吳 琳 柴鳴雷 杭州市中醫(yī)院 杭州310007

兒童呼吸道嗜血桿菌感染耐藥性分析

閆 濤 錢 香 樓正青 吳 琳 柴鳴雷 杭州市中醫(yī)院 杭州310007

兒童 嗜血桿菌 耐藥性 β-內(nèi)酰胺酶

嗜血桿菌（haemophilus）是一種苛養(yǎng)革蘭氏陰性桿菌，主要存在呼吸道中，引起上呼吸道感染、腦膜炎及菌血癥等感染性疾病[1]。呼吸道標(biāo)本分離到的嗜血桿菌主要為流感嗜血桿菌（haemophilus influenzae，Hi）和副流感嗜血桿菌（haemophilus parainfluenzae，HP），在兒科病例中尤為常見，是兒童呼吸系統(tǒng)感染的一種主要病原菌之一。筆者對本院兒科Hi及HP分離及耐藥情況做回顧性分析，報道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料 2012年1月—12月從本院兒科住院患者179份痰標(biāo)本及82份咽拭子標(biāo)本中共分離出57株嗜血桿菌，分離率為21.84%。其中流感嗜血桿菌（Hi）38株，來自男性患兒24例，平均年齡3.6歲；女性患兒14例，平均年齡3.9歲，男女比例1.7: 1。副流感嗜血桿菌（HP）19株，來自男性患兒10例，平均年齡3.8歲；女性患兒9例，平均年齡4.4歲，男女比例1.1:1。

1.2 試劑與儀器 試劑：哥倫比亞血瓊脂平板、MH瓊脂平板為自制。嗜血桿菌巧克力培養(yǎng)基、嗜血桿菌和布蘭漢球菌藥敏試劑盒（ATB HAEMO）、β-內(nèi)酰胺酶紙片；儀器：ATB Expression，均購自法國梅里埃公司。

1.3 質(zhì)控菌株 流感嗜血桿菌ATCC 49247及ATCC 49766，購自衛(wèi)生部臨檢中心。

1.4 方 法 標(biāo)本分離按衛(wèi)生部檢驗操作規(guī)程進行。將痰及咽拭子標(biāo)本直接接種于嗜血桿菌巧克力培養(yǎng)基中，在35℃、5%CO2條件下培養(yǎng)24h，挑取無色、透明、濕潤的可疑菌落在血瓊脂平板及MH瓊脂平板做衛(wèi)星試驗。在血瓊脂平板上生長、MH瓊脂平板上不生長鑒定為Hi，血瓊脂平板與MH瓊脂平板同時生長則鑒定為HP[1]。將分離到的嗜血桿菌用ATB HAEMO進行藥敏試驗，并用β-內(nèi)酰胺酶紙片檢測β-內(nèi)酰胺酶。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用細(xì)菌耐藥監(jiān)測軟件WHONET 5.6，耐藥率采用χ2檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 藥敏結(jié)果 Hi耐藥率（含中介敏感）較高的藥物為復(fù)方新諾明、氨芐西林及頭孢噻吩，耐藥率分別為63.16%、50.00%和42.11%。HP耐藥率（含中介敏感）較高的藥物為復(fù)方新諾明、氨芐西林及頭孢噻吩，耐藥率分別為52.63%、21.05%和26.32%。Hi與HP對11種抗菌藥物的耐藥率，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 Hi與HP對11種抗菌藥物的耐藥率 株（%）

2.2 β-內(nèi)酰胺酶檢測結(jié)果 38株Hi中β-內(nèi)酰胺酶陽性19株，占50.00%；19株HP中β-內(nèi)酰胺酶陽性5株，占26.32%。19株耐氨芐西林的Hiβ-內(nèi)酰胺酶均陽性，占100.00%；5株耐氨芐西林的HPβ-內(nèi)酰胺酶均陽性，占100.00%。未發(fā)現(xiàn)β-內(nèi)酰胺酶陰性的耐氨芐西林 Hi及 HP（β-lactamase-nagative and ampicillin-resistance，BLNAR）。

3 討論

本研究采用衛(wèi)星試驗對Hi及HP進行鑒定。衛(wèi)星試驗的原理：有溶血性的細(xì)菌（如金黃色葡萄球菌）在羊血瓊脂培養(yǎng)基上生長時可破壞紅細(xì)胞釋放出血紅素（即X因子）和維生素B類物質(zhì)（即V因子），而金黃色葡萄球菌在生長過程中能合成V因子釋放于培養(yǎng)基中，當(dāng)嗜血桿菌與金黃色葡萄球菌一起培養(yǎng)時，這些因子促進了嗜血桿菌的生長，表現(xiàn)為靠近金黃色葡萄球菌的嗜血桿菌菌落生長較大，而遠離葡萄球菌菌落的嗜血桿菌菌落較小，這一現(xiàn)象稱為“衛(wèi)星現(xiàn)象”，這一試驗也稱為“衛(wèi)星試驗”。在不含血紅素的瓊脂平板（如MH瓊脂平板）上進行衛(wèi)星試驗，因瓊脂中不含X因子和V因子，當(dāng)點種金黃色葡萄球菌后，在其菌落周圍只含有V因子而沒有X因子存在，因此那些X因子依賴性的嗜血桿菌（Hi）不能在金黃色葡萄球菌菌落周圍生長，而V因子依賴性的嗜血桿菌（HP）則會生長[2]。林曉梅等[3]的研究證實，該方法與微生物自動分析系統(tǒng)的鑒定結(jié)果符合率為100%。

從藥敏結(jié)果來看，嗜血桿菌耐藥率較高的藥物為復(fù)方新諾明、氨芐西林及頭孢噻吩。近年來，嗜血桿菌對氨芐西林的耐藥率有所升高，而且呈現(xiàn)出明顯的地區(qū)差別。長期以來，阿莫西林、氨芐西林是治療嗜血桿菌感染最常用的首選藥物，1972年嗜血桿菌對氨芐西林耐藥首次在歐洲被報道，隨后全世界均有報道。而在本院兒科呼吸道感染患兒中的耐藥率高達42.1%。因此，不建議使用氨芐西林作為治療嗜血桿菌感染的首選藥物，而建議使用二代、三代頭孢為治療嗜血桿菌感染的首選藥物。鑒于頭孢菌素易引發(fā)I型超敏反應(yīng)，四環(huán)素、氯霉素有較大的副作用，以及喹諾酮類抗菌藥物對兒童生長發(fā)育的影響，臨床醫(yī)師可選用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素如克拉霉素進行治療。文獻[4]報道，克拉霉素對嗜血桿菌有極高的抑菌率。

產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶是嗜血桿菌對氨芐西林的主要耐藥機制[5]。β-內(nèi)酰胺酶使氨芐西林水解進而失活而使其喪失殺菌能力。常見的β-內(nèi)酰胺酶有TEM-1和ROB-1型，其中最常見的是TEM-1型[6]。本研究分離到的Hi及HP耐氨芐西林機制仍然是產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶，未發(fā)現(xiàn)β-內(nèi)酰胺陰性的耐氨芐西林Hi及HP。

［1］倪語星，尚紅.臨床微生物學(xué)與檢驗［M］.第4版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：175-178.

［2］東科，孫長貴.實用臨床微生物學(xué)檢驗與圖譜［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：473.

［3］林曉梅，周鐵麗，李超.儀器法和手工法對副流感嗜血桿菌鑒定和分型的結(jié)果比較［J］.上海醫(yī)學(xué)檢驗雜志，2003，18（2）：72-74.

［4］郭玉芬，張美和，甄景慧，等.嗜血桿菌在兒科的檢出特點及藥敏研究［J］.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2001，11（6）：475-477.

［5］Tristram S，Jacobs MR，Appelbaum PC.Antimicrobial resistance in haemophilus influnenzae［J］.Clinical Microbiology Reviews，2007，20（2）：368-369.

［6］桂和翠，王中新，沈紀(jì)錄.流感嗜血桿菌的耐藥性及耐藥機制［J］.安徽醫(yī)藥，2011，15（12）：1471-1474.

2013-06-15