檢測(cè)梅毒的四種方法臨床應(yīng)用比較

曲惠青 周曉生 周肖龍 王 健

1.濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院輸血科，山東濱州 256603；2.濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，山東濱州 256603；3.濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥學(xué)部，山東濱州 256603；4.濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東濱州 256603

梅毒螺旋體又稱蒼白密螺旋體，是引起人類梅毒的病原體，它只感染人類，梅毒主要通過性、血液和母嬰垂直傳播，也可以通過哺乳及意外受染，具非常高的傳染性[1]。梅毒患者是該病的惟一傳染源，早期梅毒有較強(qiáng)的傳染性，早發(fā)現(xiàn)通過有效治療可以控制感染，減少對(duì)患者身體的損害，避免該病的傳播。目前檢測(cè)梅毒的實(shí)驗(yàn)室方法主要有五類，即病原體的檢測(cè)、梅毒血清學(xué)檢測(cè)、分子生物學(xué)梅毒檢測(cè)、梅毒螺旋體IgM抗體檢測(cè)、腦脊液檢測(cè)。其中梅毒血清學(xué)檢測(cè)在目前醫(yī)院應(yīng)用最為廣泛，主要包括梅毒螺旋體抗體顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA）、梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（TP-ELISA）、快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片實(shí)驗(yàn)（RPR）、甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）、膠體金快速檢測(cè)試驗(yàn)（SYP）、不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)（USR）等。但無論哪一種方法都無法做到早期、準(zhǔn)確、迅速、簡(jiǎn)便而且經(jīng)濟(jì)的檢測(cè)出梅毒感染。本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)將對(duì)應(yīng)用較廣的其中四種梅毒檢測(cè)方法的敏感度進(jìn)行比較，探討四種方法的臨床應(yīng)用價(jià)值，從而選擇一種適合醫(yī)院梅毒檢測(cè)的模式。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 第一組實(shí)驗(yàn) 所有標(biāo)本來自濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院門診2012年10月～2013年5月間確診為梅毒的患者，共135例。其中一期梅毒46例，二期梅毒39例，三期梅毒5例，潛伏梅毒45例，梅毒的診斷和分期標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)中華人民共和國(guó)梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則。正常對(duì)照組60份血清來自濱州市中心血站的合格獻(xiàn)血人員。用TP-ELISA、TPPA、RPR、SYP四種方法分別檢測(cè)。

1.1.2 第二組實(shí)驗(yàn) 所有標(biāo)本來自2012年10月～2013年5月間濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院住院患者術(shù)前或輸血前抽取血樣32066份。再用TPPA、RPR、SYP法分別檢測(cè)。

1.2 標(biāo)本采集

靜脈血3mL，室溫靜置1h，3000r/min離心3min分離血清待檢。

1.3 試劑

梅毒螺旋體特異抗體顆粒凝集法（TPPA），日本富士瑞必歐株式會(huì)社試劑；梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（TP-ELISA），英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司試劑；快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片實(shí)驗(yàn)（RPR），上?？迫A生物工程股份有限公司試劑；膠體金快速檢測(cè)試驗(yàn)（SYP），英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司試劑。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

軟件為瑞美檢驗(yàn)中文報(bào)告系統(tǒng)，上海瑞美電腦科技有限公司。采用SAS8.2統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 第一組試驗(yàn)結(jié)果

將135例臨床確診梅毒患者血清分別用四種方法檢測(cè)，結(jié)果見表1。從表1可以看出，在正常對(duì)照組中，60例正常獻(xiàn)血員的血清通過用ELISA、TPPA、RPR、SYP法分別檢測(cè)，沒有假陽性。一期梅毒檢測(cè)四種方法中，ELISA、TPPA結(jié)果一致，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明ELISA、TPPA和RPR、SYP三組方法之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），即一期梅毒檢測(cè)ELISA、TPPA敏感度最高，RPR最低，SYP居中。二期梅毒患者39例，ELISA、TPPA、RPR、SYP法檢測(cè)結(jié)果均為陽性，陽性率為100%。三期梅毒患者5例，ELISA、TPPA、SYP法檢測(cè)均為陽性，陽性率為100%，RPR、法檢測(cè)3例為陽性，陽性率60%。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明ELISA、TPPA、SYP和RPR間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），即對(duì)三期梅毒檢測(cè)，ELISA、TPPA、SYP敏感度高于RPR。潛伏梅毒患者45例，ELISA、TPPA全部檢出，陽性率100%，RPR、SYP分別檢出30例、41例，ELISA、TPPA和RPR、SYP之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），即潛伏梅毒檢測(cè)，ELISA、TPPA敏感度最高，SYP次之，RPR最低。綜上可見，TPPA、ELISA敏感度為98.78%，與文獻(xiàn)報(bào)道的96.15%[2]、99%[3]接近，SYP敏感度是91.11%，低于文獻(xiàn)報(bào)道的97%[4]，RPR法的敏感度為78.52%、高于文獻(xiàn)報(bào)道的75%[3]。TPPA、ELISA和SYP、RPR間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），即TPPA、ELISA敏感度最高，SYP次之，RPR最低。

表1 135例不同分期的梅毒患者血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果[n（%）]

2.2 第二組試驗(yàn)結(jié)果

所有標(biāo)本來自2012年10月～2013年5月間我院住院患者術(shù)前或輸血前抽取血樣32 066份。先用TP-ELISA法檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)陽性266例，陽性率0.83%，然后采用TPPA、RPR、SYP法分別檢測(cè)。見表2。從表2可以看出，266例ELISA陽性標(biāo)本分別用TPPA、RPR、SYP法檢測(cè)，陽性率分別是85%、69%、79%。它們彼此間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），即TPPA最高，SYP次之，RPR最低。

表2 用TPPA、RPR、SYP法檢測(cè)266例ELISA陽性標(biāo)本結(jié)果[n（%）]

3 討論

近年來我國(guó)梅毒的發(fā)病率呈快速上升趨勢(shì)，國(guó)外經(jīng)驗(yàn)表明，健全的傳染病防治制度、合理的梅毒篩檢、科學(xué)的產(chǎn)前保健以及對(duì)妊娠梅毒規(guī)范的治療，可以防止90%以上的先天性梅毒的發(fā)生[5]。人體感染梅毒螺旋體4～8周后，血液中可產(chǎn)生兩種抗體，首先產(chǎn)生的是梅毒螺旋體特異性抗體，檢測(cè)這類抗體的試驗(yàn)稱為梅毒螺旋體血清試驗(yàn)，被作為確認(rèn)試驗(yàn)，如TPPA、TP-ELISA、SYP等。然后產(chǎn)生非梅毒螺旋體特異性抗體，是梅毒螺旋體在破壞時(shí)釋放的抗原性物質(zhì)刺激機(jī)體產(chǎn)生的有抗體性質(zhì)反應(yīng)素，檢測(cè)這類抗體的試驗(yàn)稱為非梅毒螺旋體血清試驗(yàn)，被作為初篩試驗(yàn)，如RPR、TRUST等。

本TPPA是將提純的梅毒螺旋體抗原，包被在人工載體明膠顆粒上，檢測(cè)血清中的梅毒螺旋體抗體，該試劑穩(wěn)定，批間差小，靈敏度高，特異性強(qiáng)，而且可以進(jìn)行效價(jià)測(cè)定。TPPA是目前國(guó)內(nèi)外公認(rèn)的梅毒確認(rèn)試驗(yàn)，但該方法也有一定的局限性，如窗口期問題。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[6]，TPPA在一般人群中有0.1%的假陽性，如免疫性疾病、結(jié)腸癌、妊娠、海洛因成癮等，70歲以上老年人有1%出現(xiàn)假陽性。TPPA法檢測(cè)的是IgM和IgG的混合體，梅毒患者治愈后，IgG抗體消失，TPPA檢測(cè)相當(dāng)長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)甚至終身都是陽性。TPPA試劑成本高，依賴進(jìn)口，操作繁瑣，耗時(shí)較長(zhǎng)（至少2h）不適合大量標(biāo)本的檢測(cè)，而且是用肉眼判斷結(jié)果，主觀干擾因素多，實(shí)驗(yàn)結(jié)果不易保存。

ELISA法檢測(cè)135例梅毒患者和TPPA法結(jié)果完全一樣，有較高的陽性率和敏感度。TP-ELISA法是近年來應(yīng)用TP基因工程研制成功而建立的方法，制備的重組多肽抗原代替了以前使用的野生型梅毒螺旋體抗原后，抗原純度提高，提高了試驗(yàn)的敏感性和特異性[7-8]。ELISA法可以在全自動(dòng)酶免儀上大量檢測(cè)，有較好的重復(fù)性，結(jié)果易于保留和標(biāo)準(zhǔn)化管理，對(duì)各期梅毒的檢出率都較高，并且適合室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評(píng)的要求，因此目前血站、醫(yī)院應(yīng)用最為廣泛，可以作為梅毒血清學(xué)檢測(cè)的首選方法[9]。ELISA法檢測(cè)和TPPA法都是檢測(cè)IgM和IgG的混合體，也存在類似的缺陷，陽性結(jié)果只能說明正在感染或者過去感染，不能判斷梅毒疾病活動(dòng)與否，故不能作為療效檢測(cè)手段。ELISA可應(yīng)用于自動(dòng)化檢測(cè)系統(tǒng)，便于室間和室內(nèi)質(zhì)控，而且價(jià)格適中，便于操作，是目前篩查和檢測(cè)梅毒的一種良好方法。

RPR試驗(yàn)對(duì)梅毒一期、三期和潛伏梅毒的敏感度較低，與文獻(xiàn)報(bào)道[10]的RPR試驗(yàn)一期梅毒敏感度是75%～86%基本一致。但對(duì)RPR試驗(yàn)二期梅毒的敏感度較高。RPR試驗(yàn)操作簡(jiǎn)單、快速，而且抗類脂質(zhì)抗體消長(zhǎng)曲線與梅毒患者的臨床癥狀相關(guān)性較好，試驗(yàn)所得抗類脂質(zhì)抗體效價(jià)隨病情的變化常與梅毒的活動(dòng)性平衡[11]。

SYP試驗(yàn)是近年發(fā)展的一種新的免疫檢驗(yàn)技術(shù)，具有快捷、簡(jiǎn)便和準(zhǔn)確的特點(diǎn)。該試驗(yàn)應(yīng)用現(xiàn)代生物工程技術(shù)制備的高度純化單克隆梅毒螺旋體的基因工程抗原，能選擇尋找可以相結(jié)合的抗體。但抗體含量過高或過低時(shí)，容易出現(xiàn)假陰性。SYP法既可以批量檢測(cè)，也可少量檢測(cè)，除了對(duì)梅毒的初染階段和先天性梅毒敏感性較低以外，對(duì)其他階段的患者均有較高的敏感性和特異性[12]。

本研究表明，TPPA法適用于其他方法檢測(cè)陽性后再進(jìn)行確診試驗(yàn)，或者工作量較小的醫(yī)療機(jī)構(gòu)；RPR適合基層醫(yī)院的梅毒篩查和對(duì)治療療效的評(píng)價(jià)；TP-ELISA法適合工作量較大的醫(yī)療機(jī)構(gòu)進(jìn)行初篩檢驗(yàn)；SYP法適用于基層醫(yī)院或急癥檢測(cè)，但檢測(cè)后應(yīng)用其他方法進(jìn)行復(fù)檢。

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