芎鉤天麻丸中芍藥苷的含量測定方法

高德榮

【摘 要】目的：建立高效液相色譜法測定芎鉤天麻丸中芍藥苷的含量。方法：采用Agilengt Eclipse Plus-C18色譜柱，流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸（14：86）；流速：0.6 ml·min-1；檢測波長230nm。結(jié)果：芍藥苷在0.4800～8.160μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9999），平均回收率為98.94%，RSD=0.36%（n=6）。結(jié)論：本方法操作簡便，專屬性強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于測定芎鉤天麻丸中芍藥苷的含量。

【關(guān)鍵詞】含量測定；技術(shù)

芎鉤天麻丸是由川芎、鉤藤、當(dāng)歸、石決明、桑寄生、細(xì)辛、珍珠母、黃芩、白芍、天麻等14 味藥材加工制成的醫(yī)院制劑，具有滋腎平肝、潛陽熄風(fēng)、除暈止痛、降血壓之功效，主治肝陽上亢、血虛失養(yǎng)引起的高血壓，緊張性、血管性神經(jīng)性頭疼、頭暈[1]。白芍為方中君藥，芍藥苷為白芍的主要有效成分，具有擴(kuò)張血管、保護(hù)腦缺血、抗血栓、抗血小板聚集、抗高血脂等作用，對(duì)芎鉤天麻丸療效的發(fā)揮起重要作用?，F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中未收載含量測定項(xiàng)目，不能有效的控制藥品質(zhì)量。本文以芍藥苷為指標(biāo)成分，建立了測定芎鉤天麻丸中芍藥苷的高效液相測定法，為該制劑的質(zhì)量控制提供了客觀的含量評(píng)價(jià)方法。

1.儀器與試藥

1.1儀器

Agilengt 1260高效液相色譜儀，AUW-220D電子分析天平 DSQ10260超聲儀。

1.2試藥

芍藥苷對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110736-201035）；乙腈為色譜純，水為本單位自制重蒸餾水，其余試劑為分析純。芎鉤天麻丸由柘城縣人民醫(yī)院提供。

2.方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：Agilengt Eclipse Plus-C18色譜柱（4.6×100mm）

流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸（14：86）為流動(dòng)相[2]；流速0.6ml·min-1；檢測波長230nm；進(jìn)樣量10μl；理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2.2線性關(guān)系考察

取黃芩苷對(duì)照品約12.0mg，精密稱定，置25ml棕色量瓶中，加甲醇適量，振搖使完全溶解后，稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。按照“2.1”項(xiàng)色譜條件，分別進(jìn)樣1、3、5、7、9、11、13、15、17μl，記錄芍藥苷峰面積值，以峰面積積分值（Y）對(duì)對(duì)照品濃度（X）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=235.05674X+12.52003 r=0.9999。結(jié)果表明，黃芩苷對(duì)照品在0.4800～8.1600μg范圍內(nèi)與峰面積值呈良好的線性關(guān)系。

2.3供試品溶液及陰性對(duì)照溶液的制備

取本品約0.1g，研細(xì)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，浸泡4小時(shí)，超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.45um微孔濾膜濾過，續(xù)濾液作為供試品溶液。另取缺白芍的其他味藥按處方工藝制成陰性制劑，按上述方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.4干擾試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照溶液各10μl，按照“2.1”項(xiàng)色譜條件，分別進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，黃芩苷的保留時(shí)間為8.818 min，理論塔板數(shù)為3512，黃芩苷與相鄰峰的分離度大于1.5，峰型對(duì)稱。陰性樣品無干擾。

2.5精密度試驗(yàn)

取2.2對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6 次，每次10μl，記錄綠原酸峰面積，RSD=0.39%（n=6），表明精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一對(duì)照品溶液，分別在0、2、4、8、12、16、24h進(jìn)樣測定，RSD=0.43%，供試品溶液在24 小時(shí)內(nèi)峰面積基本穩(wěn)定。

2.7加樣回收率試驗(yàn)

稱取6 份已知含量為6.173mg/g的樣品約0.05g，精密稱定，分別置1～6 號(hào)錐形瓶中，分別精密加入對(duì)照品儲(chǔ)備液1ml，按照“4、”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備溶液，按照“1”項(xiàng)色譜條件，分別測定，結(jié)果見表1。

2.8樣品測定

取3批樣品，按“4、”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，各進(jìn)樣10μl，按外標(biāo)法計(jì)算綠原酸的含量，結(jié)果見表2。

3.討論

3.1提取溶劑的選擇

有文獻(xiàn)報(bào)道以稀乙醇為提取溶劑，經(jīng)過比較發(fā)現(xiàn)以甲醇為溶劑測定含量所得的含量高。

3.2流動(dòng)相選擇

本試驗(yàn)曾用甲醇-0.05mol/l磷酸二氫鉀溶液（40∶65）為流動(dòng)相，主成分峰出峰效果較差，而采用乙腈-0.1%磷酸（14：86）為流動(dòng)相，色譜峰顯示，黃芩苷與相鄰的組分分離度大于1.5，具有較好的分離效果，且理論板數(shù)較高。

【參考文獻(xiàn)】

[1]朱德杰.高效液相色譜法測定芎鉤天麻丸中芍藥苷的含量.

[2]謝文健.HPLC法測定莪棱膠囊中芍藥苷的含量[J].中國藥師，2010，13（4）：592-593.