李 波，張榮平，李進(jìn)濤，何保麗，鄭 紅，王利梅，角建林,*

1. 昆明醫(yī)科大學(xué) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部，云南 昆明 650031；

2. 揚(yáng)州大學(xué) 獸醫(yī)學(xué)院，江蘇 揚(yáng)州 225009

解剖數(shù)據(jù)作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物主要的生物學(xué)特性，是直接描述動(dòng)物體征的主要數(shù)據(jù)群。靈長(zhǎng)類近親樹鼩(tree shrew, Tupaia belangeri) 為單系起源的攀鼩目(Peng et al, 1991；Nie et al, 2008；Dong et al, 2012；Xu et al, 2013)，由于其特殊的生物學(xué)特性，已被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和生物學(xué)研究，WHO也曾建議用樹鼩代替瀕危的非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物進(jìn)行科學(xué)實(shí)驗(yàn) (Peng et al, 1991)。近年來，樹鼩實(shí)驗(yàn)室規(guī)模化馴養(yǎng)繁殖的成功 (Jiang et al, 2011；Jiao et al, 2009； Shen et al,2011)加快了其實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化的進(jìn)程。本研究對(duì)實(shí)驗(yàn)室馴養(yǎng)樹鼩的解剖學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行了全面測(cè)定與分析，為樹鼩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料和方法

1.1 動(dòng)物來源

實(shí)驗(yàn)室馴養(yǎng)7～9月齡樹鼩70只，雌、雄各半，由昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用符合國(guó)家和學(xué)校動(dòng)物倫理委員會(huì)規(guī)定并遵守國(guó)際慣例。

1.2 儀器、試劑及測(cè)定方法

解剖前，動(dòng)物禁食不禁水12 h，稱重 (體重計(jì)購自上海精密科學(xué)儀器有限公司，YP2001N)后，腹腔注射戊巴比妥鈉鹽 35 mg/kg(北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司，批號(hào)：20120812)，麻醉后心臟采血、處死。實(shí)驗(yàn)參照《嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生物學(xué)特性數(shù)據(jù)測(cè)定技術(shù)規(guī)程》(He et al, 2006) 相關(guān)要求進(jìn)行。獲取體尺(軟尺測(cè)量)及骨骼等解剖數(shù)據(jù)后依次采集腹腔、胸腔及腦等器官。采集臟器時(shí)需將周圍脂肪及結(jié)締組織除盡，濾紙吸干表面的血液和體液，腔性器官需在去除腔內(nèi)液體和內(nèi)容物后迅速稱重 (梅特勒—托利多AL204-IC電子天平)。臟器系數(shù)=臟器重量／體重×100%。 剖取從胃幽門處至肛門處的所有腸段，置于盛有生理鹽水的平皿中并在硫酸紙上展開，分別測(cè)量十二指腸、空腸、回腸、盲腸、結(jié)腸及直腸等的長(zhǎng)度。多個(gè)腸道需同時(shí)測(cè)量并由一人操作整個(gè)過程，避免由人為過度展開或展開不充分而造成測(cè)量數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS11.5軟件包進(jìn)行分析。正態(tài)計(jì)量資料采用t-test，非正態(tài)用秩和檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 解剖數(shù)據(jù)

樹鼩有7個(gè)頸椎、13個(gè)胸椎、6個(gè)腰椎、3個(gè)骶椎、24～27個(gè)尾椎及6個(gè)乳頭。雌、雄個(gè)體體長(zhǎng)、尾長(zhǎng)、尾/體比、胸寬、左后肢長(zhǎng)以及盲腸和直腸長(zhǎng)無顯著性差異 (P＞0.05)；體高、右耳寬、回腸及結(jié)腸長(zhǎng)差異顯著 (P＜0.05)；體斜長(zhǎng)、胸深、軀干長(zhǎng)、左前肢長(zhǎng)、右前肢長(zhǎng)、右后肢長(zhǎng)、左耳長(zhǎng)、右耳長(zhǎng)、左耳寬、龍骨長(zhǎng)、左脛長(zhǎng)、右脛長(zhǎng)、十二指腸及空腸長(zhǎng)等差異極顯著 (P＜0.01)(表1，圖1)。

表1 樹鼩雌、雄個(gè)體解剖數(shù)據(jù)測(cè)量結(jié)果Table 1 Measurement of anatomical parameters in tree shrew

圖1 樹鼩雌、雄個(gè)體腸道長(zhǎng)度比較Figure 1 Comparison of intestinal canal length (comparison between males and females, *: P＜0.05; **:P＜0.01)

2.2 體尺指標(biāo)的相關(guān)與回歸分析

部分樹鼩體尺數(shù)據(jù)的相關(guān)分析見表 2。以體長(zhǎng)為因變量，部分體尺指標(biāo) (尾長(zhǎng)、軀干長(zhǎng)、左前肢長(zhǎng)、右前肢長(zhǎng)、左后肢長(zhǎng)及右后肢長(zhǎng)等)為自變量，作逐步回歸分析，回歸方程為：體長(zhǎng)=13.90+尾長(zhǎng)×0.16。

表2 部分樹鼩體尺指標(biāo)的Pearson相關(guān)分析Table 2 Pearson correlation of body size in tree shrew

2.3 臟器及其系數(shù)測(cè)定

7～9月齡樹鼩雌、雄個(gè)體體重差異極顯著 (P＜0.01)；心、肺、膀胱及右海馬重量及系數(shù)差異極顯著 (P＜0.01)；右腎、左海馬、左頜下腺、左右甲狀腺重量差異極顯著(P＜0.01)，系數(shù)差異顯著(P＜0.05)；小腸及左腎上腺重量差異顯著(P＜0.05)，系數(shù)差異極顯著 (P＜0.01)；脾及左腎重量差異極顯著 (P＜0.01)，但系數(shù)無差異；右頜下腺重量差異顯著(P＜0.05)，但系數(shù)無差異；胃、大腸及腦重量無差異，系數(shù)差異極顯著 (P＜0.01)；右腎上腺重量無差異，系數(shù)差異顯著(P＜0.05)。

2.4 主要臟器指標(biāo)的相關(guān)與回歸分析

樹鼩主要臟器測(cè)定數(shù)據(jù)的相關(guān)分析見表 4。以體重為因變量，主要臟器指標(biāo)(心、肺、肝、脾、左右腎及腦等)為自變量，作逐步回歸分析，回歸方程為：體重=62.73+左腎×79.21+心臟×24.09。

3 討論

解剖數(shù)據(jù)是藥物安全性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)及病原微生物感染的檢測(cè)指標(biāo)，可以客觀反映實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育程度、病變程度和功能狀態(tài)等 (Sun et al, 2009)，對(duì)其種屬標(biāo)準(zhǔn)化鑒定亦有一定意義 (Ye et al,2011)。本研究豐富了中緬樹鼩的解剖數(shù)據(jù)，為其實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。結(jié)果顯示7～9月齡樹鼩的絕大部分體尺、臟器及系數(shù)指標(biāo)因性別不同而存在顯著或極顯著性差異，與Ye et al (2011)報(bào)道的野生成年樹鼩結(jié)果基本一致。因此，若無特殊情況，在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)選擇雌、雄個(gè)體各半，并分別對(duì)其進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和比較，研究結(jié)果與Peng et al(1991)報(bào)道的解剖數(shù)據(jù)比較，絕大部分相近（如體長(zhǎng)、尾長(zhǎng)、耳長(zhǎng)、脾臟重、腎臟重、腦重、腎上腺重、卵巢重及睪丸臟器系數(shù)等）。差異較大的是腦垂體重量，由于腦垂體體積較小，故該差異可能是由稱量?jī)x器與取材不同所導(dǎo)致。

小型哺乳動(dòng)物的消化道長(zhǎng)度和重量與其食性和食物質(zhì)量密切相關(guān) (Gross et al, 1985; Korn, 1992;Derting & Bogue, 1993)。小腸是食物消化和營(yíng)養(yǎng)吸收的主要部位，在能量消耗增加或食物質(zhì)量降低時(shí)，樹鼩小腸長(zhǎng)度及重量的增加可獲得更多的能量以滿足生存需要 (Cai et al, 2010)。本研究結(jié)果顯示雌、雄個(gè)體的小腸各腸段均存在差異 (P＜0.05)，雌性小腸重量顯著高于雄性 (P＜0.05)。因此，在實(shí)驗(yàn)室條件下，雌、雄個(gè)體對(duì)食物的消化和吸收能力是否存在差異仍有待進(jìn)一步研究。

本研究結(jié)果顯示雌、雄個(gè)體腦重量差異不顯著(P＞0.05)，系數(shù)差異顯著 (P＜0.05)，體重差異極顯著 (P＜0.01)，與Ye et al (2011)的結(jié)果相反，這可能與個(gè)體發(fā)育階段及生活環(huán)境相關(guān)。野生樹鼩的確切年齡較難掌握，且其機(jī)體受季節(jié)及營(yíng)養(yǎng)狀況的影響較大 (Cao, 1989；Jiao et al, 2011; Li et al, 1994； Li et al , 2011)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨年齡的增長(zhǎng)，其腦、心、肺、脾及腎等主要臟器系數(shù)都呈下降趨勢(shì) (Sun et al,2009)。提示若能開展多年齡段或采用動(dòng)態(tài)觀測(cè)方法檢測(cè)樹鼩臟器重量及生長(zhǎng)發(fā)育情況，將更有助于建立其基礎(chǔ)生物學(xué)數(shù)據(jù)。

在臟器及其系數(shù)的測(cè)定分析中，與國(guó)內(nèi)近年較少的研究結(jié)果相比 (He et al, 2008；Ye et al, 2011)，個(gè)體心臟、肝臟、肺臟、胰腺、腦及腸等均存在差異。其中，雌、雄個(gè)體心臟重量與系數(shù)差異極顯著(P＜0.01)，這與野生成年個(gè)體情況一致 (Ye et al,2011)，但重量較輕，而肝臟重量小，胰腺重量大，且其重量與系數(shù)差異均不顯著(P＞0.05)。以上結(jié)果的差異可能由多方面原因?qū)е拢?1)研究對(duì)象、飼養(yǎng)環(huán)境及飼養(yǎng)條件等客觀條件不同，本研究采用 7～9月齡樹鼩，與前期工作選用個(gè)體的年齡存在差異，且所選樹鼩主要在實(shí)驗(yàn)室條件下以顆粒飼料喂養(yǎng)，與前期馴養(yǎng)及野外條件存在根本的不同；(2)個(gè)體的處死及測(cè)定方法不同，動(dòng)物致死時(shí)，心臟及肝臟等器官內(nèi)血液的充盈程度將直接影響其重量，因此，采集內(nèi)臟器官應(yīng)在采血后，且不同的采血部位也會(huì)影響臟器重量，本研究麻醉后心臟采血5～8 mL的致死方法可能也是導(dǎo)致差異的原因之一；(3)結(jié)締組織及血管等分離情況不同；(4)研究對(duì)象不同的生長(zhǎng)發(fā)育階段導(dǎo)致能量代謝及積蓄不同；(5)樣本量不同，Ye et al (2011)使用雄性25只，雌性35只，He et al (2008)使用雄性12只、雌性15只，而本研究使用雄、雌性各35只。

表3 樹鼩雌、雄個(gè)體部分臟器測(cè)定結(jié)果 (mean±SD)Table 3 Measurement of body and organ weight and coefficient in tree shrews

近年來，樹鼩作為人類疾病動(dòng)物模型有了新的發(fā)展。由于種系、性別、年齡、體重及飼養(yǎng)條件等因素影響，進(jìn)一步完善實(shí)驗(yàn)室馴養(yǎng)樹鼩的生物學(xué)數(shù)據(jù) (體尺、臟器重量、血液生理及血液生化等基礎(chǔ)指標(biāo))，對(duì)其實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化研究及應(yīng)用具有重要意義。

Cao XM. 1989. The seasonal variation of spermatogenesis in Tupaia belangeri chinensis. Zoological Research, 10(1): 16-21. [曹筱梅. 1989. 樹鼩(Tupaia belangeri chinensis)精子發(fā)生的季節(jié)性變化. 動(dòng)物學(xué)研究,10(1): 16-21.]

Cai JH, Zhu WL, Xie J, Jia T, Wang R, Lian X, Wang ZK. 2010. Variations on length and weight of the digestive tract in Tupaia belangeri. Chinese Journal of Zoology, 45(1): 140-144. [蔡金紅, 朱萬龍, 謝靜, 賈婷, 王睿,練硝, 王政昆. 2010. 中緬樹鼩消化道長(zhǎng)度和重量變化. 動(dòng)物學(xué)雜志,45(1): 140-144.]

Derting TL, Bogue BA. 1993. Responses of the gut to moderate energy demands in a small herbivore (Microtus pennsylvanicus). Journal of Mammalogy, 74(1): 59-68.

Dong L, Lü BL, Lai R. 2012. Molecular cloning of Tupaia belangeri chinensis neuropeptide Y and homology comparison with other analogues from primates. Zoological Research, 33(1): 75-78. [董麗, 呂龍, 賴仞.2012. 樹鼩神經(jīng)肽Y的分子克隆及其靈長(zhǎng)類類似物的同源性比較. 動(dòng)物學(xué)研究, 33(1): 75-78.]

Gross JE, Wang Z, Wunder B. 1985. Effects of food quality and energy needs: Changes in gut morphology and capacity of Microtus ochrogaster.Journal of Mammalogy, 66(6): 661-667.

He BL, Liu RW, Chen LL, Zheng H, Li B. 2008. The measurement of weight of main organs and the correlation research of organ weight & body weight in Tree Shrew. Laboratory Animal Science, 25(5): 17-19. [ 何保麗,劉汝文, 陳麗玲, 鄭紅, 李波. 2008. 樹鼩臟器系數(shù)的測(cè)定及臟器重量與體重相關(guān)性的探討. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué), 25(5): 17-19.]

He ZM. 2006. Determination of Biological Characteristics of Laboratory Rodents Data Technical Regulations. Beijing: China Standards Press, 53-54.[賀爭(zhēng)鳴. 2006. 嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生物學(xué)特性數(shù)據(jù)測(cè)定技術(shù)規(guī)程. 北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社, 53-54.]

Jiao JL, Li B, Li JT, Zeng H, Chen LL, Shen PQ, Zheng H. 2011.Comparative analysis of nutritional status in wild and laboratory

domesticated tree shrews. Laboratory Animal and Comparative Medicine,31(4): 290-292. [角建林, 李波, 李進(jìn)濤, 曾河, 陳麗玲, 沈培清, 鄭紅.2011. 野生和實(shí)驗(yàn)室樹鼩營(yíng)養(yǎng)狀況的對(duì)比分析. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與比較醫(yī)學(xué),31(4): 290-292.]

Jiao JL, Liu RW, Chen LL, Li B, He BL, Zheng H, Shen PQ. 2009. The development and use of tree shrew resource and its standards research-the strategic discussion for laboratory animal resource development in China.Chinese Journal of Comparative Medicine, 19(7): 73-78. [角建林, 劉汝文,陳麗玲, 李波, 何保麗, 鄭紅, 沈培清. 2009. 樹鼩資源的開發(fā)利用與標(biāo)準(zhǔn)化研究-我國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物資源建設(shè)發(fā)展戰(zhàn)略探討. 中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志,19(7): 73-78.]

Jiang QF, Kuang DX, Tong PF, Sun XM, Dai JJ. 2011. Scale breeding of tree shrews and the establishment of breeding population. Laboratory Animal Science, 28(6): 35-38. [江勤芳, 匡德宣, 仝品芬, 孫曉梅, 代解杰.2011. 樹鼩規(guī)?；敝臣胺敝橙旱慕? 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué), 28(6): 35-38.]

Korn H. 1992. Intestine lengths of southern African savanna rodents and insectivores: Intra-and inter-specific comparisons. Journal of Zoology,228(5): 455-460.

Li XT, Zhu WL, Liu X, Liu CY, Wang ZK. 2011. Seasonal changes of energy metabolism in Tupaia belangeri. Acta Theriologica Sinica, 31(3):291-298. [李曉婷, 朱萬龍, 劉鑫, 劉春燕, 王政昆. 2011. 中緬樹鼩能量代謝的季節(jié)變化. 獸類學(xué)報(bào), 31(3): 291-298.]

Li YC, Hu JS, Li CM, Wang MK, Zhang SQ, Ouyang M, He Y, Xu GS.1994. The annual periodic variations of reproductive system in Tupaia belangeri chinensis. Journal of Yunnan University: Natural Sciences, 16(1):75-80. [李永材, 胡健生, 李春茂, 王敏康, 張士強(qiáng), 歐陽明, 何云, 徐國(guó)樞. 1994. 成年樹鼩生殖系統(tǒng)的年周期變化. 云南大學(xué)學(xué)報(bào): 自然科學(xué)版, 16(1): 75-80.]

Nie W, Fu B, O’Brien PC, Wang J, Su W, Tanomtong A, Volobouev V,Ferguson-Smith MA, Yang F. 2008. Flying lemurs: the ‘flying tree shrews’?Molecular cytogenetic evidence for a Scandentia-Dermoptera sister clade.BMC Biology, 6: 18.

Peng YZ, Ye ZZ, Zou RJ, Wang YX, Tian BP, Ma YY, Shi LM. 1991.Biology of Chinese Tree Shrews (Tupaia belangeri chinensis). Kunming:Yunnan Science and Technology Press. [彭燕章, 葉智章, 鄒如金, 王應(yīng)祥,田保平, 馬原野, 施立明. 1991. 樹鼩生物學(xué). 昆明: 云南科技出版社.]Sun JX, An J, Lian J. 2009. Analysis of effect factors of the weight and coefficients in laboratory Animal. Laboratory Animal Science, 26(1): 49-51.[孫建新, 安娟, 連軍. 2009. 影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物臟器重量及臟器系數(shù)因素分析. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué), 26(1): 49-51.]

Shen PQ, Zheng H, Liu RW, Chen LL, Li B, He BL, Li JT, Ben KL, Cao XM, Jiao JL. 2011. Progress and prospect in research on laboratory tree shrew in China. Zoological Research, 32(1): 109-114. [ 沈培清, 鄭紅, 劉汝文, 陳麗玲, 李波, 何保麗, 李進(jìn)濤, 賁昆龍, 曹筱梅, 角建林. 2011.中國(guó)樹鼩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化研究進(jìn)展和展望. 動(dòng)物學(xué)研究, 32(1): 109-114.]

Xu L, Fan Y, Jiang XL, Yao YG. 2013. Molecular evidence on the phylogenetic position of tree shrew (Tupaia belangeri). Zoological Research, 34(2): 70-76. [許凌, 范宇, 蔣學(xué)龍, 姚永剛. 2013. 樹鼩進(jìn)化分類地位的分子證據(jù). 動(dòng)物學(xué)研究, 34(2): 70-76.]

Ye YS, Han YY, Huan ZQ, Lu CX, Jiang QF, Sun XM, Dai JJ. 2011.Measurement and analysis of the weight and coefficients of major organs in wild adult tree shrews. Chinese Journal of Comparative Medicine, 21(4):62-65. [葉尤松, 罕園園, 黃璋瓊, 陸彩霞, 江勤芳, 孫曉梅, 代解杰.2011. 野生成年樹鼩主要臟器重量及臟器系數(shù)的測(cè)定分析. 中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志, 21(4): 62-65.]