劉一鹿 方月妮 錢 強(qiáng)

（哈爾濱商業(yè)大學(xué)藥學(xué)院 黑龍江 哈爾濱 150076）

裙帶菜屬褐藻門昆布綱，是一種大型的經(jīng)濟(jì)海藻，在我國(guó)人工栽培裙帶菜十分普遍，其為溫帶性海藻，能忍受較高的水溫，產(chǎn)量較高。裙帶菜多糖是其重要的組成部分，有很多生物活性且具有與人體健康相關(guān)的活性因子，具有良好的抗腫瘤抗氧化活性，有廣闊的藥用前景。

1 裙帶菜多糖的提取方法及純度鑒定

裙帶菜中含有褐藻多糖硫酸酯（FSP），又稱為褐藻糖膠、巖藻聚糖硫酸酯或巖藻聚糖，它是一種存在于褐藻的細(xì)胞間多糖。其可溶于水，不溶于乙醇、丙酮、氯仿等有機(jī)溶劑。裙帶菜多糖有著多種生物活性，根據(jù)體內(nèi)外研究實(shí)驗(yàn)證明其抗腫瘤的活性較高，有一定的促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用［1］。裙帶菜多糖的主要提取方法有乙醇沉淀法、超聲波提取法、DEAE離子交換柱層析和凝膠柱層析法。純度鑒定的方法有紫外光譜鑒定、多糖的紙色譜鑒定、高效液相色譜法鑒定等。

1.1 乙醇沉淀法：乙醇分級(jí)沉淀是提取多糖的一種普遍方法，其原理是指在混合組分的溶液中加入與該溶液能夠互溶的溶劑，通過(guò)分次加入乙醇使含醇量逐步增高而改變?nèi)軇┑臉O性，從而改變混合液中某些成分的溶解度使其從溶液中析出。一般用乙醇沉淀法提取出的裙帶菜多糖為粗多糖，需要進(jìn)一步純化。由于進(jìn)行沉淀的方法不同，得到的粗多糖中所含有的蛋白質(zhì)的含量不同，若蛋白質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高的話，可用Sevage法去除蛋白。

1.2 超聲波提取法：超聲波提取法是利用超聲波的空化作用、機(jī)械效應(yīng)和熱效應(yīng)等加速胞內(nèi)有效物質(zhì)的擴(kuò)散、釋放和溶解，能夠顯著提高提取效率的方法。超聲波法利用超聲空化中微小氣泡的爆裂而產(chǎn)生的巨大壓力使得植物細(xì)胞壁及整個(gè)生物體的破裂在瞬間完成，大大縮短了破裂時(shí)間。同時(shí)超聲波產(chǎn)生的震動(dòng)作用加強(qiáng)了胞內(nèi)物質(zhì)的釋放、擴(kuò)散和溶解，從而能夠有效的提高提取效率。超聲波提取法通常與其它的方法一同使用從而提高多糖的提取效率［2］，經(jīng)超聲波提取后，冷卻、離心、濃縮、乙醇沉淀、干燥可得到多糖純品。

1.3 柱層析法

1.3.1 離子交換柱層析：離子交換柱層析是根據(jù)帶電的溶質(zhì)分子與離子交換層析介質(zhì)中可交換離子的特性而進(jìn)行的分離純化的一種方式，它主要依賴電荷間的相互作用，利用帶電分子中電荷的微小差異而進(jìn)行分離。其優(yōu)點(diǎn)是分辨率高，工作容量大并且容易操作。提取裙帶菜多糖常用DEAE－52離子交換柱層析，上樣后用蒸餾水和不同濃度的NaCl溶液洗脫，收集洗脫液再繼續(xù)提取洗脫液中的有效成分［3］，常與其它的提取方法合用。

1.3.2 凝膠柱層析：凝膠柱層析法又稱排阻層析或分子篩方法，是按照分子量的大小分離混合物的方法，一般大分子先流出，小分子后流出。層析柱中的填料是某些惰性的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物質(zhì)，多是交聯(lián)的聚糖類物質(zhì)，小分子物質(zhì)可以進(jìn)入其內(nèi)部，而大分子物質(zhì)被排阻在外部，從而造成小分子流下時(shí)的路程長(zhǎng)于大分子，大分子先流出。一般可選用排阻限度略大于樣品中最高分子量物質(zhì)的凝膠，如提取裙帶菜多糖可選用SephadexG－25或G－50，層析過(guò)程中物質(zhì)能夠不同程度的進(jìn)入到凝膠的內(nèi)部最后得到分離。其突出優(yōu)點(diǎn)是采用的凝膠多為惰性的載體，操作條件溫和，可在相當(dāng)廣的溫度范圍下進(jìn)行，不需有機(jī)溶劑，對(duì)高分子物質(zhì)有很好的分離效果。可將離子交換柱層析的洗脫液進(jìn)行凝膠柱層析，有利于有效的分離多糖。

1.4 多糖的純度鑒定

1.4.1 紫外光譜法：多糖在紫外－可見光區(qū)沒有明顯的吸收峰，而雜質(zhì)在紫外區(qū)有較強(qiáng)的吸收，可利用紫外光譜來(lái)檢驗(yàn)其純度。

1.4.2 紙色譜法：用紙作為載體，在紙上均勻的吸附液體固定相（如水或甲酰胺），用與固定相不相溶的溶劑作為流動(dòng)相。將試樣滴在紙的一端，在展開罐中展開，由于各組分在紙上移動(dòng)的距離不同來(lái)鑒定其純度。

1.4.3 高效液相色譜法：高效液相色譜法是多糖純度鑒定中最常用的方法，若進(jìn)樣后產(chǎn)生的色譜峰形單一，對(duì)稱性好則純度較高。

2 裙帶菜多糖的功用研究

2.1 抗腫瘤作用：體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明裙帶菜多糖對(duì)小鼠的腫瘤細(xì)胞有抑制作用。MTT 法觀察體外抗腫瘤作用，培養(yǎng)HepG－2細(xì)胞至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，加入裙帶菜多糖繼續(xù)培養(yǎng)，一段時(shí)間后觀察到腫瘤細(xì)胞凋亡，不同濃度的裙帶菜多糖抑制效果不同。分析體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)結(jié)果，其抗腫瘤的機(jī)制可能為：（1）阻斷腫瘤組織的局部血流而使腫瘤細(xì)胞壞死；（2）增強(qiáng)炎癥部位單核－巨噬細(xì)胞系統(tǒng)活性及NK 細(xì)胞的細(xì)胞毒作用；（3）直接殺傷腫瘤細(xì)胞［3］。

2.2 抗氧化作用：活性氧自由基能夠使不飽和脂肪酸側(cè)鏈產(chǎn)生不飽和烷基自由基，形成的過(guò)氧化物可造成細(xì)胞膜脂質(zhì)過(guò)氧化，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。以POV 法和DPPH 法對(duì)提取物進(jìn)行抗氧化實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明不同溶劑提取物有著不同程度的抗氧化活性，其中裙帶菜石油醚提取物具有很高的抗氧化活性［4］。

2.3 免疫調(diào)節(jié)作用：裙帶菜多糖可以刺激淋巴細(xì)胞的增殖，使淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IL－2的數(shù)量增加。也可以通過(guò)影響淋巴細(xì)胞中CD4＋T／CD8＋T 的比例和NK 細(xì)胞的增殖從而影響機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)功能［5］。

3 展望

裙帶菜在我國(guó)栽培相當(dāng)普遍，裙帶菜多糖在未來(lái)的抗腫瘤領(lǐng)域?qū)⑵鸬讲豢尚∮U的力量，通過(guò)研究裙帶菜的提取工藝和功用能夠?yàn)榇笈可a(chǎn)裙帶菜多糖進(jìn)而投入市場(chǎng)提供理論基礎(chǔ)，具有實(shí)際的意義。

［1］ 鄒向陽(yáng)，王雪，王華新，等.裙帶菜多糖誘導(dǎo)人肝癌HepG－2細(xì)胞凋亡的研究［J］.營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2007，29（5）：470－472

［2］ 譚潔怡，王一飛，錢垂文.超聲波法提取裙帶菜中褐藻多糖硫酸酯的工藝研究［J］.分離與提純，2006，32（1）：115－117

［3］ 王雪，鄒向陽(yáng)，郭蓮英，等.裙帶菜多糖抗腫瘤作用的研究［J］.大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，28（2）：98－100

［4］ 韓華，戰(zhàn)松海，韓彥弢，等.裙帶菜提取物體外抗氧化活性研究［J］.中國(guó)海洋藥物，2007，26（3）：50－52

［5］ 肖紅波，盧向陽(yáng)，孫志良，等.裙帶菜膳食纖維對(duì)小鼠某些免疫功能指標(biāo)的影響［J］.食品科學(xué)，2007，28（4）：324－326