盧 寧，佟繼銘，張樹峰

(河北省中藥研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所，河北承德 067000)

大黃為蓼科植物掌葉大黃、唐古特大黃或藥用大黃的干燥根及根莖[1]。大黃藥用歷史悠久，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，是中藥組方中應(yīng)用范圍最大、使用頻率最高的幾種重要中藥之一，已作為一種世界性藥物載入19個(gè)國(guó)家的藥典中[2]。大黃的化學(xué)成分主要有蒽醌類、二蒽酮類、苯丁酮苷類、二苯乙烯苷類、鞣質(zhì)類、多糖類等，具有明顯的瀉下、解熱和抗炎作用[3-4]?，F(xiàn)代研究表明，大黃具有抗菌、抗病毒、延緩衰老等作用[5]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，約有800多種中藥制劑中含有大黃，一般認(rèn)為大黃毒性較低，臨床應(yīng)用比較安全，大多數(shù)降脂減肥、排毒養(yǎng)顏類中成藥中也含有大黃，以致應(yīng)用大黃的時(shí)間過長(zhǎng)，導(dǎo)致大黃相關(guān)的不良反應(yīng)發(fā)生率增高[6]。本課題組前期研究探討了大黃對(duì)雌性大鼠生殖系統(tǒng)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)期使用大黃可導(dǎo)致大鼠卵巢指數(shù)降低，卵巢內(nèi)各級(jí)卵泡數(shù)量減少、閉鎖卵泡數(shù)增多，卵泡內(nèi)細(xì)胞排列紊亂;大鼠子宮指數(shù)降低，內(nèi)膜腺體數(shù)量減少、腺腔不規(guī)則，肌纖維稀疏。說明長(zhǎng)期使用大黃對(duì)卵巢、子宮的組織結(jié)構(gòu)均有一定的損傷，且隨用藥時(shí)間延長(zhǎng)逐漸加重。本研究旨在探討長(zhǎng)期使用大黃對(duì)雌性大鼠血清雌二醇(E2)、黃體生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)水平的影響，為客觀評(píng)價(jià)大黃的毒性及臨床合理用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥 大黃(Rheum palmatum L)，安國(guó)市長(zhǎng)安中藥材有限公司，批號(hào):20090902，經(jīng)承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所劉翠哲研究員鑒定為掌葉大黃的干燥根莖;大鼠E2(批號(hào):DRE20048)、LH(批號(hào):DRE20139)、FSH(批號(hào):DR E20049) ELISA 試劑盒，上海索寶。Multiskan MK3酶標(biāo)儀，美國(guó)Thermo。

1.2 大黃水提取物的制備 大黃藥材粉碎為粗粉，10倍水浸泡兩次，合并提取液、過濾，40℃濃縮至生藥量含量為0.4g/ml備用。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及處理 8周齡雌性Wistar大鼠9只，體重180-220g，SPF級(jí)，購(gòu)自北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證號(hào):SCXK(京)2009-0008。大鼠隨機(jī)分組，每組10只:正常對(duì)照組，大黃水提取物1.0g/kg和2.0g/kg劑量組;大黃各劑量組再分為用藥30、40、50 60d組，分別灌胃給予不同劑量的大黃水提物30d、40d 50d和60d。

1.4 指標(biāo)檢測(cè) 各組大鼠于給藥結(jié)束后第2d腹主動(dòng)脈采血，3500r/min離心10min取血清，-20℃冰箱保存，采用ELISA法檢測(cè)大鼠血清E2、LH和FSH的水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 使用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，結(jié)果以(±s)表示，行t檢驗(yàn)、方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

與正常對(duì)照組比較，各給藥組大鼠血清E2水平降低LH、FSH水平升高;大黃給藥劑量為2.0g/kg時(shí)，給藥50d、60d的大鼠血清E2水平明顯低于正常對(duì)照組，LH FSH水平明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.01，P＜0.05)。不同作用時(shí)間比較:大黃1.0g/kg劑量組，與給藥30d比較給藥60d的大鼠血清E2水平明顯降低、LH和FSH水平明顯升高(P＜0.05);大黃2.0g/kg劑量組，與給藥30d 40d比較，給藥50d、60d的大鼠血清E2水平明顯降低、LH和FSH水平明顯升高(P＜0.05)。不同給藥劑量、相同給藥時(shí)間比較:與1.0g/kg劑量組同時(shí)間點(diǎn)比較，2.0g/kg劑量組給藥給藥50d、60d的大鼠血清E2水平明顯降低、LH和FSH水平明顯升高(P＜0.05)。見附表。

附表 大黃對(duì)雌性大鼠血清E2、LH和FSH水平的影響( ±s，n=10)

附表 大黃對(duì)雌性大鼠血清E2、LH和FSH水平的影響( ±s，n=10)

與正常對(duì)照組比較:aP＜0.01，bP＜0.05;與同劑量30d比較:cP＜0.05，與同劑量40d比較:dP＜0.05;與1.0g/kg組同時(shí)間點(diǎn)比較:eP＜0.05

組別 給藥時(shí)間(d) E2(ng/L) LH(ng/L) FSH(IU/L)正常對(duì)照組 -- 49.88±6.64 1363.60±250.5 5.75±0.95 30 47.8.±5.60 1364.90±200.6 5.75±1.35大黃 40 47.35±5.70 1367.3±208.9 5.75±1.2(1.0g/kg) 50 46.95±5.95 1376.20±226.1 5.85±1.15 60 46.31±8.66c 1399.05±205.1c 5.95±1.05c 30 46.61±5.89 1368.05±211.8 5.95±1.01大黃 40 44.66±8.97 1512.81±230.5 6.20±1.45(2.0g/kg) 50 37.35±5.94acde 1630.55±245.35bcde 6.65±0.75bcde 60 35.90±4.53acde 1646.41±163.8bcde 7.10±1.10bcde

3 討論

黃體生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)是腦垂體前葉分泌的糖蛋白激素，能促進(jìn)卵泡成熟[7];FSH在卵泡期刺激卵泡發(fā)育并調(diào)控E2及其它雌性激素的產(chǎn)生，與黃體生成素(LH)協(xié)同作用導(dǎo)致排卵[8]。隨著年齡增長(zhǎng)絕經(jīng)期的到來，卵巢功能降低，雌激素分泌減少，對(duì)LH和FSH的反饋抑制作用減弱，導(dǎo)致血中FSH、LH水平升高[9]?；A(chǔ)FSH值是衡量卵巢儲(chǔ)備功能常用的指標(biāo)，但臨床上常發(fā)現(xiàn)，年輕不孕婦女(年齡＜35歲)或基礎(chǔ)FSH值正常者，也存在卵巢低反應(yīng)現(xiàn)象[10-11]。

本研究結(jié)果顯示，長(zhǎng)期使用大黃可使成年雌性大鼠血清E2水平降低，LH、FSH水平升高，其中大劑量(2.0g/kg)給藥50d、60d組變化最為明顯，與正常對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?？梢?，E2、LH、FSH水平的改變與大鼠卵巢損傷具有一定的聯(lián)系。如果卵巢發(fā)育不良或早衰，卵巢本身出現(xiàn)排卵異?；虿慌怕?，分泌的雌激素水平會(huì)比較低，從而刺激機(jī)體分泌更多的LH和FSH。但由于卵巢功能不良，F(xiàn)SH水平再高卵泡也不能發(fā)育，從而導(dǎo)致雌激素水平的進(jìn)一步降低。

本研究中E2、LH和FSH水平的改變可充分證明，長(zhǎng)期使用大黃可影響雌性大鼠的性激素水平，本研究可為臨床合理用藥提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典2010年版[S]．一部.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.22．

[2]閆美娟，隋峰，林娜.大黃調(diào)節(jié)胃腸功能的作用及機(jī)制研究進(jìn)展[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16(4):181-184.

[3]傅興圣，陳菲，劉訓(xùn)紅.大黃化學(xué)成分與藥理作用研究新進(jìn)展[J].中國(guó)新藥雜志，2011，20(16):1535-1537.

[4]楊偉鵬，王怡薇.不同炮制方法對(duì)大黃瀉下、解熱、抗炎作用的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17(13):117-119.

[5]高學(xué)敏.中藥學(xué)(上冊(cè))[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2009.595-607.

[6]曹俊嶺，孫玉琦，肖小河，等.對(duì)大黃“毒性”的認(rèn)識(shí)與思考[J].世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2007，2(2):112-114.

[7]吳端宗，林國(guó)誠(chéng).ELISA測(cè)定血清LH、FSH 的方法學(xué)評(píng)價(jià)[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2002，17(2):15-16.

[8]杜宇，陳建魁，左向華，等.國(guó)內(nèi)乳腺癌患者性激素三項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定現(xiàn)狀及應(yīng)注意的問題[J].中華乳腺病雜志，2012，6(3):334-339.

[9]尹伯元.放射免疫在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用[M].北京:原子能出版社，1991.161.

[10]Kumbak B, Oral E, Kahraman S, et al. Young patients with diminished ovarian reserve undergoing assisted reproductive treatments: a preliminary report[J]. Reprod Biomed Online, 2005,11(3): 294-299.

[11]Weghofer A, Margreiter M, Fauster Y, et al. Age-speci fi c FSH levels as a tool for appropriate patient counselling in assisted reproduction [J]. Hum Reprod, 2005, 20(9):2448-2452.