石恩慧 郭凱軍 李 紅 谷明燦 魯 琳＊＊ 賈昌喜＊＊

(1.北京農(nóng)學(xué)院食品科學(xué)與工程學(xué)院，北京 102206;2.農(nóng)產(chǎn)品有害微生物及農(nóng)殘安全檢測(cè)與控制北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 102206;3.北京農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，北京 102206)

近年來(lái)，氧化應(yīng)激給動(dòng)物細(xì)胞和組織帶來(lái)的危害成為人們關(guān)注的熱點(diǎn)，其機(jī)制是氧分子失去了外圍電子形成的自由基會(huì)奪取其他細(xì)胞分子的外圍電子，使自身保持穩(wěn)定，造成一種連鎖反應(yīng)，使機(jī)體組織細(xì)胞分子受到損害。因此，研究天然抗氧化物，從根本上預(yù)防自由基氧化損傷迫在眉睫。

植物多酚作為新型飼料添加劑成為國(guó)內(nèi)外動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)界的一個(gè)研究熱點(diǎn)。植物多酚是廣泛存在于植物體內(nèi)的天然產(chǎn)物，是植物的次生代謝產(chǎn)物，具有獨(dú)特的生理活性和藥用價(jià)值［1］，多酚具有較強(qiáng)的清除自由基、抗氧化活性、抗衰老等生物活性功能［2－6］。研究表明，板栗果仁、花、葉子和果實(shí)中提取物具有很強(qiáng)的抗氧化能力［7］。主要成份為植物多酚的歐洲屬栗樹(shù)提取物可以顯著增加過(guò)瘤胃蛋白質(zhì)的比例，減少奶牛瘤胃中氨氣的產(chǎn)生，同時(shí)也減少了飼料中非蛋白氮(NPN)和干物質(zhì)的損失［8］。在肉仔雞飼糧中加入栗樹(shù)提取物可以明顯提高肉仔雞的日增重和日采食量，同時(shí)糞便中氮的排放減少了 25% 以上［9］。Zoccarato 等［10］報(bào)道，用栗樹(shù)提取物替代抗生素可以顯著降低肉兔的死亡率。Liu等［11］報(bào)道，添加栗樹(shù)提取物能夠提高肉兔生長(zhǎng)性能，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力，但不影響兔肉品質(zhì)。

我國(guó)對(duì)于板栗產(chǎn)業(yè)副產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)集中于板栗殼和板栗總苞，焦啟揚(yáng)等［12］和張琳等［13］發(fā)現(xiàn)，板栗殼和板栗總苞的主要成分是以沒(méi)食子酸、鞣花酸為主的植物多酚。李金鳳等［14］和魯曉翔等［15］報(bào)道了板栗殼多酚的體外抗氧化能力;焦啟揚(yáng)等［12］研究表明，板栗總苞提取物對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌及藤黃微球菌均有不同程度的抑制活性;黃宏妙等［16］研究表明，板栗總苞水提液可降低自由基代謝造成的機(jī)體損傷，表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗氧化能力。但關(guān)于將板栗總苞或板栗殼用作飼料添加劑的報(bào)道較少［17］。本研究以最大化的板栗總苞多酚提取得率為目標(biāo)，確定水浴溶劑法提取板栗總苞多酚的最優(yōu)提取工藝條件;并通過(guò)檢測(cè)板栗總苞多酚對(duì)二苯代苦味?；杂苫?DPPH·)和2，2’－連氮－雙 －(3－乙基苯并噻唑啉 －6－磺酸)自由基(ABTS+·)清除率以及豬油過(guò)氧化值(POV)的影響，研究板栗總苞多酚的體外抗氧化能力，為板栗總苞多酚作為抗氧化飼料添加劑的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與主要試劑

板栗總苞(采自北京市懷柔區(qū)板栗實(shí)驗(yàn)站):用粉碎機(jī)將板栗殼粉碎并過(guò)80目篩，－18℃避光保存?zhèn)溆谩?/p>

主要試劑:福林－酚(FC)試劑、沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品(含量 ＞98%)和 DPPH購(gòu)于 Sigma公司;ABTS購(gòu)于東京化成工業(yè)株式會(huì)社;維生素C和維生素E購(gòu)于北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.2 板栗總苞多酚提取工藝流程

干燥板栗總苞→粉碎→溶劑與物料混合→不同條件下水浴提取(每個(gè)樣提取2次)→混合2次提取液→離心→濃縮→板栗總苞多酚提取液→冷凍干燥→提取物粉末。

1.3 板栗總苞多酚提取條件的研究

1.3.1 單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)

稱(chēng)取10 g板栗總苞，用乙醇濃度為60%，液料比為20∶1(mL∶g)，提取溫度為60 ℃，提取時(shí)間為120 min作為進(jìn)行單因素篩選試驗(yàn)的基礎(chǔ)條件。當(dāng)研究某一因素時(shí)，其他條件保持不變。乙醇濃度分別選用20%、30%、40%、50%、60%和70%;液料比(mL∶g)分別選用 15∶1、20∶1、25∶1、30∶1 和35∶1;提 取 時(shí) 間 分 別 選 用 40、80、120、160 和200 min;提取溫度分別選用 50、60、70、80 和90℃，按上述設(shè)計(jì)分別進(jìn)行單因素不同水平的選擇試驗(yàn)，得到的提取物按照標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)處理方法，測(cè)定在765 nm波長(zhǎng)處的吸光度，并計(jì)算轉(zhuǎn)換為板栗總苞多酚提取得率，以此比較提取效果。

1.3.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

為了綜合考慮各因素對(duì)板栗總苞多酚提取得率的影響，根據(jù)1.3.1中單因素試驗(yàn)結(jié)果，選取乙醇濃度、液料比、提取時(shí)間和提取溫度為4個(gè)考察因素，利用 SPSS 16.0設(shè)計(jì)四因素四水平［L16(44)］正交試驗(yàn)，試驗(yàn)因素水平見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)因素水平Table 1 Factors and levels of this experiment

1.3.3 板栗總苞多酚的測(cè)定

1.3.3.1 沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作

準(zhǔn)確稱(chēng)取5 mg沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品于50 mL容量瓶中，定容至刻度，配成0.1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液，分別吸取 0.5、1.0、1.5、2.0 和 2.5 mL 沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)液(0.1 mg/mL)并定容至10 mL，配制成質(zhì)量濃度為 0.005、0.010、0.015、0.020、0.025 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。精確吸取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液0.4 mL于10 mL離心管中，加入0.2 mol/L FC試劑1 mL、15%Na2CO3溶液2 mL，蒸餾水定容至 8 mL，25℃反應(yīng)2 h。另精確吸取蒸餾水0.4 mL，同法操作作為空白對(duì)照。在765 nm波長(zhǎng)處測(cè)量其吸光度。繪制吸光度與濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)(圖1)，并擬合線(xiàn)性回歸方程。

圖1 沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)Fig.1 Standard curve of gallic acid

所得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的線(xiàn)性回歸方程為:

式中:Y為吸光度;X為沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL)。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)表明，沒(méi)食子酸在濃度為0.005～0.030 mg/mL區(qū)間有良好的線(xiàn)性關(guān)系。1.3.3.2 板栗總苞多酚提取得率、多酚含量計(jì)算

按照以下公式計(jì)算板栗總苞多酚提取得率、多酚含量:

提取得率(%)=提取物質(zhì)量/原材料質(zhì)量×100;

多酚含量(%)=提取多酚質(zhì)量/提取物質(zhì)量×100。

1.4 板栗總苞多酚體外抗氧化試驗(yàn)

1.4.1 樣品處理

板栗總苞多酚和維生素C母液的配制:分別精確稱(chēng)取0.5 g板栗總苞多酚和維生素C粉末放于燒杯中，加蒸餾水溶解，將此溶液轉(zhuǎn)移到500 mL的容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，配成終濃度為1 mg/mL的母液;維生素E母液的配制:精確稱(chēng)取0.5 g維生素E粉末于燒杯中，加體積比為10%的乙醇水溶液20 mL，振蕩使之溶解，轉(zhuǎn)移到500 mL容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，配成終濃度為1 mg/mL的母液。

1.4.2 DPPH·清除率測(cè)定

參考Luo等［18］的方法，同時(shí)作適當(dāng)修改。取板栗總苞多酚、維生素C和維生素E母液，分別稀釋成 不 同 濃 度 (0.025、0.050、0.075、0.100、0.125、0.150、0.175 和 0.200 mg/mL) 的溶液。吸取不同濃度的板栗總苞多酚、維生素C和維生素 E 溶液 2.0 mL，加入 2.0 mL DPPH·溶液(0.2 mmol/L)，搖勻，避光放置 30 min。以無(wú)水乙醇調(diào)零，測(cè)定517 nm波長(zhǎng)處的吸光度(A樣);分別測(cè)定2.0 mL不同濃度的板栗總苞多酚、維生素C和維生素E溶液與2.0 mL無(wú)水乙醇混合液的吸光度作為對(duì)照(A對(duì)照);測(cè)定2.0 mL DPPH·溶液與2.0 mL無(wú)水乙醇混合液的吸光度作為空白(A空白)。DPPH·清除率按以下公式計(jì)算:

1.4.3 ABTS+·清除率測(cè)定

參考Re等［19］的方法，同時(shí)作適當(dāng)修改。取板栗總苞多酚、維生素C和維生素E母液，分別稀釋成不同濃度(0.050、0.100、0.150、0.250、0.300、0.400、0.450 和 0.500mg/mL) 的 溶 液。ABTS+·儲(chǔ)備液配制:配制2.45 mmol/L過(guò)硫酸鉀，用過(guò)硫酸鉀溶解ABTS粉末，配成7 mmol/L ABTS+·儲(chǔ)備液，避光、4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩BTS+·測(cè)定液配制:將ABTS+·儲(chǔ)備液以磷酸鹽緩沖液(10 mmol/L，pH 7.4)稀釋?zhuān)蛊湮舛仍?34 nm波長(zhǎng)處達(dá)到(0.700±0.020)。測(cè)定方法:取4 mL ABTS+·測(cè)定液，加入40 μL不同濃度的板栗總苞多酚、維生素C和維生素E溶液，振蕩30 s，反應(yīng)10 min，在734 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度(A樣)。ABTS+·清除率按以下公式計(jì)算:

1.4.4 豬油 POV 測(cè)定

取板栗總苞多酚母液，分別稀釋成濃度為0(對(duì)照組)、50、100、150 和 200 μg/mL 的板栗總苞多酚溶液，各取4 mL，分別添加到盛有4 g豬油的燒杯中，混勻，放于60℃烘箱里［20］，每個(gè)濃度做3個(gè)平行試驗(yàn)，分別在 0、4、8、12、16 和 20d 時(shí)，參考GB/T 5538—2005方法測(cè)定豬油中POV。從結(jié)果中選取板栗總苞多酚最佳濃度，然后，以同樣的方法和測(cè)定時(shí)間，測(cè)定板栗總苞多酚和維生素C、維生素E在此濃度下對(duì)豬油中POV的影響。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

正交試驗(yàn)L16(44)由SPSS 16.0軟件生成，采用GLM程序?qū)φ辉囼?yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析，并確定提取工藝條件最優(yōu)化組合。采用ANOVA程序?qū)Π謇蹩偘喾优c維生素C、維生素E抗氧化性進(jìn)行分析并用Turkey進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果與分析

由表2可知，隨著乙醇濃度增大，板栗總苞多酚提取得率呈現(xiàn)先增加后降低趨勢(shì)，當(dāng)乙醇濃度達(dá)到40%時(shí)，提取得率達(dá)到最大，此后隨乙醇濃度的增大，提取得率逐漸減小，由此，初步選定的乙醇濃度為30%;隨著液料比增加，板栗總苞多酚提取得率呈現(xiàn)先增加后趨于水平，液料比在30∶1(mL∶g)以后，提取得率趨于水平，考慮材料的節(jié)省，初步選用液料比為20∶1(mL∶g);隨著提取溫度的上升，板栗總苞多酚提取得率呈現(xiàn)先上升后降低的趨勢(shì)，到80℃時(shí)，提取得率達(dá)到最大，因此，初步選用的溫度為80℃;隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，板栗總苞多酚提取得率先增加后趨于穩(wěn)定，考慮到實(shí)際生產(chǎn)中操作時(shí)間過(guò)長(zhǎng)也會(huì)提高成本，浪費(fèi)能源，因此，初步選用的提取時(shí)間為160 min。

表2 單因素試驗(yàn)結(jié)果Table 2 The results of single factor test

2.2 正交試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.2.1 正交試驗(yàn)結(jié)果及其方差分析和最優(yōu)條件分析

表3給出正交試驗(yàn)的結(jié)果，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行了方差分析，由表4可知，校正模型達(dá)到極顯著水平(P＜0.01)，說(shuō)明模型擬合程度良好，誤差小，模型是合適的;校正模型的相關(guān)系數(shù)R2=0.992，校正決定系數(shù)R2

adj=0.960，說(shuō)明試驗(yàn)方法可靠，能較好地描述試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)真實(shí)試驗(yàn)點(diǎn)的分析是可行的。根據(jù)四因素P值的大小可知，提取溫度(D)、乙醇濃度(A)和液料比(B)對(duì)板栗總苞多酚提取得率有顯著或極顯著影響(P＜0.05或 P＜0.01)，提取時(shí)間(C)無(wú)顯著影響(P＞0.05)，因此，影響因素主次順序?yàn)?D＞A＞B＞C。

表5顯示了各因素不同水平的板栗總苞多酚提取得率，從結(jié)果直觀分析，各因素水平對(duì)板栗總苞多酚提取得率影響的強(qiáng)弱順序是:A30＞A40＞A50＞ A20，B18∶1＞ B21∶1＞ B24∶1＞ B15∶1，C140＞ C110＞C170＞C80，D80＞D60＞D70＞D90，因此確定板栗總苞多酚最優(yōu)提取工藝為:A30B18∶1C140D80，即乙醇濃度 30%，液料比 18∶1(mL∶g)，提取時(shí)間 140 min，提取溫度80℃。

2.2.2 板栗總苞多酚提取得率和多酚含量

取10 g板栗總苞粉末，按上述正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)得出的最佳工藝條件提取2次，濃縮、冷凍干燥得到板栗總苞多酚粉末。稱(chēng)取部分板栗總苞多酚粉末，用蒸餾水溶解，定容、檢測(cè)吸光度，并換算得到板栗總苞多酚提取得率和多酚含量。計(jì)算出本試驗(yàn)條件下板栗總苞多酚提取得率為22.61%，其中多酚含量為51.23%

2.3 板栗總苞多酚體外抗氧化性

2.3.1 板栗總苞多酚對(duì)DPPH·清除能力的影響

由圖 2可知，在 0.003～0.025 mg/mL 范圍內(nèi)，隨著板栗總苞多酚和維生素C溶液濃度的增加，DPPH·清除率增加，并具有一定線(xiàn)性關(guān)系，線(xiàn)性方程分別為 Y=3 279.3X+10.5(R2=0.987 0)和 Y=3 214X+18.262(R2=0.938 8)，當(dāng)濃度達(dá)到0.025 mg/mL后，DPPH·清除率趨于穩(wěn)定;隨著維生素E溶液濃度增加，DPPH·清除率不斷增加并具有一定線(xiàn)性關(guān)系，線(xiàn)性方程為Y=107.99X+8.908 3(R2=0.952 3)。DPPH·清除能力的大小常用半清除率(EC50)表示，EC50是當(dāng)清除率達(dá)到50%時(shí)所需要的抗氧化劑濃度，因此，本試驗(yàn)中板栗總苞多酚、維生素C和維生素E的EC50分別為 0.012 0、0.009 7 和 0.381 0 mg/mL，EC50越小，清除DPPH·的能力越大，則其抗氧化能力就越強(qiáng)，由此得出，板栗總苞多酚的抗氧化能力與維生素C相當(dāng)，且兩者的抗氧化能力均優(yōu)于維生素E，所以板栗總苞多酚有較強(qiáng)的抗氧化能力。

表3 正交試驗(yàn)［L16(44)］結(jié)果Table 3 The results of orthogonal test［L16(44)］

表4 正交試驗(yàn)結(jié)果的方差分析Table 4 Analysis of variance for results of orthogonal test

2.3.2 板栗總苞多酚對(duì) ABTS+·清除能力的影響

ABTS經(jīng)過(guò)氧化生成穩(wěn)定的藍(lán)綠色的ABTS+·，當(dāng)有抗氧化物后，其與ABTS+·反應(yīng)使反應(yīng)體系褪色。由圖3可知，板栗總苞多酚、維生素C和維生素E對(duì)ABTS+·的清除能力隨板栗總苞多酚、維生素C和維生素E溶液濃度的增大而增大，維生素 E很快達(dá)到平衡，在0～0.200 mg/mL之間它們的清除自由基的能力都具有一定的線(xiàn)性關(guān)系，線(xiàn)性方程分別為Y=349.41X+9.520 4(R2=0.995 2)，Y=336.39X+3.837 9(R2=0.977 5) 和 Y=61.048X+8.688 8(R2=0.983 8)，它們的 EC50分別為 0.116 0、0.137 0和0.676 7 mg/mL，所以，板栗總苞多酚對(duì)ABTS+·的清除能力優(yōu)于維生素C和維生素E。由此可知，板栗總苞多酚對(duì)ABTS+·有很好的清除能力。

表5 最優(yōu)條件分析Table 5 Analysis of optimal conditions

圖2 清除DPPH·效果Fig.2 Scavenging effects on DPPH·

2.3.3 板栗總苞多酚對(duì)豬油POV的影響

由圖4可知，經(jīng)過(guò)20d的60℃加熱強(qiáng)化氧化作用，對(duì)照組(0 μg/mg)豬油的POV迅速增大，而添加板栗總苞多酚組的POV顯著小于對(duì)照組(P＜0.05)，由此說(shuō)明板栗總苞多酚對(duì)豬油有良好的抗氧化效果，且抗氧化作用與板栗總苞多酚溶液濃度有關(guān)，隨著濃度的增加，板栗總苞多酚的抗氧化性能逐漸升高，濃度在0～100 μg/mg之間板栗總苞多酚的抗氧化性能變化顯著(P＜0.05)，而濃度在100～200 μg/mg之間，抗氧化性能變化不顯著(P ＞0.05)，所以，選 100 μg/mg 作為板栗總苞多酚對(duì)豬油抗氧化的最佳濃度，此濃度下板栗總苞多酚的抗氧化效果與同濃度的維生素C相當(dāng)，且二者均優(yōu)于同濃度的維生素E(圖5)。因此，板栗總苞多酚能很好地抑制動(dòng)物油POV的升高。

圖3 清除ABTS+·的效果Fig.3 Scavenging effects on ABTS+·

圖4 不同板栗總苞多酚濃度對(duì)豬油POV的影響Fig.4 Effects ofdifferent cocentrations of polyphenols in Castanea mollissima Blume on POV

圖5 不同抗氧化劑對(duì)豬油POV的影響Fig.5 Effects ofdifferent antioxidants on POV

3 討論

3.1 板栗總苞多酚提取工藝的優(yōu)化

李金鳳等［14］采用水浴法浸提板栗殼多酚，得到的最佳提取條件為:乙醇濃度59.7%，液料比18∶1(mL∶g)，浸提溫度 52.6 ℃，浸提次數(shù) 3 次。在此最優(yōu)工藝條件下板栗殼多酚提取得率7.59%。魯曉翔等［15］采用水浴振蕩法優(yōu)化板栗殼多酚的提取工藝，最終確定最優(yōu)提取條件為:乙醇濃度30%，液料比23∶1(mL∶g)，并在 70℃水浴條件下振蕩提取170 min。在此條件下，板栗殼多酚提取得率7.9%。以上板栗殼多酚提取得率都低于本研究板栗總苞多酚提取得率，出現(xiàn)這樣結(jié)果的原因可能是板栗總苞中多酚含量高于板栗殼中的多酚含量。焦啟揚(yáng)等［12］和張琳等［13］分離并鑒定板栗總苞乙醇提取物的化學(xué)成分，并鑒定化合物結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)板栗總苞提取物有沒(méi)食子酸、鞣花酸、莽草酸、槲皮素、原兒茶素、齊墩果酸、烏索酸等多種多酚成分，并具有抗糖尿病作用。杜運(yùn)平等［21］采用醇水溶液為提取劑提取板栗苞多酚，優(yōu)化工藝為:40%的乙醇濃度，液料比為 20∶1(mL∶g)，在80℃提取條件下提取120 min，在此條件下，多酚含量為49.83%，與本研究提取方法［乙醇濃度為30%，液料比為18∶1(mL∶g)，提取時(shí)間為140 min，提取溫度為80℃］相似，但其提取物中的多酚含量低于本研究所獲得的多酚含量(51.23%)。試驗(yàn)結(jié)果表明，本試驗(yàn)提取工藝可行，同時(shí)節(jié)省了原材料，降低了提取物中乙醇的殘留量，提高了多酚提取得率。

3.2 板栗總苞多酚體外抗氧化性研究

板栗總苞多酚研究的最多是其抗氧化性，本研究發(fā)現(xiàn)其有很強(qiáng)的抗氧化能力，目前還沒(méi)有發(fā)現(xiàn)關(guān)于板栗總苞多酚抗氧化性研究的文獻(xiàn)報(bào)道。但是前人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)板栗殼、花、葉和果仁等的多酚具有抗氧化能力。魯曉翔等［15］研究板栗殼與維生素C對(duì)DPPH·溶液清除率的大小，并確定板栗殼多酚抗氧化性的大小，試驗(yàn)結(jié)果為5 mg/mL的多酚提取液對(duì)DPPH·的清除率為91.49%，低于維生素C的清除率(96.18%)。通過(guò)同樣的方法李金鳳等［14］研究發(fā)現(xiàn)，板栗殼提取物的濃度為200 mg/L時(shí)，DPPH·抑制率達(dá)89.7%，均高于同質(zhì)量濃度的2，6－二叔丁基 －4－甲基苯酚(BHT)，但低于同質(zhì)量濃度維生素C。但本研究表明，板栗總苞多酚與維生素C抗氧化能力相當(dāng)，與以上研究板栗殼多酚和維生素C抗氧化能力的比較結(jié)果不同，可能是由于板栗總苞中多酚的含量高于板栗殼所致。Dinis等［22］研究不同生態(tài)環(huán)境下板栗的抗氧化性試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DPPH·的EC50在 7.3 ～33.5 mg/mL 之間，ABTS+·的 EC50在5.2～14.1 mg/mL之間，此結(jié)果與本研究板栗總苞多酚的 DPPH·的 EC50為 0.0120 mg/mL，ABTS+·的EC50為0.116 0 mg/mL的結(jié)果不同，出現(xiàn)這種結(jié)果的原因可能是研究試驗(yàn)中板栗的品種不一樣，提取得率不一致，導(dǎo)致多酚抗氧化性有差別。Barreira等［7］研究發(fā)現(xiàn)，板栗樹(shù)的花、葉子、樹(shù)皮和果實(shí)提取物 DPPH·的 EC50在0.032 7～0.170 0 mg/mL范圍內(nèi)，此結(jié)果與本研究DPPH·的EC50(0.012 0 mg/mL)試驗(yàn)結(jié)果一致。但是，通過(guò)板栗總苞多酚對(duì)動(dòng)物油POV的影響來(lái)研究板栗總苞多酚抗氧化性能，還沒(méi)有發(fā)現(xiàn)相關(guān)的國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道。

4 結(jié)論

①由板栗總苞多酚提取條件的研究可知，各因素對(duì)板栗總苞多酚提取得率的影響次序是:提取溫度＞乙醇濃度＞液料比＞提取時(shí)間。最佳提取工藝為:乙醇濃度30%，提取溫度80℃，提取時(shí)間 140 min，液料比 18∶1(mL∶g)，在以上最優(yōu)條件下板栗總苞多酚提取得率為22.61%，提取物中多酚含量為51.23%。

②由板栗總苞多酚抗氧化性試驗(yàn)結(jié)果可知，板栗總苞多酚對(duì)DPPH·和ABTS+·的清除能力很強(qiáng);板栗總苞多酚對(duì)豬油有良好的抗氧化效果，與板栗總苞多酚的濃度有關(guān)，100 μg/mg為板栗總苞多酚對(duì)豬油抗氧化的最佳濃度。

致謝:

感謝北京農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院郭凱軍副教授和食品科學(xué)與工程學(xué)院賈昌喜教授對(duì)文稿所提的寶貴意見(jiàn)。

［1］ 石碧，狄瑩.植物多酚［M］.北京:科學(xué)出版社，2000:1－2.

［2］ OKUDA T，KIMURA Y，YOSHIDA T，et al.Studies on activities of tannins and related compounds from medicinal plants anddrugs.Ⅰ.Inhibitory effects on lipid peroxidation in mitochondria and microsomes of liver［J］.Chemical＆ Pharmaceutical Bulletin，1983，31(5):1625－1631.

［3］ KIMURA Y，OKUDA H，MORI K，et al.Studies on the activities of tannins and related compounds from medicinal plants anddrugs.Ⅳ.Effects of various extracts of Geranii herba and geraniin on liver injury and lipid metabolism in rats fed peroxidatal oil［J］.Chemical＆ Pharmaceutical Bulletin，1984，32(5):1866 －1871.

［4］ TAKECHI M，TANKA Y，TAKEHARA M，et al.Structure and antiherpetic activity among the tannins［J］.Phytochemistry，1985，24(10):2245 －2250.

［5］ GALI U，PERCHELLET E，KLISK D，et al.Antitumor-promoting activities of hydrolyzable tannins in mouse skin［J］.Carcinogensis，1992，13(14):715 －718.

［6］ YOSHIDA T，TONG C，MATSUDA M，et al.Woodfordin D and oenothein A，trimeric hydrolyzable tannins of marco-ring structure with antitumor activity［J］.Chemical＆ Pharmaceutical Bulletin，1991，39(5):1157－1162.

［7］ BARREIRA J C M，F(xiàn)ERREIRA I C F R，OLIVEIRA M B P P，et al.Antioxidant activities of the extracts from chestnut flower，leaf，skins and fruit［J］.Food Chemistry，107(3):1106 －1113.

［8］ TABACCO E，BORREANI G，CROVETTO G M，et al.Effect of chestnut tannin on fermentation quality，proteolysis and protein rumendegradability of alfalfa silage［J］.Journal of Dairy Science，2006，89:4736 －4746.

［9］ SCHIAVONE A，GUO K，TASSONE S，et al.Effects of a natural extract of chestnut wood ondigestibility，performance traits，and nitrogen balance of broiler chicks［J］.Poultry Science，2008，87:521 － 527.

［10］ ZOCCARATO I，GASCO L，SCHIAVONE A，et al.Effect of extract of chestnut wood inclusion(ENC)in normal and low protein amino acid supplementeddiets on heavy broiler rabbits［C］//Proceedings of the 9th world rabbit congress.Verona:［s.n.］，2008:873－877.

［11］ LIU H W，XIAO F D，JIAN M T，et al.A comparative study of growth performance and antioxidant status of rabbits when fed with or without chestnut tannins under high ambient temperature［J］.Animal Feed Science and Technology，2011，164:89 －95.

［12］ 焦啟揚(yáng)，吳立軍，黃建，等.板栗總苞化學(xué)成分的分離與鑒定［J］.沈陽(yáng)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，26(1):23－26.

［13］ 張琳，高慧媛，馬場(chǎng)正樹(shù)，等.板栗總苞中的抗糖尿病活性成分［J］.沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2010(7):530 －532，538.

［14］ 李金鳳，段玉清，馬海樂(lè)，等.板栗殼中多酚的提取及體外抗氧化性研究［J］.林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2010(2):53－58.

［15］ 魯曉翔，趙晨光，連喜軍.板栗殼多酚提取條件及其抗氧化性研究［J］.食品研究與開(kāi)發(fā)，2008(3):32－36.

［16］ 黃宏妙，李靈，郭占京，等.板栗毛殼水提液對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷后羥自由基、NO和GSH-Px的影響［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010(11):2917－2918.

［17］ DIAO Q，QI G.Tannins in livestock feed in China［C］//Tannins in Livestock and Human Nutrition.Proceedings of an international workshop on tannins in livestock and human nutrition.Adelaide:［s.n.］，2003:76－80.

［18］ LUO W，ZHAO M M，YANG B，et al.Identification of bioactive compounds in Phyllanthus emblica L.fruit and their free radical scavenging activities［J］.Food Chemistry，2009，114:499 －504.

［19］ RE R，PELLEGRIEGRINI N，PROTEGGENTE A，et al.Antioxidant activity applying an improved ABTS radical cationdecolorization assay［J］.Free Radical Biology ＆ Medicine，1999，26:1231 －1237.

［20］ SILVA A C D，JORGE N.Oxidative stability of soybean oil added to Lentinus edodes and Agaricus blazei mushrooms extracts in an accelerated storage test［J］.Nutrition ＆ Food Science，2012，42(1):34 －40.

［21］ 杜運(yùn)平，徐浩，張宗和，等.板栗苞多酚提取條件研究［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39(2):828 －829，839.

［22］ DINIS L T，OLIVEIRA M M，ALMEIDA J，et al.An-tioxidant activities of chestnut nut of Castanea sativa mill.(cultivar‘Judia’)as function of origin ecosystem［J］.Food Chemistry，2012，132:1－8.