殷 帥* 林 海蔣秋桃孟慶玉雷玉萍吳公平

（1 湖南省食品藥品檢驗(yàn)研究院，湖南 長(zhǎng)沙 410001；2 湖南省食品藥品監(jiān)督管理局，湖南 長(zhǎng)沙 410001）

氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定干制魚(yú)中敵百蟲(chóng)殘留

殷 帥1* 林 海1蔣秋桃1孟慶玉1雷玉萍1吳公平2

（1 湖南省食品藥品檢驗(yàn)研究院，湖南 長(zhǎng)沙 410001；2 湖南省食品藥品監(jiān)督管理局，湖南 長(zhǎng)沙 410001）

目的建立干制魚(yú)中敵百蟲(chóng)殘留的氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)方法。方法采用Agilent 7890A/5975C 氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀，HP-5MS毛細(xì)管柱(i.d. 30m×0.32mm×0.25μm)，樣品中敵百蟲(chóng)經(jīng)三氯甲烷提取，提取液濃縮、脫脂、凈化后，用氣相色譜法-質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定，外標(biāo)峰面積法定量，子離子豐度比定性。結(jié)果敵百蟲(chóng)線(xiàn)性范圍為0.1～5.0μg/mL，r=0.9998，檢測(cè)限為0.02mg/kg，在0.1～2.0mg/kg的3個(gè)添加水平的平均回收率為84.8%～107.7%。結(jié)論本方法可以準(zhǔn)確、快速的檢測(cè)出干魚(yú)中敵百蟲(chóng)的含量。

敵百蟲(chóng)；氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法

敵百蟲(chóng)是高效、低毒及低殘留的殺蟲(chóng)劑。對(duì)魚(yú)體內(nèi)外寄生的吸蟲(chóng)、線(xiàn)蟲(chóng)、棘頭蟲(chóng)及危害魚(yú)苗、魚(yú)卵的枝角類(lèi)、橈角類(lèi)、蚌鉤介幼蟲(chóng)和水蜈蚣等均有良好的殺滅作用。但由于敵百蟲(chóng)在弱堿性條件下，可形成殘毒性更大的敵敵畏[1]，當(dāng)pH值為8～10時(shí)，敵百蟲(chóng)轉(zhuǎn)變成敵敵畏僅需半小時(shí)。因此，不但要顧及魚(yú)蝦的毒性效應(yīng)，而且對(duì)人、畜的安全也不可忽視。

近年來(lái)，我國(guó)曾多次發(fā)現(xiàn)有不法商販?zhǔn)褂脭嘲傧x(chóng)加工咸魚(yú)，給人們的身體健康和生命安全帶來(lái)了極大的安全隱患。針對(duì)這一現(xiàn)象，我們建立了干制魚(yú)中敵百蟲(chóng)的測(cè)定方法。該方法可準(zhǔn)確檢測(cè)干制魚(yú)中的敵百蟲(chóng)，能夠?yàn)椴惋嬍称钒踩L(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)提供技術(shù)支撐。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

GC-7890A氣相色譜儀，帶5975C質(zhì)譜儀；syncoreanalyst多樣品蒸發(fā)系統(tǒng)；pt3100d型數(shù)顯程控式均質(zhì)機(jī)；Thermo Heraeus 高速冷凍離心機(jī)；HMS-350渦旋混合器；XS205型電子分析天平。

1.2 試劑與試藥

敵百蟲(chóng)標(biāo)準(zhǔn)品（Trichlorphon，純度：98.2%，由Sigma公司提供）；乙腈、三氯甲烷、乙酸乙酯、正己烷均為色譜純，無(wú)水硫酸鈉、乙酸鋅均為分析純，水為去離子純化水；高純氦氣。

2 方法與結(jié)果

2.1 GC-MS條件

色譜條件：色譜柱為HP-5MS毛細(xì)管柱（柱長(zhǎng)30m，內(nèi)徑0.25mm，膜厚度0.25μm）；載氣:高純氦氣，恒流，流速為1.0mL/min；脈沖不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量1μL。進(jìn)樣口溫度200℃，柱溫升溫程序：從50℃起，保留2min，以10℃/min升至170℃，保留1min，再以20℃/min升至200℃，保留3min。

質(zhì)譜條件：EI源，轟擊電壓70eV；離子源溫度230℃，四極桿溫度150℃，輔助接口溫度260℃；采集模式：全掃描與選擇離子監(jiān)測(cè)（SIM）同時(shí)進(jìn)行，掃描范圍：50～550amu；特征選擇離子見(jiàn)表1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

取敵百蟲(chóng)標(biāo)準(zhǔn)品約10mg，精密稱(chēng)重，置20mL容量瓶中，用乙酸乙酯配制成濃度為500μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。精密吸取敵百蟲(chóng)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量，用乙酸乙酯逐級(jí)稀釋成濃度分別約為0.1、0.5、1、2、5μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列。

表1 選擇特征離子與定量離子

2.2.2 供試品溶液的制備

取干魚(yú)絞碎混勻，取約5g（精確至0.01g），置50mL離心管中，加入乙酸鋅0.5g，再加入2+9乙腈溶液20mL，均質(zhì)儀均質(zhì)2min，4000r/min離心3min，上清液轉(zhuǎn)移至250mL分液漏斗中，離心管中殘?jiān)偌尤胍译?0mL，均質(zhì)2min，4000r/min離心3min，合并提取液于同一250mL分液漏斗中，加20g/L硫酸鈉水溶液100mL，震蕩混勻，加入30mL二氯甲烷，劇烈振搖3min，靜置分層，將下層二氯甲烷液通過(guò)無(wú)水硫酸鈉柱，用250mL濃縮瓶收集，上層再加入30mL二氯甲烷，重復(fù)提取，提取液合并至250mL濃縮瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至干，定量加入1mL乙腈溶解殘留物，加入乙腈飽和的正己烷1mL，渦旋振蕩2min，置冰箱中冷凍保存2～3h，高速離心2min，取上清液，即得。

2.2.3 空白對(duì)照溶液的制備

作總試劑表的空白實(shí)驗(yàn)，按上述供試品溶液制備的方法，從“加入0.5g乙酸鋅”開(kāi)始，制成空白對(duì)照溶液?？瞻讓?duì)照應(yīng)無(wú)干擾。

2.3 測(cè)定法

精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液、供試品溶液及空白對(duì)照溶劑各1μL，注入氣相色譜儀，測(cè)定，色譜圖及質(zhì)譜圖見(jiàn)圖1～5。

2.4 線(xiàn)性關(guān)系考察

以5個(gè)濃度水平的敵百蟲(chóng)標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述測(cè)定條件，分別注入氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，以亞磷酸二甲酯的定量離子的峰面積對(duì)濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。在0.1～5.0μg/mL濃度范圍內(nèi)峰面積（Y）與濃度（X）的線(xiàn)性回歸方程為Y=140616X+18596，線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.9998，線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.5 回收率與精密度試驗(yàn)

稱(chēng)取5.0g干制魚(yú)空白樣品，分別加入約0.5μg（平行處理3份）、5μg（平行處理6份）、10μg（平行處理3份）敵百蟲(chóng)標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照2.2.2操作方法制備供試品溶液，回收率及精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

2.6 方法檢測(cè)限

圖1 空白對(duì)照溶液

圖2 標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 亞磷酸二甲酯;2 敵敵畏)

圖3 供試品溶液

圖4 亞磷酸二甲酯質(zhì)譜全掃描圖

圖5 敵敵畏質(zhì)譜全掃描圖

表2 回收率及精密度試驗(yàn)結(jié)果（n=12）

以干制魚(yú)空白樣品進(jìn)行加樣回收測(cè)定，在0.02mg/kg添加水平時(shí)，亞磷酸二甲酯定性離子的S/N為3，因此本方法的檢測(cè)限為0.02mg/kg。

3 討 論

3.1 敵百蟲(chóng)的測(cè)定方法一般有化學(xué)顯色法[2]、氣相色譜法[3]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法等[4]。因本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的樣品基質(zhì)是干制魚(yú)，干擾因素很多，采用化學(xué)顯色法和氣相色譜法檢測(cè)易產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果，專(zhuān)屬性不強(qiáng)。液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)靈敏度高，專(zhuān)屬性強(qiáng)，但儀器配備的難度大，費(fèi)用高。故本實(shí)驗(yàn)采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)干制魚(yú)中敵百蟲(chóng)含量，測(cè)定結(jié)果可靠，專(zhuān)屬性強(qiáng)，檢測(cè)靈敏度高。

3.2 敵百蟲(chóng)易分解成亞磷酸二甲酯和三氯乙醛[5]，經(jīng)質(zhì)譜檢測(cè)，標(biāo)準(zhǔn)品除出現(xiàn)亞磷酸二甲酯的峰外，還出現(xiàn)一個(gè)明顯的色譜峰，經(jīng)查看質(zhì)譜掃描圖，該物質(zhì)與敵敵畏的質(zhì)譜圖基本一致，可能是敵百蟲(chóng)在氣相色譜儀的高溫條件下轉(zhuǎn)化形成了敵敵畏。故參考“農(nóng)業(yè)部783號(hào)公告-3-2006水產(chǎn)品中敵百蟲(chóng)殘留量的測(cè)定”，敵百蟲(chóng)以亞磷酸二甲酯含量計(jì)，進(jìn)行定量。

3.3 干制魚(yú)中油脂類(lèi)成分含量很高，按照“農(nóng)業(yè)部783號(hào)公告-3-2006水產(chǎn)品中敵百蟲(chóng)殘留量的測(cè)定”的前處理方法處理樣品后，供試品溶液的顏色較深，放置一段時(shí)間后還可能析出白色固體物質(zhì)。這樣的含有大量雜質(zhì)的供試品溶液非常容易污染氣相色譜儀的襯管和色譜柱，并且質(zhì)譜圖中會(huì)出現(xiàn)很多雜峰，給分析帶來(lái)很大的麻煩。本實(shí)驗(yàn)在前處理步驟中加入已經(jīng)飽和的正己烷萃取雜質(zhì)及冷凍高速離心，能大量去除供試品溶液中的脂類(lèi)雜質(zhì)，減少了儀器的污染，也使質(zhì)譜圖干凈了很多，在不影響檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的條件下方便了結(jié)果分析。

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[5] 農(nóng)業(yè)部783號(hào)公告-3-2006水產(chǎn)品中敵百蟲(chóng)殘留量的測(cè)定[S]. 2006-12-161.

R155.5+1

B

1671-8194（2013）12-0075-02

湖南省科技重大專(zhuān)項(xiàng)課題湖南省食品安全監(jiān)控技術(shù)體系研究與示范

*通訊作者：E-mail：ys2275836@163．com