王啟船 王 青 萬里新 屈中玉 盛 晶 (南陽市中心醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，河南 南陽 473009)

結(jié)直腸癌是一種具有高度侵襲性的腫瘤，其發(fā)生發(fā)展的分子生物學(xué)機(jī)制復(fù)雜。Kindlin-2作為黏著斑蛋白家族的重要成員，對黏附細(xì)胞可以形成有效的調(diào)節(jié)，進(jìn)而對腫瘤的進(jìn)展形成有效的促進(jìn)〔1，2〕。整合素β1是重要的黏附分子，與Kindlin-2可能在黏附分子調(diào)節(jié)的角度有共同作用，同時整合素β1還可以調(diào)節(jié)基質(zhì)降解和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，在腫瘤形成、生長、分化、血管形成和轉(zhuǎn)移中起重要的作用〔3〕。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)對血管生成的促進(jìn)作用明顯，Kindlin-2和整合素β1可能和VEGF有關(guān)聯(lián)。本研究采用流式細(xì)胞技術(shù)，檢測結(jié)直腸癌及正常結(jié)腸組織中Kindlin-2、整合素β1和VEGF蛋白表達(dá)情況，探討Kindlin-2、整合素β1和VEGF表達(dá)的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 2008年1月至2010年11月行結(jié)直腸癌根治手術(shù)的患者87例術(shù)后的新鮮樣本。嚴(yán)格經(jīng)病理主任醫(yī)師閱片后納入，并置于－80℃冰箱中凍存。排除術(shù)前進(jìn)行放、化療的患者。年齡36～70歲，平均54.1歲，其中男47例，女40例。選擇切端證實為正常結(jié)腸黏膜組織的標(biāo)本70例為對照組，其中男35例，女35例，年齡36～71歲，平均54.3歲。

1.2 3種蛋白檢測的方法 購買Santa Cruz公司的Kindlin-2、整合素β1和VEGF的濃縮液。通過預(yù)實驗選取最佳配比濃度。流式細(xì)胞學(xué)的檢測步驟參考劉愛東等〔4〕應(yīng)用的方法，應(yīng)用BD公司的流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。

1.3 流式細(xì)胞結(jié)果的判定 采用熒光指數(shù)(FI)表示Kindlin-2與整合素β1抗體蛋白的表達(dá)量。FI值計算公式為:FI=(結(jié)直腸癌中Kindlin-2、整合素β1或VEGF蛋白表達(dá)的平均熒光強(qiáng)度－對照樣品的熒光強(qiáng)度)/對照樣品平均熒光強(qiáng)度。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SAS6.12軟件，組間比較采用t檢驗，同時進(jìn)行相關(guān)性分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組中Kindlin-2、整合素β1和VEGF表達(dá)的比較 觀察組中Kindlin-2、整合素 β1和 VEGF的表達(dá)明顯高于對照組(P＜0.01)。見表1。

表1 兩組Kindlin-2與整合素β1表達(dá)(±s)

表1 兩組Kindlin-2與整合素β1表達(dá)(±s)

VEGF觀察組組別 n Kindlin-2 整合素β1 87 1.27±0.15 1.30±0.19 1.52±0.29對照組 70 1.00±0.17 1.00±0.20 1.00±0.32 t/P值8.75/0.008 5 9.86/0.000 5 13.67/＜0.000 1

2.2 觀察組中Kindlin-2、整合素β1和VEGF與臨床特征的關(guān)系 Kindlin-2、整合素β1和VEGF的半定量表達(dá)與腫瘤的浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes分期及Ki67的表達(dá)密切相關(guān)，見表2。

表2 Kindlin-2、整合素β1和VEGF在觀察組不同臨床特征中表達(dá)的比較(±s)

表2 Kindlin-2、整合素β1和VEGF在觀察組不同臨床特征中表達(dá)的比較(±s)

臨床病理特征 n Kindlin-2 t值 P值 整合素β1 t值 P值 VEGF t值 P值5 1.43±0.34 9.42 0.012 1漿膜及以外 30 1.39±0.18 1.47±0.16 1.65±0.34淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 無 54 1.16±0.14 10.23 0.000 3 1.21±0.15 9.81 0.003 9 1.32±0.13 10.24 0.004 3有33 1.43±0.16 1.46±0.18 1.67±0.19 Dukes分期 Ⅰ～Ⅱ 51 1.18±0.18 8.60 0.010 5 1.20±0.21 10.10 0.001 9 1.42±0.35 9.86 0.010 2Ⅲ～Ⅳ 36 1.38±0.20 1.50±0.22 1.59±0.31 Ki67 ＜20% 47 1.17±0.18 9.41 0.006 2 1.19±0.19 11.30 ＜0.000 1 1.45±0.32 8.74 0.0182≥浸潤深度 未及漿膜 57 1.17±0.16 9.78 0.004 6 1.20±0.15 9.20 0.007 20% 40 1.40±0.18 1.44±0.17 1.60±0.25

2.3 Kindlin-2、整合素β1和VEGF在結(jié)直腸癌中的相關(guān)性相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)腫瘤中Kindlin-2和整合素β1(r=0.44，P=0.031 4)、Kindlin-2 和 VEGF(r=0.41，P=0.046 5)、整合素 β1和VEGF(r=0.49，P=0.020 9)的表達(dá)均具有正相關(guān)性。

3 討論

整合素由α、β2兩個亞基組成，是一種多功能的跨膜糖蛋白，兩個亞基組成的結(jié)構(gòu)大部分相似，但是每個亞單位具有特征性的細(xì)胞外片段、跨膜片段和細(xì)胞內(nèi)片段，因此具有特征性功能。其不僅有介導(dǎo)黏附作用，還可以介導(dǎo)細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)信號。整合素β1是重要的β亞單位，能與不同的α亞單位結(jié)合，構(gòu)成細(xì)胞外基質(zhì)的大部分受體，是調(diào)節(jié)細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的重要黏附分子，其高表達(dá)對腫瘤的進(jìn)展有重要作用〔5〕。Kindlin家族共發(fā)現(xiàn)3個成員，其功能也較多，其對腫瘤細(xì)胞惡變的作用主要和細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞的增殖相關(guān)，Kindlin-2是代表性成員〔6〕。Kindlin-2常表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)的黏附斑處，然后進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，再與migfilin連接，將細(xì)胞與細(xì)胞進(jìn)行連接，以傳導(dǎo)細(xì)胞間的信號〔7〕。Kindlin-2與整合素結(jié)合后，調(diào)節(jié)細(xì)胞間信息傳遞和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，使細(xì)胞間的黏附能力減弱，而細(xì)胞的遷移能力增強(qiáng)。VEGF是血管生成因子，其可以促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，新生血管形成后對腫瘤細(xì)胞提供營養(yǎng)，因此VEGF其在腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展中有重要作用。

本實驗提示Kindlin-2、整合素β1和VEGF高表達(dá)在腫瘤的發(fā)生中具有重要的促進(jìn)作用;Kindlin-2、整合素β1和VEGF可能具有正向協(xié)同作用，三者具有內(nèi)在聯(lián)系。關(guān)于Kindlin-2與整合素β1的協(xié)同性與其結(jié)構(gòu)域上相關(guān)位點結(jié)合有關(guān)。但是魯杰〔8〕認(rèn)為轉(zhuǎn)化生長因子β能增強(qiáng)Kindlin蛋白的表達(dá)，此時細(xì)胞的分化加速，增殖作用增強(qiáng)，并且促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化，使腫瘤細(xì)胞的惡性程度增加。也有學(xué)者通過研究Kindlin和血管的關(guān)系認(rèn)為Kindlin和整合素β1的作用是通過血管內(nèi)皮生長因子實現(xiàn)的〔2〕，即Kindlin-2與整合素β1均可以促進(jìn)腫瘤血管的生成，二者通過VEGF作為橋梁作用，并且協(xié)同發(fā)揮腫瘤血管生成的作用，使腫瘤的血管生成加速，腫瘤體積增大，本實驗顯示的Kindlin-2和整合素β1蛋白與VEGF的相關(guān)性，也證實了此結(jié)論。但是Kindlin的具體調(diào)節(jié)機(jī)制尚待進(jìn)一步證實。

1 Perera HD，Ma YQ，Yang J，et al.Membrane binding of the N-terminal ubiquitin-like domain of kindlin-2 is crucial for its regulation of integrin activation〔J〕.Structure，2011;19(11):1664-71.

2 Shen Z，Ye Y，Dong L，et al.Kindlin-2:a novel adhesion protein related to tumor invasion，lymph node metastasis，and patient outcome in gastric cancer〔J〕.Am J Surg，2012;203(2):222-9.

3 杜玉曉，楊成章，張小萌，等.整合素β和整合素連接激酶在喉鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義〔J〕.臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2008;22(11):500-3.

4 劉愛東，龐久玲，劉士生.胃癌中基質(zhì)金屬蛋白酶-9和CD105表達(dá)關(guān)系的研究〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2009;29(4):886-7.

5 李 智，李 劍，萬相斌.E-cadherin和整合素α5β1的表達(dá)與結(jié)直腸癌生物學(xué)行為和預(yù)后的關(guān)系〔J〕.新醫(yī)學(xué)，2011;42(4):227-30.

6 Liu J，F(xiàn)ukuda K，Xu Z，et al.Structural basis of phosphoinositide binding to kindlin-2 protein pleckstrin homology domain in regulating integrin activation〔J〕.J Biol Chem，2011;286(50):43334-42.

7 Qu H，Tu Y，Shi X，et al.Kindlin-2 regulates podocyte adhesion and fibronectin matrix deposition through interactions with phosphoinositides and integrins〔J〕.J Cell Sci，2011;124(Pt 6):879-91.

8 魯 杰.喉鱗狀細(xì)胞癌患者癌組織Kindlin-2與融合素β表達(dá)的關(guān)系〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2012;32(12):2492-3.