李軍紅

肺腺癌患者晚期常伴有胸腔轉(zhuǎn)移, 產(chǎn)生大量胸腔積液,結(jié)核、炎癥等病變也可導(dǎo)致產(chǎn)生大量胸腔積液。胸腔積液的性質(zhì)確定尤為重要。傳統(tǒng)的方法是靠胸腔積液離心后的沉淀物涂片, 光鏡觀察細(xì)胞形態(tài)來診斷。由于受到涂片質(zhì)量的限制加上診斷過于主觀, 使一部分病例難以獲得明確診斷。本文重點(diǎn)探討傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)涂片、液基細(xì)胞學(xué)檢測并免疫組化技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用在胸腔積液中的應(yīng)用, 尤其是對胸腔積液中脫落的肺腺癌細(xì)胞的診斷價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取鄭州大學(xué)附屬洛陽市中心醫(yī)院病理科2010年1月至2012年3月臨床送檢的胸腔積液375例, 從中再選取查見異型增生細(xì)胞103例, 行免疫組化CEA、CK、TTF-1、CR、Desimin、Vimentin、P53、NapsinA 染色 , 篩出符合肺腺癌32例。

1.2 儀器及耗材 Thinprep 2000 System、Baiyang Centrifuge Factory、IKA Vibrax VXR basic 震蕩儀、新柏氏 TCT 專用玻片、Cytolyt 清洗液、PreservCyt保存液。

1.3 方法 用吸管吸取經(jīng)自然沉淀的胸腔積液標(biāo)本的底層液體 50ml置入離心管中 ；2500 r/min 離心 8～10 min, 棄去上清液；加入20ml的Cytolyt 清洗液, 將盛有標(biāo)本的離心管在 IKA Vibrax VXR basic震蕩儀上震蕩 10 min ；重復(fù) 2500r/min離心8～10 min, 棄去上清液；吸取PreservCyt保存液沖洗離心管中的標(biāo)本, 使之轉(zhuǎn)移至含有PreservCyt保存液的新柏氏專用標(biāo)本瓶內(nèi)；靜置15 min后用Thinprep 2000 System按說明自動完成制片；95%乙醇固定, HE染色, 在OLYMPUS BX51光學(xué)顯微鏡下兩名診斷醫(yī)師閱片查見異型增生細(xì)胞者再重新制片行免疫組化染色進(jìn)一步診斷。

1.4 免疫組化試劑及方法 查見異型增生細(xì)胞得標(biāo)本用Thinprep 2000 System 根據(jù)需要再進(jìn)行制片8張, 免疫組化采用 EliVision 法 , 一 抗 CEA、、TTF-1、NapsinA.、CK 、CR、Desimin、Vimentin、P53及二抗均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司(第一抗體見表1), 嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行染色, 設(shè)陰性及陽性對照。

表1 抗體來源和濃度及表達(dá)部位

2 結(jié)果

2.1 HE染色鏡檢 375例新柏氏液基細(xì)胞學(xué)涂片背景清晰,涂片均勻, 篩出異型增生細(xì)胞103例, 閱片時發(fā)現(xiàn)細(xì)胞大小不一、細(xì)胞核染色質(zhì)不勻、顆粒較粗、核大小為正常淋巴細(xì)胞的2倍及以上、可見小核仁、單核或多核、核漿比升高、細(xì)胞聚集成花環(huán)狀等指標(biāo)均視為異型增生細(xì)胞。

2.2 免疫組化結(jié)果 103例異型增生細(xì)胞標(biāo)本每例均重新 制 片 8張 , 分 別 行 CEA、CK、TTF-1、CR、Desimin、 Vimentin、P53、NapsinA染色, 結(jié)果見表2。

表2 103例異型增生細(xì)胞免疫組化結(jié)果(n)

3 討論

胸腔積液或滲出液是脫落細(xì)胞學(xué)主要組成部分之一, 是常見的臨床體征, 細(xì)胞學(xué)檢查主要用于確定有無惡性腫瘤細(xì)胞, 可伴或不伴有已知原發(fā)灶。探尋胸腔積液的性質(zhì)不僅有利于明確診斷及分期, 而且在指導(dǎo)治療、分析預(yù)后等方面也非常重要。

早期的脫落細(xì)胞學(xué)檢查一般采用傳統(tǒng)的普通涂片法, 但傳統(tǒng)厚薄不均勻, 大多數(shù)細(xì)胞會堆積在一起, 且涂片面積大,觀察時間長, 易產(chǎn)生疲勞、粗心、漏診, 且送檢材料無法較長時間保管, 發(fā)現(xiàn)疑似腫瘤細(xì)胞也無法用原送檢材料進(jìn)一步檢查。本組375例胸腔積液行傳統(tǒng)涂片查見異型增生細(xì)胞87例。近年來, 新柏氏液基細(xì)胞學(xué)檢測(TCT)技術(shù)在細(xì)胞學(xué)領(lǐng)域得到較廣泛的應(yīng)用并取得了良好的效果, 其優(yōu)缺點(diǎn)及應(yīng)用前景尚在探索階段［1］。新柏氏TCT制片的標(biāo)本經(jīng)儀器正負(fù)壓交替對細(xì)胞進(jìn)行全面收集, 使標(biāo)本的質(zhì)量大大提高, 特制的玻片有很好的黏附性, 使細(xì)胞分布均勻、平鋪, 不易掉片, 且背景清晰,減少了紅細(xì)胞和粘液的影響, 細(xì)胞核結(jié)構(gòu)更清晰, 更有意義的是收集到的細(xì)胞成分可以保存在含有PreservCyt保存液的新柏氏專用標(biāo)本瓶內(nèi), 涂片發(fā)現(xiàn)異型增生細(xì)胞后可以重復(fù)制片進(jìn)行免疫組化標(biāo)記, 進(jìn)一步明確診斷。但缺點(diǎn)是：腫瘤特有的背景也會破壞, 且其制片工序較復(fù)雜。本組行液基細(xì)胞學(xué)檢測查見異型增生細(xì)胞79例。兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn), 但單純就提高肺腺癌在胸腔積液的檢出率而言, 兩種方法同時制片可以提高惡性細(xì)胞的陽性診斷率［2］。本組兩者聯(lián)合檢出異型增生細(xì)胞103例, 說明兩種方法可互為補(bǔ)充。

單純的細(xì)胞形態(tài)學(xué)因其敏感性低、經(jīng)驗性強(qiáng), 經(jīng)常會遇到一些診斷困難的病例, 難以滿足臨床需要, 最大的鑒別診斷困難在間皮細(xì)胞、組織細(xì)胞與癌細(xì)胞之間。近代研究證實,免疫細(xì)胞化學(xué)已成為最常使用的特殊診斷手段［3］。由于肺腺癌細(xì)胞和間皮細(xì)胞表達(dá)的抗體常交叉存在, 只用一種或兩種抗體通常不能滿足診斷, 有抗體選擇組合的報道［4］, 但尚無統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。筆者選用的組合是CEA、TTF-1、NapsinA.、CK 、CR、Desimin、Vimentin、P53。以上多種抗體的聯(lián)合使用并結(jié)合細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變, 可顯著提高肺腺癌的檢出率,并有免疫組化的客觀證據(jù), 為一些晚期腫瘤患者提供有效地治療依據(jù), 也可為以胸腔積液為首發(fā)癥狀患者提供診斷思路。

［1］ 杜蕓, 劉鹿寧, 王珩, 等.液基細(xì)胞學(xué)在非婦科領(lǐng)域的應(yīng)用分析 .臨床與實驗病理學(xué)雜志 , 2008,24(4)：495-496.

［2］ 王莉莉, 續(xù)薇.腫瘤細(xì)胞學(xué)診斷漿膜腔積液病變性質(zhì)的臨床應(yīng)用價值 .中國實驗診斷學(xué) , 2012, 16(5)：910-911.

［3］ 宋東明, 朱安峰.免疫細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)在胸水、腹水診斷中的應(yīng)用 .吉林醫(yī)學(xué) , 2012,33(28)：6082-6084.

［4］ 龔建華,何麗,周茂林.細(xì)胞塊技術(shù)在肺腺癌胸腔轉(zhuǎn)移診斷中的應(yīng)用價值.中國醫(yī)師進(jìn)修雜志,2012,35(4)：41-43.