潘五九 肖 雪 孟慶杰 王偉明

（黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院·哈爾濱 150036）

安腦分散片是在古方安宮牛黃丸基礎(chǔ)上，添加了赭石、石膏等藥，按中醫(yī)理論重新組方研制而成，臨床上主要用于治療高熱急癥，如高熱驚厥、腦卒中、煩躁譫語、畜痙劂中風(fēng)竅閉及昏迷病等。由于處方中同時包含黃芩和黃連兩味藥物，黃芩中黃芩苷和黃連中黃芩苷易形成難溶于水的鹽或分子復(fù)合物而析出，故黃芩考慮單提[1]。本研究采用正交試驗(yàn)法，選擇黃芩苷提取率和總固體得率作為正交試驗(yàn)指標(biāo)，進(jìn)行安腦分散片提取工藝的研究，為生產(chǎn)提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilen 1100高效液相色譜儀(DAD檢測器)；BP211D型電子天平(Sartorim公司)；Diamonsil鉆石C18色譜柱(200mm×4.6mm，5μm)；KQ-300DB型數(shù)控超聲儀（昆明市超聲儀器有限公司）；黃芩苷對照品(購自中國生物制品檢定所。批號：110715-201117)；黃芩藥材（購于安徽滬潐中藥飲片公司，經(jīng)檢定符合中國藥典2010版要求)；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純（均購于美國迪馬公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 黃芩苷提取率與總固體得率的測定

2.1.1 色譜條件[2]黃芩苷色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水-磷酸（47：53：0.2）為流動相；檢測波長為280nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計算應(yīng)不低于2500。

2.1.2 對照品溶液的制備 取在60℃減壓干燥4小時的黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成為1ml含60μg的溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液的制備 取黃芩藥材粉末（過三號篩）約0.3g，精密稱定，加70%乙醇40ml，加熱回流3小時，放冷，濾過，濾液置100ml量瓶中，用少量70%分次洗滌容器和殘渣，濾液濾入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻。精密量取1ml，至10ml量瓶中，加甲醇至刻度中，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品1備用。

稱取黃芩藥材100g，按L9(34)試驗(yàn)列號各條件分別回流提取、濾過，測量提取液總體積取后，吸取1ml，用流動相定容到10ml，作為供試品2備用。

2.1.4 提取率測定 分別精密吸取對照品溶液與供試品1、2溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定吸收峰峰面積，外標(biāo)一點(diǎn)法分別計算供試品1、2中黃芩苷的含量，再將供試品1黃芩苷含量折算成藥材中黃芩苷總量；供試品2黃芩苷含量折算成提取液中黃芩苷總量。

提取率=提取液中黃芩苷總量/藥材中黃芩苷總量×100%。

2.1.5 總固體得率測定 將提取液用水浴蒸干，置105℃烘箱中，干燥3h，取出置干燥器中冷卻0.5h，置105℃烘箱中，干燥1h，至恒重。稱量每個實(shí)驗(yàn)號下所得恒重藥膏的質(zhì)量，比上100g藥材質(zhì)量，即得。

2.2 提取溶劑的選擇 參照中國藥典2010年版一部黃芩提取物項(xiàng)下，故我們選擇水作為提取溶劑。

2.3 水煎煮提取條件的優(yōu)化

根據(jù)方中藥物的性質(zhì)、現(xiàn)代藥理學(xué)研究結(jié)果和《中國藥典》中黃芩藥材的質(zhì)量控制指標(biāo)，以測定總固體得率和黃芩苷提取率為指標(biāo)，用正交試驗(yàn)優(yōu)選處方中藥材的提取工藝條件。

2.3.1 正交試驗(yàn)設(shè)計 根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，選取影響提取效果的因素和水平，試驗(yàn)方案見表1。

表1 試驗(yàn)因素水平表

2.3.2 試驗(yàn)數(shù)據(jù)見表2，方差分析見表3。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 方差分析結(jié)果

2.3.2 結(jié)果分析 由直觀分析可知較優(yōu)的提取工藝是A3B3C3。從方差分析結(jié)果可知，加水量對提取效果差異有顯著性，提取次數(shù)、提取時問對提取效果無顯著性，比較各因素的極差值可以看，影響提取效果的因素順序?yàn)锳＞C＞B。根據(jù)上述正交試驗(yàn)結(jié)果，結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際節(jié)能降耗的需要，我們確定藥材較優(yōu)的提取工藝條件為A3B1C2。即加水量為10倍量，每次1h，提取2次。

2.3.3 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 分別按處方量稱取藥材，按較優(yōu)工藝A3B1C2提取，并測定黃芩苷提取率和總固體得率。經(jīng)驗(yàn)證，此工藝條件下黃芩苷提取率為81.42%,總固體得率24.19%。說明此提取工藝合理、可行、穩(wěn)定，可應(yīng)用與工業(yè)生產(chǎn)。

3 討論

黃芩作為安腦分散片中的主藥，其主要活性成分為黃芩苷。黃芩苷溶于熱水

中國藥典2010年版一部提取物項(xiàng)下，收錄了黃芩提取物，其中對于黃芩的提取采用水煮法，但其對于提取中涉及加水量、提取時間、提取次數(shù)均未明確具體參數(shù)，本試驗(yàn)采用正交試驗(yàn)設(shè)計對上述參數(shù)進(jìn)行研究，以優(yōu)化提取工藝參數(shù)，為按腦分散片的工業(yè)化生產(chǎn)提供依據(jù)。指標(biāo)的選擇上，黃芩苷提取的轉(zhuǎn)移率是評價參數(shù)是否適合的重要指標(biāo)，故將其作為評價指標(biāo)之一，另中藥提取物的總固體是其發(fā)揮療效的物質(zhì)基礎(chǔ)，所以本實(shí)驗(yàn)也將其作為考察提取工藝優(yōu)劣的指標(biāo)之一。將上述指標(biāo)根據(jù)其重要性，按一定權(quán)重系數(shù)折算計算綜合評分，作為最終評價指標(biāo)。

本試驗(yàn)對安腦分散片中黃芩水提工藝進(jìn)行了系統(tǒng)研究，最終工藝的確定是在分析正交試驗(yàn)設(shè)計試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)中節(jié)能、縮短生產(chǎn)周期、生產(chǎn)流程簡便等需要，綜合考慮最終建立了適于工業(yè)生產(chǎn)、操作簡捷、合理的提取工藝，這為安腦分散片提供了一種生產(chǎn)周期短、生產(chǎn)成本較低、操作簡便、且無需增加企業(yè)設(shè)備投資的工藝參考。

[1] 秦延訊，郭春景.黃連在復(fù)方中藥制劑提取中應(yīng)該注意的問題[J].光明中醫(yī)，2008，5（5）：595-596.

[2] 國家藥典委員會．中華人民共和國藥典2010年版一部[S]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：1．