李厚洋蔡其輝田宏現(xiàn)吳開(kāi)慧

（1 常德市第一人民醫(yī)院藥劑科，湖南 常德 415000；2 吉首大學(xué)生物資源與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，湖南 吉首 416000）

HPLC法測(cè)定縮泉膠囊中尿囊素的含量

李厚洋1蔡其輝2田宏現(xiàn)2吳開(kāi)慧1

（1 常德市第一人民醫(yī)院藥劑科，湖南 常德 415000；2 吉首大學(xué)生物資源與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，湖南 吉首 416000）

目的 建立縮泉膠囊中尿囊素的含量測(cè)定。方法 采用Shimadzu-pack-ODS（250×4.6mm）；以乙腈-0.01mol/L磷酸二氫鉀（10∶90）為流動(dòng)相；流速為1.0mL/min；柱溫25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為224nm。結(jié)果 尿囊素的線性范圍在25.0～125.0μg/mL；r=0.9998；平均回收率為98.84%，RSD為1.13%。結(jié)論 本法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，可靠，可用于控制縮泉膠囊的質(zhì)量。

縮泉膠囊；尿囊素；高效液相色譜法

山藥（Dioscorea opposeta Thunb）為薯蕷科植物薯蕷的干燥根莖，其功能主治為補(bǔ)脾養(yǎng)胃，生津益肺，補(bǔ)腎澀精。用于脾虛食少，久瀉不止，肺虛遺精，帶下，尿頻，虛熱消渴[1,2]。其主要化學(xué)成分含有皂苷、尿囊素等多種活性成分[3,4]。而尿囊素具有抗刺激物，麻醉鎮(zhèn)痛，促進(jìn)上皮生長(zhǎng)，消炎抑菌等作用[5]；由山藥、益智仁、烏藥3味藥組成的復(fù)方制劑縮泉膠囊，具有補(bǔ)腎縮尿。用于腎虛之小便頻有頻數(shù)，夜臥遺尿[6,7]，因此，本實(shí)驗(yàn)建立了HPLC法測(cè)定縮泉膠囊中尿囊素的含量，能更好地對(duì)該制劑進(jìn)行質(zhì)量控制，確保產(chǎn)品療效。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Shimadzu LC-10AT泵（日本島津公司），Shimadzu SPD-10A紫外檢測(cè)器（日本島津公司）；Rheodyne 7125六通進(jìn)樣閥（loop=20μL）（日本島津公司）；Shimadzu Pack-ODS柱，250×4.6mm（日本島津公司）；N3000色譜工作站+forWindows2000（浙江大學(xué)智能研究所）；FA-2004電子分析天平（上海天平儀器廠）；KQ-250E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

尿囊素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，111501-200202）?？s泉膠囊（湖南漢森制藥有限公司生產(chǎn)，規(guī)格：每粒裝0.3g，本醫(yī)院藥劑科提供）。乙腈（湖南師大化學(xué)試劑廠，色譜純），乙醇（湖南師大化學(xué)試劑廠，分析純）；磷酸二氫鉀（湖南師大化學(xué)試劑廠，分析純）；水為二次重蒸餾水（自制）。

2 方法與結(jié)果

圖1 尿囊素對(duì)照品（A）、空白（B）、縮泉膠囊（C）的HPLC圖譜

2.1 色譜條件

色譜柱：Shimadzu-Pack-ODS柱（250×4.6mm），流動(dòng)相：乙腈-0.01mol/L磷酸二氫鉀（10∶90）為流動(dòng)相；流速為1.0mL/min；柱溫25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為224nm；進(jìn)樣量：20μL；尿囊素在此色譜條件下的保留時(shí)間約為9min。色譜圖見(jiàn)圖1：A和C。對(duì)照品溶液的配制：取尿囊素對(duì)照品適量，放入五氧化二磷減壓干燥器中干燥36h，精密稱(chēng)定，加入50%乙醇制成每1mL含0.50mg的溶液，即得。

2.2 供試品溶液的制備

取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容，精密稱(chēng)定本品約0.5g，置具塞錐形瓶中，精密加50%乙醇25mL，密塞，輕輕振搖，稱(chēng)定重量，超聲處理（100W，50kHz）3次，每次10min，放冷后，再超聲，取出，放冷，再稱(chēng)定重量，用50%的乙醇補(bǔ)足減失的重量，充分振搖，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。作為供試品溶液。

3.注重突破節(jié)約資源和環(huán)境保護(hù)方面的技術(shù)瓶頸。加大投資力度，由政府直接引進(jìn)或者制定政策扶持企業(yè)引進(jìn)節(jié)能減排先進(jìn)技術(shù)，如能源領(lǐng)域的節(jié)能減排、燃料電池、太陽(yáng)能、風(fēng)能、生物質(zhì)能等新能源技術(shù)，如生活方面的節(jié)水和資源綜合利用的技術(shù)，如建筑方面建筑節(jié)能、綠色照明、節(jié)能監(jiān)測(cè)和技術(shù)服務(wù)體系建設(shè)等，積極引導(dǎo)支持企業(yè)和全社會(huì)提高能源資源利用效率，減少排放。根據(jù)東營(yíng)本地的資源環(huán)境、產(chǎn)業(yè)體系、污染狀況，有針對(duì)性地資助或者聯(lián)合開(kāi)發(fā)本地需求的節(jié)能環(huán)保技術(shù)。如針對(duì)石油石化、橡膠輪胎產(chǎn)業(yè)的能量梯級(jí)利用技術(shù)、區(qū)域熱電聯(lián)產(chǎn)、余熱余壓利用、廢料回收利用等技術(shù)，如符合東營(yíng)需要的鹽堿地改造、耐鹽植物選育推廣等技術(shù)。

2.3 空白試驗(yàn)

按本制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和處方比例，制備缺味（山藥）中藥的陰性樣品制劑，按2.3項(xiàng)下供試品溶液操作方法進(jìn)行樣品處理，所得空白試驗(yàn)。精密吸取20μL注入液相色譜儀，測(cè)定分析，結(jié)果顯示無(wú)干擾。色譜圖見(jiàn)圖1 B。

2.4 線性關(guān)系考察

精密量取對(duì)照品溶液，各0.5mL，1.0mL，1.5mL，2.0mL，2.5mL，3.0mL置10mL量瓶中，加50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取20μL注入液相色譜儀，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，尿囊素濃度（X）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=2845.2X+154.8，r=0.9998。結(jié)果表明尿囊素在25～150.0μg/mL，線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液（80μg/mL），精密吸取20μL注入色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣5次，計(jì)算尿囊素峰面積RSD分別為1.63%，說(shuō)明儀器性能良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批號(hào)樣品溶液（批號(hào)為080201，含量為0.43mg/粒），在常溫放置12h，每2h進(jìn)樣一次，共測(cè)定6次，每次20μL，結(jié)果尿囊素含量RSD為2.89%，表明樣品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

取同一批號(hào)樣品（批號(hào)為050101），量取樣品6份，按2.3項(xiàng)下樣品溶液的制備方法，制備樣品，平行測(cè)定，結(jié)果：尿囊素的含量平均值為0.33mg/mL，RSD為0.92%（n=6），說(shuō)明方法重現(xiàn)性較為良好。

2.8 回收率試驗(yàn)

取裝量差異下的縮泉膠囊（批號(hào)為080201，含量為0.43mg/粒）6份，每份0.5g，精密稱(chēng)定，再分別加入尿囊素對(duì)照品溶液（0.05mg/ mL）5mL，按供試品溶液制備方法操作，制備加樣回收試驗(yàn)樣，精密吸取20μL注入液相色譜儀，測(cè)定分析，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為98.84%，RSD=1.13%（n=6）。見(jiàn)表1。

2.9 樣品測(cè)定

取不同批號(hào)的縮泉膠囊，按2.3項(xiàng)下供試品溶液方法制備，制備樣品，分別精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各20μL，注入色譜儀，按外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 樣品加標(biāo)回收率測(cè)定結(jié)果（n=6）

表2 縮泉膠囊中尿囊素含量（n=5）

2.10 色譜條件的選擇

本試驗(yàn)，對(duì)流動(dòng)相乙腈和磷酸二氫鉀水溶液，考察過(guò)0.005mol/L、0.01mol/L、0.05mol/L、0.1mol/L等比例磷酸二氫鉀水溶液；最后經(jīng)試驗(yàn)確定，以0.05mol/L的磷酸二氫鉀溶液的流動(dòng)相，獲得較好的峰形，呈正態(tài)分布，分離度＞1.5。

3 結(jié) 論

3.1 樣品處理

本實(shí)驗(yàn)采用超聲處理方式，因?yàn)槟蚰宜貙?duì)熱不穩(wěn)定[7]，加熱回流對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)量的影響，故本試驗(yàn)采用超聲處理方法。

3.2 提取次數(shù)的考察

3.3 采用50%乙醇為萃取溶媒，對(duì)萃取不同的次數(shù)所得尿囊素含量進(jìn)行了考察，結(jié)果萃取3次后含量不再變化，故本實(shí)驗(yàn)選擇萃取3次。

3.4 本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定縮泉膠囊中尿囊素的含量，其提取方法簡(jiǎn)便，分析快速，較薄層掃描相比，影響系數(shù)少，精密度高，重現(xiàn)性好，且空白無(wú)干擾，可用于縮泉膠囊的質(zhì)量。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:27.

[2] 趙宏,謝曉玲,萬(wàn)全志,等.山藥的化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展[J].今日藥學(xué),2009,19(3):49-52 .

[3] 姜芳婷,李明靜,史會(huì)齊.山藥的研究[J].河南大學(xué)學(xué)報(bào),2004,23 (3):4.

[4] 李志浩,李鵬,孫建新,等.HPLC法測(cè)定小兒健脾顆粒中尿囊素的含量[J].中國(guó)藥師,2010,1(13):55-56.

[5] 周心如,曹京宜.山藥中尿囊素的高效液相色譜分析方法研究[J].色譜,1996,14(2):129-131.

[6] 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)(試行)WS3-654(Z-130)-2003(Z)[S]. 2003.

[7] 張軍,秦雪梅,薛黎明,等.HPLC-ELSD法測(cè)定山藥中尿囊素含量的研究[J].藥物分析雜志,2008,28(10):1648.

HPLC Determination of Allantoin in Suoquan Capsules

LI Hou-yang1, CAI Qi-hui2, TIAN Hong-xian2, WU Kai-hui1
(1 Department of Pharmacy, First People's Hospital of the Changde, Changde 41500, China; 2 Biological Resources and Environment Science College, Jishou University, Jishou 416000, China)

Objective HPLC methods were established for the determination allantoin of Suoquan capsules. Methods The separation was performed on a Shimadzu-pack-ODS（250×4.6mm）;The mobile phase was composed of methanol-water-diethlamine（10∶90）;The flowrate was 1.0mL/min;The detection wavelenth was 224nm. Results There is a good linear relationship within the rang of 25.0～125.0μg/mL（r=0.9998）;The average recovery was 98.84%; RSD=1.13%. Conclusions The method is convenient accurate，reliable and suitable for the quality control of Suoquan capsules.

Suoquan; Capsules; Allantoin; HPLC

R914

B

1671-8194（2013）27-0020-02