李志同,楊偉寧,解秸萍,趙雅芳,李勝杰

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電針不同穴位對慢性阻塞性肺病大鼠腸微循環(huán)及不同臟器VIP含量的影響

李志同,楊偉寧,解秸萍,趙雅芳,李勝杰

(北京中醫(yī)藥大學(xué),北京 100029)

觀察電針豐隆(ST40)、尺澤穴(LU5)對慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary diseases,COPD)大鼠腸微循環(huán)及不同臟器血管活性腸肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)分布的影響,觀察同經(jīng)穴與相關(guān)經(jīng)穴對肺及腸的影響特點,探討穴位相對特異性的規(guī)律。將32只Wistar雄性大鼠隨機分為正常組、模型組、尺澤組和豐隆組,每組8只。除正常組外,其余各組均采用氣管滴入LPS配合煙熏方法制備COPD模型。豐隆組和尺澤組隔日針刺1次,共治療12次,實驗周期為28 d。觀察各組大鼠腸系膜微血管管徑和血液流態(tài)的變化,并采用放射免疫法測定肺、腸及下丘腦中VIP含量。與正常組相比,模型組大鼠腸系膜微血管血流顯著加快(＜0.05),豐隆組顯著減慢(＜0.01);與模型組相比,尺澤組及豐隆組大鼠血流均顯著減慢(＜0.01)。各組大鼠腸、下丘腦中VIP含量與同組肺中VIP含量比較,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(＜0.01,＜0.05)。尺澤組大鼠下丘腦中VIP含量與模型組比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(＜0.05)。尺澤、豐隆穴均可阻逆COPD引起的腸系膜微血管血流加快。尺澤穴可顯著降低下丘腦中VIP含量,提示尺澤穴阻逆COPD引起的血流加快與尺澤穴降低下丘腦中VIP含量有關(guān)。

針刺療法;電針;慢性阻塞性肺病;腸系膜微循環(huán);血管活性腸肽;大鼠;穴,尺澤;穴,豐隆

“一穴多病、多穴一病”是針灸穴位效應(yīng)的主要特點,但針對一穴對多病的作用效應(yīng)是否相同?針對一病,多穴的作用是否相同?其作用的特點又是什么?這些問題是目前針灸研究亟待回答的問題。

尺澤是肺經(jīng)合穴,可瀉肺氣,調(diào)胃腸,治療咳喘、嘔吐泄瀉[1];豐隆是胃經(jīng)絡(luò)穴,其作用為健脾和胃,化痰理氣,可治療胃腸病,又是化痰要穴,用于治療由痰濁引起的多種病癥[2]。肺和大腸相表里,肺和腸為尺澤、豐隆二穴共同作用的部位。但針對慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary diseases,COPD),二者對其肺和腸的作用特點及作用途徑如何?目前尚未見報道,為此,本實驗通過氣管滴入LPS配合煙熏建立COPD大鼠模型,觀察尺澤、豐隆二穴對腸微循環(huán)及肺、腸等組織中VIP含量的影響,以期初步了解同病異穴的作用特點,從而探討腧穴相對特異性的規(guī)律。

1 材料和方法

1.1 實驗動物及分組

健康Wistar大鼠32只(北京市海淀區(qū)興隆實驗動物養(yǎng)殖廠提供),體重(180～220)g,雄性,清潔級實驗動物。按隨機數(shù)字法將32只大鼠分為正常組、模型組、尺澤組和豐隆組,每組8只。

1.2 儀器設(shè)備與試劑

XW-B-3冷光源微循環(huán)顯微檢查儀、KEL-2000型顯微鏡溫控儀、SG-H1型恒溫恒濕實驗系統(tǒng),均由南京盛光光電醫(yī)療儀器有限責(zé)任公司提供;HANS-200型韓氏穴位神經(jīng)刺激儀,南京濟生醫(yī)療科技有限公司提供;漢醫(yī)針灸針(0.25 mm×25 mm),天津杏林書院醫(yī)療器械有限公司提供;脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS),北京環(huán)亞泰克生物技術(shù)有限公司提供;中南海牌香煙,北京卷煙廠提供;煙熏箱,自制。VIP放免試劑盒購自北京康源瑞得生物技術(shù)有限公司。Sn-69513型免疫計數(shù)器購自上海核所日環(huán)光電儀器有限公司。

1.3 模型制備

模型參照宋一平等[3]制備COPD方法,即采用煙熏加氣管注入脂多糖(LPS)的方法,分別于第1、14天采用10%水合氯醛(0.35 mL/100 g)大腿外側(cè)肌肉麻醉,將大鼠固定于解剖臺上,將20號靜脈套管針沿氣管走行快速插入,注入溶于注射用生理鹽水的濃度為1 mg/mL的脂多糖0.2 mL,繼續(xù)注入等體積的空氣,將大鼠直立,左右旋轉(zhuǎn),使脂多糖在肺內(nèi)均勻分布。第2～13、15～28天將大鼠置于自制煙熏箱中,以鐵絲插入香煙過濾嘴,點燃后于箱子頂部小洞深入,每次4支,每日1次,持續(xù)1 h,每箱4只大鼠,平均每只大鼠1支煙,周期為28 d。

1.4 治療方法

取尺澤、豐隆穴。穴位根據(jù)大鼠形態(tài)、解剖、生理等特點,參照大鼠標準穴位圖譜[4]定位。尺澤位于大鼠肘彎橫紋偏外的凹陷中;豐隆位于大鼠小腿骨的中點腓骨后緣相當于豐隆穴肌肉中。將毫針刺入穴區(qū)3～5 mm,另一針刺入同一穴區(qū)皮下,兩針接韓氏電針儀,選擇疏密波,頻率2～100 Hz,強度以動物肢體微微抖動為度,留針20 min。尺澤組和豐隆組從第2天起,隔日下午2時針刺1次,共治療12次。正常組和模型組期間僅抓取不做針刺治療。

1.5 實驗方法

1.5.1 腸系膜微循環(huán)觀察方法

采用20%烏拉坦(1 g/L)于大鼠大腿外側(cè)肌肉進行麻醉。將大鼠仰臥固定于操作臺,腹正中做切口1～2 cm,取回盲腸部附近的腸系膜平鋪于生理鹽水恒溫(37℃)腸系膜觀察盒內(nèi),接通微循環(huán)顯微測試儀,在恒溫恒濕實驗系統(tǒng)下選擇直徑為20～100mm、有動靜脈伴行的、周圍無雜亂血管的腸系膜微血管進行觀測,記錄腸系膜微血管管徑變化情況,于1×、2×、4×鏡下采集靜態(tài)圖像,2×、4×鏡下采集動態(tài)圖像。每10 min觀察1次,連續(xù)觀察4次,取均值進行統(tǒng)計。

1.5.2 組織勻漿制作

各組大鼠腹主動脈放血處死后,迅速分離右肺、結(jié)腸及下丘腦。生理鹽水洗凈后,各組織切取約400 mg,與生理鹽水按1:4放入勻漿管中,放置在冰上研磨,制成勻漿,以3500 r/min離心15 min,取上清液,﹣20℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.6 觀察指標

1.6.1 VIP含量

放免法檢測肺、結(jié)腸及下丘腦VIP含量,按試劑盒說明操作。

1.6.2 腸系膜微血管管徑、血液流態(tài)

血液流態(tài)依據(jù)田牛[5]的半定量流速分級測定法結(jié)合本實驗的特點,將血液流態(tài)分為4級。0級為血流停滯不動或血流不可見;Ⅰ級為血流慢,成泥沙狀,流動緩慢或前后擺動;Ⅱ級為血流較快,微有顆粒感或有顯著的顆粒感;Ⅲ級為血流快,呈光滑的索條狀,無顆粒感。

1.7 統(tǒng)計學(xué)方法

實驗數(shù)據(jù)用SPSS17.0軟件包進行統(tǒng)計學(xué)處理,用均數(shù)±標準差表示。若數(shù)據(jù)是正態(tài)分布,用單因素方差分析();若數(shù)據(jù)是非正態(tài)分布,用非參檢驗。等級資料采用秩和檢驗。以＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

正常組大鼠一般情況良好。模型組、尺澤組及豐隆組大鼠4星期時毛色萎黃,精神不振,厭食,體重顯著減輕,喘息,大便干結(jié)或不成形,呼吸道分泌物增多;尺澤組與豐隆組大鼠狀態(tài)較模型組略輕。

2.2 各組大鼠腸微循環(huán)及微血管管徑變化

選擇直徑在20～100mm、有動靜脈伴行的、周圍無雜亂血管的腸系膜微血管進行觀測,各組內(nèi)符合要求的大鼠均為7只。模型組、尺澤組、豐隆組腸系膜微血管管徑與正常組比較,均有增加趨勢,但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(＞0.05);尺澤組、豐隆組腸系膜微血管管徑與模型組比較,均有減小趨勢,但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(＞0.05)。模型組和豐隆組血液流態(tài)與正常組比較,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(＜0.05,＜0.01);尺澤組和豐隆組血液流態(tài)與模型組比較,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(＜0.01)。

表1 各組大鼠腸微血管管徑及腸微循環(huán)血流狀態(tài)比較

注:與正常組比較1)＜0.01,2)＜0.05;與模型組比較3)＜0.01

2.3 各組大鼠組織內(nèi)VIP含量比較

由表2可見,各組大鼠腸、下丘腦中VIP含量與同組大鼠肺中VIP含量相比較,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(＜0.01,＜0.05)。正常組大鼠下丘腦中VIP含量與同組大鼠腸中VIP含量相比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(＜0.05)。尺澤組大鼠下丘腦中VIP含量與模型組比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(＜0.05)。

表2 各組大鼠組織內(nèi)VIP含量比較 (±s,pg/mL)

注:與同組肺中VIP含量比較1)＜0.01,2)＜0.05;與同組腸中VIP含量比較3)＜0.05;與模型組比較4)＜0.05

3 討論

現(xiàn)代研究表明,組織內(nèi)微循環(huán)狀況可以反映該組織生理病理情況。同時,研究發(fā)現(xiàn)針灸對甲皺、胃腸、球結(jié)膜、心肌以及四肢等部位的微循環(huán)均有顯著影響[6]。腸微循環(huán)可以反映腸的生理病理情況。本實驗通過氣管滴注LPS配合煙熏制備COPD模型,其直接損傷部位在肺,模型組腸微血管管徑變粗、血流加快,與炎癥時微循環(huán)變化相符[7],提示肺部炎癥可以影響到腸微循環(huán)血流狀態(tài),可以印證中醫(yī)學(xué)理論中“肺與大腸相表里及肺經(jīng)下絡(luò)大腸”。VIP是一種由28個氨基酸組成的肽類物質(zhì),屬于促胰液素-胰高血糖素家族。有研究表明,VIP具有擴張氣道平滑肌、調(diào)節(jié)黏液分泌和擴血管作用,同時還有調(diào)節(jié)氣道炎癥和肺功能的作用[8];VIP是一種抑制性神經(jīng)遞質(zhì)[9],可松弛消化道平滑肌,參與調(diào)解胃腸運動,擴張血管,降低血壓,刺激腸液的分泌[10];有研究發(fā)現(xiàn)[11],顱腦損傷后,腦脊液中VIP含量明顯升高,顱腦損傷后0.5 h及24 h肺組織VIP含量下降,而6 h及24 h血漿和肺組織VIP含量明顯升高,可引起VIP在肺組織含量的改變,但肺病引起腦內(nèi)VIP含量變化卻鮮見報道。VIP在模型組中呈升高趨勢,說明模型組中微循環(huán)的改變與VIP含量的變化有一定的相關(guān)性。尺澤穴為肺經(jīng)合穴,《難經(jīng)·六十八難》中提出“合主逆氣而泄”,臨床報道,尺澤穴放血可治療急性胃腸炎[12];豐隆穴是胃經(jīng)絡(luò)穴,具有健脾和胃,為化痰要穴,如《玉龍歌》:“傷風(fēng)不解嗽頻頻,久不醫(yī)時勞便成,咳嗽須針肺俞穴,痰多宜向豐隆尋?！比欢?針對COPD中出現(xiàn)的腸微循環(huán)改變,二者對其調(diào)節(jié)作用是否相同?

本實驗顯示,與模型組相比,尺澤組和豐隆組腸微血管管徑均呈減小趨勢,且血流速度減慢,說明尺澤穴和豐隆穴均可阻逆炎癥引起腸微循環(huán)血流變化,但二者未顯示顯著性差異(＞0.05)。二者在改變臟器中VIP含量的作用不同。尺澤組下丘腦內(nèi)VIP含量顯著下降,同時VIP含量在肺、腸內(nèi)呈下降趨勢,本實驗?zāi)Ｐ蜑榉尾∧Ｐ?尺澤穴為肺經(jīng)合穴,其作用直接在肺,可阻逆COPD病理引起的肺部病理改變,降低腦中VIP含量,VIP作為抑制神經(jīng)遞質(zhì),其含量的減少使腸微循環(huán)管徑減小,流速降低,故尺澤穴調(diào)節(jié)COPD中出現(xiàn)的腸微循環(huán)改變的作用途徑可能與下丘腦內(nèi)VIP含量變化相關(guān);豐隆僅使肺和下丘腦中VIP含量有下降趨勢,對腸內(nèi)VIP含量呈增加趨勢,考慮為豐隆穴從化痰的角度阻逆COPD中肺的損傷。兩組中腸內(nèi)VIP含量的變化趨勢截然相反,其原因有待進一步研究。

有學(xué)者認為,穴位的排列具有明顯的“趨神經(jīng)”現(xiàn)象[13],穴位特異性的作用點往往和同神經(jīng)節(jié)段或相鄰神經(jīng)節(jié)段的內(nèi)臟相關(guān)性密切。神經(jīng)解剖學(xué)[14]中將人體體表感覺和肌肉運動與脊神經(jīng)的節(jié)段性一一對應(yīng),同時,內(nèi)臟的感覺和運動也存在脊神經(jīng)的節(jié)段對應(yīng)性。腸所對應(yīng)的神經(jīng)節(jié)段為T6-L3,與豐隆穴所處神經(jīng)節(jié)段L4-S2相鄰,與尺澤穴對應(yīng)的神經(jīng)節(jié)段C5-6相距甚遠,但為何對腸中VIP含量的改變豐隆穴效果弱于尺澤穴?考慮為豐隆穴對腸的作用途徑是通過脊髓反射,而未通過高級中樞,該作用的特點多為反應(yīng)快,但作用時間短,本實驗周期較長,脊髓反射的效應(yīng)消失而中樞效應(yīng)開始顯現(xiàn),故出現(xiàn)豐隆組腸內(nèi)VIP含量呈上升趨勢,尺澤組腦內(nèi)VIP含量顯著下降,腸內(nèi)VIP含量呈下降趨勢。

研究發(fā)現(xiàn),在肺組織中存在大量的特異性VIP受體[15-16],本實驗結(jié)果顯示,VIP在肺內(nèi)含量顯著高于腸和下丘腦含量,與既往研究發(fā)現(xiàn)一致,本實驗通過氣管滴入LPS配合煙熏建立動物模型,其直接損傷部位在肺,而實驗結(jié)果顯示,與正常組相比,模型組肺、腸和下丘腦內(nèi)VIP含量均有上升趨勢,說明在一個臟器炎癥損傷時,可以引起機體多個臟器的反應(yīng),且有高級中樞參與;尺澤組下丘腦中VIP含量顯著下降,同時,尺澤組和豐隆組中肺、腸內(nèi)VIP含量均呈下降趨勢,可以從一個方面證明筆者之前提出的假說[17]——“臟腑組織存在相互通用的物質(zhì)源,針灸穴位效應(yīng)的本質(zhì)是對相關(guān)臟腑組織之間物質(zhì)的調(diào)配及其功能調(diào)節(jié)”。

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Effects of Electroacupuncture at Different Points on Mesenteric Microcirculation and the VIP Content of Different Viscera in COPD Rats

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,100029,

To observe the effects of electroacupuncture at points Fenglong(ST40) and Chize(LU5) on mesenteric microcirculation and the distribution of vasoactive intestinal peptide (VIP) in different viscera in rats with chronic obstructive pulmonary diseases (COPD), investigate the characteristics of the influences of homo-meridian points and related meridian points on the lung and intestine and explore regularities in the relative specificities of acupuncture points.Thirty-two male Wistar rats were randomly allocated to normal, model, Chize and Fenglong groups, 8 rats each. A COPD model was made by intratracheal instillation of LPS with the cooperation of fume smoking in all groups except the normal group. Fenglong and Chize groups were given acupuncture once every other day, for a total of 12 treatments. The experimental period was 18 days. Mesenteric microvascular caliber and blood flow were measured in each group of rats. Pulmonary, intestinal and hypothalamic VIP contents were determined by radioimmunoassay.Compared with the normal group, blood flow velocity increased significantly in the model group (＜0.05) and decreased significantly in the Fenglong group (＜0.01). Compared with the model group, blood flow velocity decreased significantly in the Chize and Fenglong groups (＜0.01). There was a statistically significant difference between intestinal or hypothalamic VIP content and pulmonary VIP content in each group of rats (＜0.01,＜0.05). There was a statistically significant difference in hypothalamic VIP content between the Chize and model groups of rats (＜0.05).Points Chize(LU5) and Fenglong(ST40) can both prevent a COPD-caused increase in mesenteric microvascular blood flow velocity. Point Chize(LU5) can significantly reduce hypothalamic VIP content, suggesting that point Chize(LU5) preventing a COPD-caused increase in blood flow velocity is related to it reducing hypothalamic VIP content.

Acupuncture Therapy; Electroacupuncture; Chronic obstructive pulmonary disease; Mesenteric microcirculation; Vasoactive intestinal peptide; Rats; Point, Chize(LU5); Point, Fenglong(ST40)

1005-0957(2013)07-0604-04

R2-03

A

10.3969/j.issn.1005-0957.2013.07.604

2013-01-23

北京中醫(yī)藥大學(xué)自主選題項目在讀研究生資助項目(2011- JYBZZ-XS099)

李志同(1986 - ),男,2010級碩士生

解秸萍(1961 - ),女,教授,研究方向為腧穴特異性研究, E-mail:xiejieping@sina.com