張浩石偉宋寧王敘馥

1.復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院普外科，上海 200040；

2.青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科，山東 青島，266003

SPARCL1在膽管癌中的表達(dá)及其預(yù)后價(jià)值

張浩1石偉1宋寧1王敘馥2*

1.復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院普外科，上海 200040；

2.青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科，山東 青島，266003

背景與目的：SPARC類似蛋白1(SPARC-like 1，SPARCL1)是細(xì)胞外基質(zhì)蛋白SPARC相關(guān)家族成員，在多種腫瘤細(xì)胞中低表達(dá)，有腫瘤抑制作用。本研究探討其在膽管癌中的表達(dá)及與預(yù)后的關(guān)系。方法：采用組織芯片和免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)膽管癌和部分癌旁非腫瘤組織中SPARCL1蛋白的表達(dá)，并分析其與各項(xiàng)臨床病理參數(shù)及患者預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果：免疫組化結(jié)果顯示，SPARCL1在膽管癌中的表達(dá)率為47.9%(23/48)，在癌旁膽管上皮中均有表達(dá)。SPARCL1的表達(dá)與區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和神經(jīng)侵犯呈負(fù)相關(guān)，生存期分析顯示SPARCL1陽(yáng)性患者預(yù)后明顯優(yōu)于陰性患者(37.3 vs 12.8個(gè)月，P＜0.001)。結(jié)論：SPARCL1在膽管癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著重要作用，是影響膽管癌患者預(yù)后的重要因素。

膽管癌；SPARCL1；預(yù)后

SPARC類似蛋白1(SPARC-like 1，SPARCL1)是SPARC家族成員之一，與SPARC序列有62%的同源性。兩者都擁有富含半胱氨酸的卵泡抑素樣結(jié)構(gòu)域和胞外鈣結(jié)合結(jié)構(gòu)域，但SPARCL1的N端較長(zhǎng)。SPARCL1是分泌型的基質(zhì)細(xì)胞糖蛋白，參與多項(xiàng)機(jī)體生理過(guò)程，如細(xì)胞黏附、增殖，肌肉分化以及B淋巴細(xì)胞成熟等［1］。SPARCLl是抑癌分子，可以抑制細(xì)胞的增生、侵襲和轉(zhuǎn)移［2-3］。研究發(fā)現(xiàn)，SPARCL1在多種腫瘤中低表達(dá)［4-7］，但與臨床預(yù)后的關(guān)系只在前列腺癌、結(jié)直腸癌和胃癌中有報(bào)道［4-6］。SPARCL1在膽管癌中的表達(dá)及與預(yù)后的意義尚不明確。本研究旨在探討SPARCL1蛋白在膽管癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理參數(shù)和預(yù)后之間的關(guān)系。

1 資料和方法

1.1 組織標(biāo)本

構(gòu)建含有膽管癌標(biāo)本和部分對(duì)應(yīng)癌旁正常黏膜上皮的膽管癌組織芯片。該芯片含有48例膽管癌術(shù)后標(biāo)本，15例非腫瘤組織，其中男性34例，女性14例，年齡31～79歲，中位年齡60歲。所有患者具有完整的隨訪資料，隨訪時(shí)間1～60個(gè)月，中位時(shí)間為23個(gè)月。

1.2 試劑與方法

羊抗多克隆抗體SPARCL1(AF2728，稀釋比例為1∶400)購(gòu)自R&D Systems公司。SP免疫組化試劑盒購(gòu)自福州邁新公司。免疫組化技術(shù)采用SP法，PBS替代一抗作陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判斷

SPARCL1陽(yáng)性染色為淡黃色、棕黃色或棕褐色，定位于細(xì)胞質(zhì)和(或)細(xì)胞膜。采用二級(jí)計(jì)分法，陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占5個(gè)以上高倍鏡視野比例計(jì)數(shù)分為4類：5%～25%為1分；25%～50%為2分；50%～75%為3分；＞75%為4分。染色強(qiáng)度分類：淡黃色為1分；黃或深黃色為2分；褐或棕褐色為3分。兩者計(jì)分相乘大于1為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。組內(nèi)變量采用配對(duì)χ2檢驗(yàn)。單因素生存分析采用Kaplan-Meier分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 SPARCL1在癌旁黏膜和腫瘤中的表達(dá)

免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示，SPARCL1呈淡黃至棕黃色，癌旁組織普遍著色，腫瘤中呈彌漫或片狀分布(圖1A、B、C)。SPARCL1在膽管癌中的表達(dá)率顯著低于癌旁非腫瘤組織，為47.9%(23/48)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.2 SPARCL1表達(dá)與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系

SPARCL1表達(dá)水平與多項(xiàng)臨床病理參數(shù)的相關(guān)性分析結(jié)果顯示，SPARCL1的表達(dá)與年齡、性別、臨床分期、組織學(xué)分級(jí)及腫瘤大小等參數(shù)無(wú)明顯相關(guān)性(P＞0.05)，與腫瘤的區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和神經(jīng)侵犯呈顯著負(fù)相關(guān)(P＜0.05，表1)。

2.3 生存期分析

生存期分析顯示，SPARCL1陽(yáng)性患者的總體生存期為37.3個(gè)月，而陰性患者僅為12.8個(gè)月，兩者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001，圖2)。

圖 1 SPARCL1在膽管癌組織中的免疫組化染色Fig. 1 Immunohistochemical staining for SPARCL1 of cholangiocarcinoma

表 1 SPARCL1的表達(dá)與膽管癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系Tab. 1 Relationship between SPARCL1 expression and clinicopathologic features in the patients with cholangiocarcinoma

3 討 論

近年來(lái)，膽管癌發(fā)病率有逐年上升的趨勢(shì)，治療目前以手術(shù)切除為主［8］。大部分膽管癌患者診斷時(shí)往往已是晚期，不能手術(shù)切除，5年存活率僅為8%～45%。因而深入探討膽管癌發(fā)病機(jī)制，尋找判斷膽管癌預(yù)后的相關(guān)分子標(biāo)志物，并加以干預(yù)是目前研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)之一［9］。此前的研究顯示了SPARCL1蛋白在前列腺癌［4，10］、非小細(xì)胞肺癌［11］、胰腺導(dǎo)管癌［7］、胃癌［6］、結(jié)直腸癌［5］及膀胱癌［12］中低表達(dá)，而在肝癌中高表達(dá)［13］，與臨床預(yù)后的關(guān)系只在前列腺癌、結(jié)直腸癌和胃癌中有報(bào)道［4-6］。其在膽管癌中表達(dá)情況及與預(yù)后的關(guān)系尚未可知。本研究檢測(cè)了SPARCL1蛋白在膽管癌中表達(dá)，并分析了其與臨床病理指標(biāo)和預(yù)后的關(guān)系。

本研究發(fā)現(xiàn)SPARCL1在膽管癌旁黏膜上皮中廣泛表達(dá)，而在膽管癌組織中表達(dá)顯著下降，僅為47.9%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。提示SPARCL1的缺失是膽管癌發(fā)生發(fā)展的因素之一。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，SPARCL1的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者表達(dá)降低，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者較無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，SPARCL1的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.003)。還發(fā)現(xiàn)SPARCL1的表達(dá)與神經(jīng)侵犯呈負(fù)相關(guān)，有神經(jīng)侵犯病例的SPARCL1表達(dá)降低，有神經(jīng)侵犯者較無(wú)神經(jīng)侵犯者，SPARCL1的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.02)。生存期分析顯示，SPARCL1陽(yáng)性患者預(yù)后明顯優(yōu)于陰性患者(37.3 vs 12.8個(gè)月，P＜0.001)。有研究證實(shí)SPARCL1能夠抑制細(xì)胞的黏附和擴(kuò)散［13］，顯示淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和神經(jīng)侵犯是膽管癌細(xì)胞的重要生物學(xué)特性，有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和神經(jīng)侵犯與治療敏感性和預(yù)后具有高度相關(guān)性。本研究結(jié)果進(jìn)一步表明，SPARCL1參與了膽管癌的發(fā)生和發(fā)展，其表達(dá)水平與膽管癌的惡性生物學(xué)行為呈負(fù)相關(guān)，顯示SPARCL1具有腫瘤抑制功能，也提示SPARCL1蛋白是判斷膽管癌預(yù)后的標(biāo)志物。

臨床分期和腫瘤分化程度是指導(dǎo)腫瘤治療和判斷腫瘤患者預(yù)后的重要指標(biāo)。SPARCL1 的表達(dá)與胃癌TNM分期及分化程度明顯相關(guān)［6］，在高分化和臨床分期低的結(jié)直腸癌組織中表達(dá)較高［5］。但本研究未發(fā)現(xiàn)SPARCL1表達(dá)與膽管癌的臨床分期和分化程度相關(guān)，可能是由于大部分膽管癌患者確診時(shí)已經(jīng)處于晚期，本組Ⅳ期患者占了87.5%，臨床分期的代表性下降所致。

總之，本研究發(fā)現(xiàn)SPARCL1的表達(dá)與膽管癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，SPARCL1的表達(dá)缺失還可以作為膽管癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)，但其具體作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。

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Expression of SPARCL1 in cholangiocarcinoma and its relationship with the prognosis

ZHANG Hao1, SHI Wei1, SONG Ning1, WANG Xu-fu2(1.Department of General Surgery, Affiliated Huashan Hospital of Fundan University, Shanghai 200040, China; 2.Department of Nuclear Medicine, The Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College, Qingdao Shandong 266003, China)

WANG Xu-fu E-mail: wangxufu@sina.com

Background and purpose：SPARC-like 1 (SPARCL1) is a member of extracellular matrix protein SPARC family, it was found to be down-expressed and had tumor inhibitory role in several cancers. This study aimed to investigate the SPARCL1 expression and determine its clinical significance in cholangiocarcinoma. Methods：Tissue microarray blocks containing tumor specimens obtained from 48 patients were constructed. Expressions of SPARCL1 in these specimens were detected by immunohistochemistry (IHC) method. Results：IHC showed that expression of SPARCL1 was observed in 23 cases (47.9%) of 48 primary tumors. SPARCL1 expression was significantly inversely associated with lymph node metastases and nerve invasion. Loss of SPARCL1 expression significantly correlated with poor survival in univariate analysis (37.3 vs 12.8 months, P＜0.001). Conclusion：Our results showed SPARCL1 expression significantly changed in cholangiocarcinoma, and suggested the importance of SPARCL1 as a biomarker in cancer development and progression.

Cholangiocarcinoma; SPARCL1; Prognosis

R735.8

：A

：1007-3639(2013)02-0126-04

2012-08-15

2012-12-20）

王敘馥 E-mail:wangxufu@sina.com

DOI: 10.3969/j.issn.1007-3969.2013.02.008