李 旺，孫二剛，劉永磊，程傳紅

（1.河南科技大學(xué)宏翔發(fā)酵飼料實(shí)驗(yàn)室，河南 洛陽(yáng) 471003；2.河南宏翔生物科技有限公司，河南 汝州 467500）

纖維素是植物細(xì)胞壁的主要成分，主要來(lái)源于植物，由植物通過(guò)光合作用的方式將太陽(yáng)能轉(zhuǎn)化為生物能并儲(chǔ)存在植物體內(nèi)；是地球上含量最高、最豐富的可再生資源[1]。纖維素最終需要在纖維素酶的作用下分解為葡萄糖才能應(yīng)用在動(dòng)物生產(chǎn)中。

枯草芽孢桿菌是動(dòng)物的益生菌，本身具有很強(qiáng)的產(chǎn)酶能力，各種消化酶豐富，是現(xiàn)在畜牧業(yè)益生菌的主要菌種之一。纖維素酶的來(lái)源主要是微生物，包括細(xì)菌、真菌和放線菌。目前飼用纖維素酶主要來(lái)自真菌的霉菌，由于宿主存在不安全因素，故多以純化酶的形式應(yīng)用于動(dòng)物生產(chǎn)[2]。本研究將產(chǎn)纖維素酶的枯草芽孢桿菌作為益生菌飼喂肉雞，既培養(yǎng)消化道優(yōu)勢(shì)益生菌群，又增加可分解日糧纖維素的纖維素酶含量，進(jìn)而提高日糧粗纖維的消化率，提高雞的生產(chǎn)性能，并可以通過(guò)增加日糧粗纖維的用量來(lái)節(jié)約飼養(yǎng)成本。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

枯草芽孢桿菌為纖維素酶產(chǎn)生菌，實(shí)驗(yàn)室保存。

1.2 試驗(yàn)日糧

試驗(yàn)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1，前期為顆粒料，后期為粉料。

表1 日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)選用1日齡AA肉仔雞96只，隨機(jī)分為4組（對(duì)照組和試驗(yàn)1、2、3組），每組設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)8只雞。對(duì)照組每10日灌服培養(yǎng)液（LB）400 μL，試驗(yàn)組分別每10日口腔灌服枯草芽孢桿菌菌液200、300、400 μL。自由采食與飲水。在飼養(yǎng)的20和40 d從每個(gè)重復(fù)組中任意選出3只雞單獨(dú)飼養(yǎng)，用全收糞法收集每個(gè)重復(fù)組樣本的雞糞，測(cè)定各個(gè)試驗(yàn)樣品粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗灰分、干物質(zhì)含量，計(jì)算無(wú)氮浸出物含量以及營(yíng)養(yǎng)成分的消化率。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用Excel進(jìn)行整理，用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件的One Way ANOVA方法進(jìn)行方差分析，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 添加枯草芽孢桿菌對(duì)雞飼料粗纖維消化率的影響

添加枯草芽孢桿菌對(duì)雞飼料粗纖維消化率的影響見(jiàn)表2。

表2 枯草芽孢桿菌對(duì)前期雞飼料粗纖維消化率的影響

由表2可以看出，添加枯草芽孢桿菌的3個(gè)試驗(yàn)組對(duì)粗纖維的消化率都高于對(duì)照組，試驗(yàn)3組對(duì)粗纖維的消化率最大。試驗(yàn)結(jié)果得出，3個(gè)試驗(yàn)組對(duì)粗纖維的消化率與對(duì)照組相比差異都顯著（P＜0.05）；試驗(yàn)3組與試驗(yàn)1組相比差異顯著（P＜0.05）。結(jié)果表明，添加產(chǎn)纖維素酶枯草芽孢桿菌可以顯著提高前期雞飼料粗纖維的消化率（P＜0.05），并且在一定范圍內(nèi)，隨著添加量的增大，對(duì)粗纖維的消化率增大。

2.2 枯草芽孢桿菌對(duì)后期雞飼料粗纖維消化率的影響

枯草芽孢桿菌對(duì)后期雞飼料粗纖維消化率的影響見(jiàn)表3。

表3 枯草芽孢桿菌對(duì)后期雞飼料粗纖維消化率的影響

由表3可以看出，對(duì)照組對(duì)粗纖維的消化率顯著低于3個(gè)試驗(yàn)組（P＜0.05），試驗(yàn)3組對(duì)粗纖維的消化率最大。3個(gè)試驗(yàn)組對(duì)粗纖維的消化率與對(duì)照組相比差異都顯著（P＜0.05），試驗(yàn)3組與試驗(yàn)1組相比差異顯著（P＜0.05）。結(jié)果表明，添加枯草芽孢桿菌可以顯著提高后期雞飼料粗纖維的消化率，且隨著添加量增加效果越好。

2.3 添加枯草芽孢桿菌對(duì)飼料養(yǎng)分消化率的影響

添加枯草芽孢桿菌對(duì)飼料養(yǎng)分消化率的影響見(jiàn)表4。

表4 枯草芽孢桿菌對(duì)前期飼料養(yǎng)分消化率的影響%

由表4可以看出，在粗蛋白質(zhì)消化率上，3個(gè)試驗(yàn)組均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），試驗(yàn)2組顯著高于試驗(yàn)3組（P＜0.05），表明添加枯草芽孢桿菌能夠提高肉雞日糧粗蛋白質(zhì)的消化率。在粗脂肪的消化率上，對(duì)照組與試驗(yàn)1、2組相比差異不顯著（P＞0.05），對(duì)照組顯著低于試驗(yàn)3組（P＜0.05）。表明灌服菌液對(duì)飼料粗脂肪的消化率影響不顯著（P＞0.05）。在粗灰分的消化率上，對(duì)照組顯著低于3個(gè)試驗(yàn)組（P＜0.05）。表明灌服枯草芽孢桿菌對(duì)前期飼料粗灰分的消化率有提高作用。在干物質(zhì)消化率上，試驗(yàn)3組最高，對(duì)照組均顯著低于3個(gè)試驗(yàn)組（P＜0.05）。表明灌服枯草芽孢桿菌對(duì)前期飼料干物質(zhì)的消化率有提高作用。在無(wú)氮浸出物消化率上，對(duì)照組與3個(gè)試驗(yàn)組相比差異均顯著（P＜0.05），試驗(yàn)組之間差異不顯著（P＞0.05）。結(jié)果表明，灌服枯草芽孢桿菌不能提高前期飼料無(wú)氮浸出物消化率。

2.4 枯草芽孢桿菌對(duì)生長(zhǎng)后期雞飼料養(yǎng)分消化率的影響

枯草芽孢桿菌對(duì)生長(zhǎng)后期雞飼料養(yǎng)分消化率的影響見(jiàn)表5。

表5 枯草芽孢桿菌對(duì)生長(zhǎng)后期雞飼料養(yǎng)分消化率的影響%

由表5可以看出，在生長(zhǎng)后期飼料粗蛋白質(zhì)消化率上，對(duì)照組顯著高于3個(gè)試驗(yàn)組（P＜0.05）。表明灌服400 μL菌液對(duì)后期飼料粗蛋白質(zhì)的消化率有提高作用。在后期飼料粗脂肪消化率上，對(duì)照組顯著高于3個(gè)試驗(yàn)組（P＜0.05），表明灌服枯草芽孢桿菌對(duì)生長(zhǎng)后期飼料粗脂肪消化率無(wú)促進(jìn)作用。在粗灰分的消化率上，對(duì)照組顯著低于試驗(yàn)組（P＜0.05）。結(jié)果表明，添加枯草芽孢桿菌對(duì)生長(zhǎng)后期飼料粗灰分的消化率有提高作用，且本試驗(yàn)中添加400 μL效果最好。在干物質(zhì)的消化率上，對(duì)照組顯著低于3個(gè)試驗(yàn)組（P＜0.05）。表明灌服枯草芽孢桿菌對(duì)生長(zhǎng)后期飼料干物質(zhì)的消化率有提高作用。在無(wú)氮浸出物消化率上，對(duì)照組顯著低于試驗(yàn)1、3組（P＜0.05）。結(jié)果表明，添加枯草芽孢桿菌對(duì)生長(zhǎng)后期飼料無(wú)氮浸出物的消化率有提高作用。

3 討 論

3.1 灌服枯草芽孢桿菌對(duì)雞飼料粗纖維消化率的影響

無(wú)論是蛋雞還是肉雞，均不能分泌纖維素酶，主要是通過(guò)嗉囊和盲腸中的微生物對(duì)纖維進(jìn)行發(fā)酵降解，對(duì)飼料粗纖維的消化率一般較低，通過(guò)添加外源纖維素酶可以對(duì)這一限制有所改善。Wang等在蛋雞日糧中加入纖維素酶，結(jié)果顯著提高了日糧纖維素表觀消化率（P＜0.05），說(shuō)明雞日糧中添加纖維素酶，可以增加飼料粗纖維的分解，從而提高飼料粗纖維的消化率[3]。本試驗(yàn)通過(guò)灌服枯草芽孢桿菌，使肉雞消化道內(nèi)含有大量產(chǎn)纖維素酶枯草芽孢桿菌，并分泌纖維素酶，使日糧粗纖維消化率提高。

3.2 灌服枯草芽孢桿菌對(duì)雞飼料養(yǎng)分消化率的影響

枯草芽孢桿菌富含多種消化酶，并且具有完整的分泌系統(tǒng)，能夠?qū)⑺a(chǎn)消化酶分泌到細(xì)胞外。并且由于纖維素酶的添加，破壞細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，釋放出了更多的粗蛋白質(zhì)。Kemme等研究表明，添加纖維素酶900 U·kg-1，提高了蛋白質(zhì)的消化率，也提高了賴氨酸、色氨酸、異亮氨酸、蘇氨酸的表觀消化率（P＜0.05）[4]。張克英等研究了添加纖維素酶對(duì)斷奶仔豬蛋白質(zhì)、氨基酸等消化率的影響，結(jié)果表明，添加纖維素酶可以顯著提高蛋白質(zhì)生物學(xué)效價(jià)和賴氨酸的回腸消化率（P＜0.05）[5]。王振來(lái)等試驗(yàn)表明，添加纖維素酶為主的復(fù)合酶顯著地提高了仔豬對(duì)粗脂肪的表觀消化率[6]。許多研究也表明，添加纖維素酶對(duì)飼料粗脂肪的消化率有提高作用。本試驗(yàn)結(jié)果表明，灌服產(chǎn)纖維素酶枯草芽孢桿菌對(duì)肉雞日糧粗脂肪消化率無(wú)顯著影響（P＞0.05）。在主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率得到提高的情況下，日糧干物質(zhì)和灰分的消化率得以提高。王振來(lái)等試驗(yàn)表明，添加纖維素酶為主的復(fù)合酶顯著地提高了仔豬對(duì)粗灰分的表觀消化率（P＜0.05）[6]。楊桂芹等在雛鵝日糧中添加活性為2000 U·g-1的纖維素酶制劑0.1%，結(jié)果顯示，干物質(zhì)的表觀消化率消化率提高了8.08%[7]。本試驗(yàn)對(duì)飼料無(wú)氮浸出物的消化率前期不顯著，后期得到提高，原因是前期肉雞自身消化無(wú)氮浸出物能力差，加上多糖等粗纖維分解產(chǎn)物使得消化率降低，后期隨著肉雞消化道功能健全，消化率提高。許梓榮等報(bào)道，含麥麩30%的肉雞日糧中添加復(fù)合酶0.005%，結(jié)果干物質(zhì)消化率提高10.58%，粗纖維消化率提高25.9%，粗脂肪消化率提高21.76%[8]。王玲等以纖維素酶為主的復(fù)合酶制劑飼喂肉雛雞，試驗(yàn)結(jié)果表明，飼料干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗纖維的表觀消化率均極顯著提高（P＜0.05）[9]。鄭文明在艾維茵肉仔雞高苜蓿粉日糧中添加纖維素復(fù)合酶，結(jié)果表明，試驗(yàn)組比對(duì)照組平均日增重、日采食量、皮膚顏色和脛?lì)伾?jí)別分別提高了5.05%、3.41%、0.7%和1.25%；腹脂率降低了0.67個(gè)百分點(diǎn)；能量的表觀代謝率、粗蛋白質(zhì)的表觀消化率均有所提高，但組間差異均不顯著（P＜0.05）[10]。

[1]Lin J S,Chen C C,Hu H Y.Homologous and heterologous expres?sion of chitosanase gene frombacillus subtilisNCHU-05[J].Jour?nal of Biotechnology,2010(150):354.

[2]Lee S J,Pan J G,Park S H,et al.Development of a stationary phase-specific autoinducible expression system inbacillus subtilis[J].Journal of Biotechnology,2010（149）:16-20.

[3]Wang L J,Shan A S,Song J C.Performance and nutrient utiliza?tion of layers fed diet supplemented with microbial phytase and cellulase[J].Journal of Northeast Agricultural University,2003,10（1）:33-39.

[4]Kemme P A.Impact on nutrient digestibility and factors affecting phytase efficacy[J].Phylate and Phytases in Pig Nutrition,1998,7（1）:67-72.

[5]張克英,陳代文,余冰,等.飼糧中添加植酸酶對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能及蛋白質(zhì)、氨基酸和磷利用率的影響[J].動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2001,13（3）:19-24.

[6]王振來(lái).高次粉飼糧中添加復(fù)合酶制劑對(duì)仔豬生長(zhǎng)和消化的影響[J].河北畜牧獸醫(yī),2005,21（6）:3-4.

[7]楊桂芹,王芬,韓國(guó)寶,等.纖維素酶制劑對(duì)雛鵝飼糧營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響[J].畜牧與獸醫(yī),2005,37（3）:21-23.

[8]許梓榮,錢利純,孫建義.高麥麩飼糧中添加β-葡聚糖酶、木聚糖酶和纖維素酶對(duì)肉雞作用效果的研究[J].動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2000,11（1）:61.

[9]王玲,張惠玲.復(fù)合酶制劑對(duì)肉雛雞消化機(jī)能的影響[J].飼料工業(yè),2000,21（9）:32-33.

[10]鄭文明.添加纖維素復(fù)合酶對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)的影響[J].飼料博覽,2006（8）:4-6.