淺談國產(chǎn)注射用氨芐西林鈉雜質(zhì)譜及生產(chǎn)工藝

成佳興

哈藥集團(tuán)制藥總廠科研開發(fā)中心 150000

淺談國產(chǎn)注射用氨芐西林鈉雜質(zhì)譜及生產(chǎn)工藝

成佳興

哈藥集團(tuán)制藥總廠科研開發(fā)中心 150000

目的：對不同地區(qū)所生產(chǎn)的氨芐西林鈉雜質(zhì)譜以及生產(chǎn)手段進(jìn)行詳細(xì)的比較。方法：相關(guān)實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)當(dāng)針對氨芐西林鈉相關(guān)性質(zhì)測定手段，進(jìn)行相應(yīng)的破壞試驗(yàn)，從而對不同雜質(zhì)的由來進(jìn)行研究。將190批次的用氨芐西林鈉有關(guān)物質(zhì)所得到的監(jiān)測結(jié)論當(dāng)做主要依據(jù)，對各種工藝手段的雜質(zhì)狀況進(jìn)行考察。結(jié)果：所得到的溶媒結(jié)晶樣所含有的雜質(zhì)數(shù)量最少，并且所產(chǎn)生的雜質(zhì)品質(zhì)比采取其他2種樣品要低些，而噴霧干燥樣品所產(chǎn)生的雜質(zhì)數(shù)量最多。結(jié)論：所獲得的原料藥生產(chǎn)工藝標(biāo)準(zhǔn)以及樣品中含有的雜質(zhì)譜有著相關(guān)的聯(lián)系，對產(chǎn)品雜質(zhì)有著一定的影響。

注射用氨芐西林鈉;雜質(zhì)譜;生產(chǎn)工藝

在臨床應(yīng)用過程中，主要應(yīng)用氨芐西林鈉作為青霉素類的抗生素，這一抗生素主要是通過廣譜半合成的方式實(shí)現(xiàn)的，通過氨芐西林鈉的治療，可以保證患有胃腸道以及尿路感染的患者的病癥得到有效的緩解，這與一般的青霉素類藥物相比具有更加顯著的臨床功效。在工業(yè)生產(chǎn)氨芐西林鈉的過程中，主要采用的方式是溶媒結(jié)晶法、噴霧干燥以及冷凍干燥的方法。通過對相關(guān)研究的顯示，采用溶媒結(jié)晶的方法是上述三種方法中最具有成效的，可以有效的保證自身的質(zhì)量。本文重點(diǎn)對不同批次的氨芐西林鈉進(jìn)行雜質(zhì)譜差異方面的探究。

1、器與試藥

氨芐西林對照品(批號130410－200706，含量85.7%)、氨芐西林系統(tǒng)適用性對照品(批號130618－201001)和苯甘氨酸對照品(批號130415－200904)由中國食品藥品檢定研究院提供。190批次注射用氨芐西林鈉(其中溶媒結(jié)晶樣品46批次，冷凍干燥樣品84批次，噴霧干燥樣品60批次)均為2011年國家藥品評價抽驗(yàn)樣品，分別由國內(nèi)15家企業(yè)生產(chǎn)。乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2、實(shí)驗(yàn)方法

依據(jù)我國相關(guān)藥典對氨芐西林鈉的有關(guān)物質(zhì)所記載的測定手段，將190批次樣品作為主要測定對象，相關(guān)實(shí)驗(yàn)人員采取氨芐西林系統(tǒng)將相應(yīng)的藥物當(dāng)做參照物，應(yīng)用質(zhì)譜技術(shù)來對未知雜質(zhì)進(jìn)行判斷，將所得到的雜質(zhì)譜進(jìn)行總結(jié)；相關(guān)實(shí)驗(yàn)人員通過對各種工藝樣品中所存在的雜質(zhì)數(shù)量進(jìn)行比較，與此同時還應(yīng)當(dāng)將不同雜質(zhì)的由來做好相應(yīng)的破壞試驗(yàn)。

液相色譜條件:色譜柱為C18柱(自裝，日本產(chǎn)富士填料);流動相A為12%醋酸溶液－0.2mol?L－1磷酸二氫鉀溶液－乙腈－水(0.5∶50∶50∶900)，流動相B為12%醋酸溶液－0.2mol?L－1磷酸二氫鉀溶液－乙腈－水(0.5∶50∶400∶550);檢測波長：254nm;進(jìn)樣量20μL;流速:1.0mL?min－1。

質(zhì)譜條件:電噴霧離子源(ESI)，噴霧電壓為3.5kV，加熱毛細(xì)管溫度為350℃，鞘氣(N2)壓力7MPa，輔助氣(N2)壓力3MPa，正離子方式檢測。

3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

190批次樣品共檢出14種雜質(zhì)，按保留時間分別命名為雜質(zhì)1至雜質(zhì)14。3種工藝樣品的雜質(zhì)譜基本相同，但噴霧干燥樣品中無8號雜質(zhì);冷凍干燥樣品中無2號和4號雜質(zhì);溶媒結(jié)晶樣品中的雜質(zhì)最少，僅發(fā)現(xiàn)有10個雜質(zhì)，無2、4、9和14號雜質(zhì)。

檢出的雜質(zhì)與氨芐西林系統(tǒng)適用性對照品色譜圖進(jìn)行對比，結(jié)構(gòu)已知的雜質(zhì)有氨芐西林噻唑酸(雜質(zhì)5)、二酮哌嗪－2(R)氨芐西林(雜質(zhì)7)、氨芐西林開環(huán)二聚體(雜質(zhì)8)、氨芐西林閉環(huán)二聚體(雜質(zhì)10)和氨芐西林開環(huán)三聚體(雜質(zhì)13);通過與苯甘氨酸對照品的保留時間和UV光譜特性的比較，證明噴霧干燥產(chǎn)品中獨(dú)有的2號雜質(zhì)為苯甘氨酸;但樣品中的另一較大雜質(zhì)(雜質(zhì)12)并非系統(tǒng)適用性對照品中標(biāo)注的已知雜質(zhì)。鑒于其極性較小、保留時間大于二聚物等特征，初步推斷為氨芐西林三聚物。收集該色譜峰的流出液、經(jīng)固相萃取小柱濃縮洗脫后注入質(zhì)譜儀進(jìn)行確證，可見［M+H］+為1048的分子離子峰及［M+H］+為350的碎片離子峰。1048為閉環(huán)三聚體的分子離子峰，350為氨芐西林的分子離子峰，一分子閉環(huán)三聚體由一分子氨芐西林和兩分子氨芐西林噻唑酸組成，根據(jù)青霉素類抗生素的質(zhì)譜裂解規(guī)律，可以確證該色譜峰為氨芐西林閉環(huán)三聚體峰。

對3種不同工藝樣品中的各雜質(zhì)的含量進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)批號相近的溶媒結(jié)晶樣品中的雜質(zhì)量遠(yuǎn)小于其他 2種工藝樣品;不同工藝樣品中最大雜質(zhì)均為10號氨芐西林閉環(huán)二聚體，冷凍干燥樣品的閉環(huán)二聚體最大;國產(chǎn)氨芐西林鈉中的其他較大雜質(zhì)還有氨芐西林噻唑酸、二酮哌嗪氨芐西林、閉環(huán)三聚體等。

通過對酸、堿、光、氧化和熱加速試驗(yàn)樣品及放置24h的溶液的檢測表明，氨芐西林鈉中14個雜質(zhì)中的10個可在不同的條件下降解產(chǎn)生（表1）1、3、6和11號雜質(zhì)在各種加速實(shí)驗(yàn)條件下均無明顯變化，推測為工藝雜質(zhì);2、4、5、7、8、9、10、12、13和14號雜質(zhì)為降解雜質(zhì)。

表1 氨芐西林鈉破壞試驗(yàn)雜質(zhì)變化結(jié)果

相關(guān)實(shí)驗(yàn)人員將190批次樣品中所含有的氨芐西林二聚物、其他相關(guān)物質(zhì)所得到的檢驗(yàn)結(jié)果都可以采取恰當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計軟件對不同因素加以研究（表2），所得到的結(jié)果顯示：原料藥生產(chǎn)手段和相關(guān)物質(zhì)都有著顯著的效果(P＜0.01)，表明原料藥生產(chǎn)手段對產(chǎn)品是否存在雜質(zhì)存在密切的聯(lián)系。

表2 生產(chǎn)工藝與雜質(zhì)的多因素相關(guān)分析

4、討論

相關(guān)實(shí)驗(yàn)人員在對雜質(zhì)譜進(jìn)行分析以后得知：在氨芐西林鈉噴霧干燥樣品中所含有的雜質(zhì)數(shù)量最多，并且雜質(zhì)量也最大，其主要因素大概和生產(chǎn)時所存在的氨芐西林處于一定的條件下而產(chǎn)生變化；由于冷凍干燥樣品里面還有較多的閉環(huán)二聚體，大部分原因和凍干的流程存在密切的關(guān)系，致使氨芐西林能夠在相應(yīng)的堿性水溶液中達(dá)到聚合的狀態(tài)；當(dāng)溶媒結(jié)晶樣品里面所含有的雜質(zhì)數(shù)量最小，所含有的雜志量也最低，就可以在結(jié)晶時能夠?qū)⑾鄳?yīng)的原料放入到其中進(jìn)行反應(yīng)，并將所得到的雜質(zhì)清理干凈。

通過以上內(nèi)容可以看出，溶媒結(jié)晶工藝樣品的整體品質(zhì)要比經(jīng)過冷凍亦或是噴霧干燥樣品都好些。

通過相關(guān)實(shí)驗(yàn)人員通過加速實(shí)驗(yàn)手段與雜質(zhì)結(jié)構(gòu)相結(jié)合的方式可以得知：當(dāng)氨芐西林處于堿性的狀態(tài)下很容易產(chǎn)生聚合的現(xiàn)象。因此，在不同工藝中所產(chǎn)生的最大雜質(zhì)就是閉環(huán)二聚體。由于氨芐西林噻唑酸屬于相應(yīng)物質(zhì)的水解物，隨著樣品中含有的一些水分可以將其速度加快，從而形成相應(yīng)的物質(zhì)，因此其所具有的數(shù)量較大；而氨芐西林閉環(huán)聚合物所存在的數(shù)量都比開環(huán)聚合物要大一些，其主要因素是相關(guān)開環(huán)聚合物都是通過閉環(huán)聚合物而形成的。除此之外，樣品中所存在的二聚物數(shù)量都比三聚物要大些，很好表明聚合物的形成屬于一種聚合的過程。

總而言之，當(dāng)前國內(nèi)所生產(chǎn)的氨芐西林鈉原料有很多種，而生產(chǎn)手段以及產(chǎn)品的整體品質(zhì)都有著很大的差距，因此筆者依據(jù)多年經(jīng)驗(yàn)提出自己的一些觀點(diǎn)，建議相關(guān)企業(yè)應(yīng)當(dāng)生產(chǎn)出高品質(zhì)的溶媒結(jié)晶工藝產(chǎn)品。

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