周治德，宋 凡，李桂銀*

（桂林電子科技大學(xué) 生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，廣西 桂林 541004）

蘆薈（aloe）為百合科多年生常綠草本植物，具有醫(yī)藥、食用、保健、美容和觀賞等作用[1]。蘆薈中含有蒽醌類化合物、蘆薈多糖、氨基酸、有機(jī)酸、維生素、礦物質(zhì)、酶等功效成分，可用于食品、藥品、化妝品，具有提高免疫力、抗氧化、保濕、美容等保健功效[2-4]。QB/T 2489—2007《食品原料用蘆薈制品》規(guī)定了原色全葉蘆薈冷凍干燥粉的生產(chǎn)工藝及其質(zhì)量指標(biāo)，其中規(guī)定了功效成分蘆薈苷含量和O-乙?；?。羅漢果是葫蘆科多年生草質(zhì)藤本植物，為衛(wèi)生部首批公布的藥食兩用名貴中藥材，被人們譽(yù)為“神仙果”。其營養(yǎng)價(jià)值很高，含羅漢果苷類，其中羅漢果苷V是羅漢果干果的主要成分，約占干果的0.5%。另外含有葡萄糖、果糖、多糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、黃酮苷類、維生素C和多種礦物質(zhì)元素；其味甘性涼，歸肺、大腸經(jīng)，有潤肺止咳，生津止渴的功效，適用于肺熱或肺燥咳嗽，百日咳及暑熱傷津口渴等，此外還有抗氧化、潤腸通便的功效[5-6]。將蘆薈和羅漢果復(fù)配組方，然后進(jìn)行體外抗氧化作用考察鮮見報(bào)道。

本研究以原色全葉蘆薈凍干粉和羅漢果提取物為主要原料，以蘆薈乙酰化多糖和羅漢果苷V為功效成分，用體外抗氧化試驗(yàn)來確定原色全葉蘆薈凍干粉和羅漢果提取物的科學(xué)配比。并通過測定吸濕率、裝量差異、崩解時(shí)限等指標(biāo)，采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)考察各類輔料及用量對膠囊劑處方的影響。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

原色全葉蘆薈凍干粉：云南萬綠生物股份有限公司；羅漢果提取物：桂林三寶藥業(yè)有限公司；羅漢果苷（V）標(biāo)準(zhǔn)品：廣西分析測試中心提供；三羥甲基氨基甲烷（分析純）：天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；焦性沒食子酸（鄰苯三酚）（分析純）：遵義林源醫(yī)療化工有限責(zé)任公司；微晶纖維素、硬脂酸鎂、β-環(huán)糊精、藥用淀粉、滑石粉均為藥用標(biāo)準(zhǔn)：安徽山河藥用輔料股份有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

SB-5200D超聲波清洗機(jī)：寧波新芝生物科技股份有限公司；WYA-2W阿貝折光儀、752N紫外-可見分光光度計(jì)：上海精密科學(xué)儀器有限公司；AL-104電子分析天平：北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；MCFD8512冷凍干燥機(jī)：韓國Ilshin公司；1100型高效液相色譜儀：美國Agilent公司；SPX-250-Z振蕩培養(yǎng)箱：上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司。

1.3 方法

1.3.1 原色全葉蘆薈凍干粉和羅漢果提取物制備

原色全葉蘆薈凍干粉制備工藝[7-9]：

蘆薈→榨汁→酶解→過濾→微濾→納濾→冷凍干燥

羅漢果提取物制備工藝[10-11]：

羅漢果→水提→濃縮→大孔樹脂→濃縮→噴霧干燥

1.3.2 膠囊制作工藝[12]

原輔料粉碎→稱量→混合→制粒→干燥→填充

1.3.3 體外抗氧化實(shí)驗(yàn)[13-15]

鄰苯三酚自氧化法：用0.1mmol/L的鄰苯三酚為測活系統(tǒng)，在50mmol/L Tris-HCl緩沖液（pH8.2）中，以325nm作為測試波長，測定4min內(nèi)325nm的紫外吸光度值（每30s測定一次），繪制線性圖，求得線性回歸后直線的斜率，將加入原色全葉蘆薈凍干粉和羅漢果提取物的復(fù)配物所得直線斜率和鄰苯三酚自氧化直線斜率相比較，確定不同比例復(fù)配物的相對抗氧化能力來尋找抗氧化能力最佳的原色全葉蘆薈凍干粉和羅漢果提取物復(fù)配比例。體外抗氧化試驗(yàn)步驟為：

取2.98mL Tris-HCl緩沖液和0.02mL 10mmol/L HCl溶液混勻后在25℃水浴中保溫20min作為空白管；2.98mL Tris-HCl緩沖液和0.01mL 10mmol/L HCl溶液混勻后在25℃水浴中保溫20min，保溫后立即加入25℃預(yù)熱過的鄰苯三酚0.01mL作為自氧化管，迅速搖勻后倒入比色杯每30s記錄一次A325nm值，記錄4min內(nèi)的A值。計(jì)算4min線性范圍內(nèi)的A325nm值斜率（即自氧化速率）。加鄰苯三酚之前先加0.01mL不同濃度的復(fù)配物藥液，即為不同濃度復(fù)配物藥液的抗氧化管，用上述相同方法計(jì)算所得A325nm值的斜率即為抗氧化速率，和自氧化速率相比即可得出不同濃度藥液的相對抗氧化速率。若相對抗氧化速率值小，則該物質(zhì)的抗氧化能力強(qiáng)。體外抗氧化試驗(yàn)試劑加入量見表1。

表1 體外抗氧化試驗(yàn)試劑Table1 Antioxidant test reagentsin vitro

1.3.4 膠囊配方確定[16-17]

先用單因素試驗(yàn)確定填充劑、崩解劑和潤滑劑的種類和用量。以主藥的作用功效、吸濕率、崩解時(shí)限和裝量差異為質(zhì)量評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，通過設(shè)計(jì)4因素3水平的L9（34）正交試驗(yàn)確定膠囊的配方，正交試驗(yàn)因素水平見表2。

表2 膠囊配方確定正交試驗(yàn)因素水平Table 2 Factors and levels of orthogonal test for the optimization of capsule formula

1.3.5 含量測定

蘆薈乙酰化多糖[18]：采用QB/T 2489—2007《食品原料用蘆薈制品》方法，檢測O-乙?；俊?/p>

羅漢果苷V[19]：采用高效液相色譜法，用羅漢果苷V作為參照物，色譜條件為色譜柱：Sinochrom ODS 2BP柱（200mm×4.6mm）；檢測器：二極管陣列檢測器；柱溫：25℃；流速：0.8mL/min；進(jìn)樣量：10μL；檢測波長：205nm；流動(dòng)相：0.05%三氟乙酸-乙腈。

2 結(jié)果與分析

2.1 體外抗氧化實(shí)驗(yàn)

分別將羅漢果提取物與原色全葉蘆薈凍干粉的比例設(shè)置為1∶1；2∶1和4∶1，進(jìn)行體外抗氧化實(shí)驗(yàn)，確定蘆薈羅漢果膠囊中的主藥組成，做3組平行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。其中抗氧化管1為羅漢果提取物與原色全葉蘆薈凍干粉的比例為1∶1，抗氧化管2為羅漢果提取物與原色全葉蘆薈凍干粉的比例為2∶1，抗氧化管3為羅漢果提取物與原色全葉蘆薈凍干粉的比例為4∶1。

表3 體外抗氧化試驗(yàn)結(jié)果Table 3 Data of the antioxidant testin vitro

由表3可知，各個(gè)抗氧化管的抗氧化速率小于自氧化速率，抗氧化管具有抗氧化活性，抗氧化速率的數(shù)值越小表示抗氧化能力越強(qiáng)。3次實(shí)驗(yàn)結(jié)果都表明抗氧化管3的相對抗氧化速率值小，說明按此比例復(fù)配抗氧化能力強(qiáng)。也就是說當(dāng)羅漢果提取物和原色全葉蘆薈凍干粉比列為4∶1時(shí)體外抗氧化作用效果較好。

2.2 單因素試驗(yàn)

本次研究所選用的主藥為羅漢果提取物和原色全葉蘆薈凍干粉?？疾靸烧叩奈锢硇再|(zhì)可知，原色全葉蘆薈凍干粉的吸濕非常嚴(yán)重，暴露于空氣（相對濕度75%）中0.5h即結(jié)成黏塊，而羅漢果提取物相對吸濕非常少，故加入填充劑改善其吸濕性顯得尤為重要；羅漢果提取物極易溶于水和乙醇，溶解速度也較快，原色全葉蘆薈凍干粉易溶解于水，但溶解速度較慢，故需加入一定量的崩解劑；羅漢果提取物休止角為30°左右，流動(dòng)性較好，而原色全葉蘆薈凍干粉黏度大，極難流動(dòng)，故需將物料制成顆粒，并加入潤滑劑以改善流動(dòng)性；將兩者按比例混合試制顆粒，加潤濕劑時(shí)發(fā)現(xiàn)，由于原色全葉蘆薈凍干粉對水的親和力極佳，故必須加入純乙醇來制顆粒，且制顆粒時(shí)需迅速，以免乙醇揮發(fā)造成水分的摻入導(dǎo)致結(jié)塊。

2.2.1 填充劑的選擇

選擇幾種吸濕性較好的填充劑（甘露醇、麥芽糊精和藥用淀粉）與主藥藥粉混合，做吸濕性研究，將選取的各種填充劑輔料2.5g放入稱過質(zhì)量的稱量瓶中，同時(shí)加入2.5g羅漢果提取物：原色全葉蘆薈凍干粉4∶1比例的主藥藥粉吸濕24h后稱質(zhì)量，計(jì)算其吸濕率（實(shí)驗(yàn)時(shí)環(huán)境相對濕度為75%）。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見圖1。

圖1 不同填充劑對吸濕性的影響Fig.1 Effect of different fillers on the moisture absorption rate

由圖1可知，所選4種填充劑均能不同程度的降低主藥藥粉的吸濕率。但是甘露醇本身結(jié)塊嚴(yán)重，甘露醇也不易與主藥混合。羥丙纖維素休止角較大，流動(dòng)性較差。因此選擇藥用淀粉和麥芽糊精兩種作為填充劑，按照不同比例與等量主藥混合以確定藥用淀粉和麥芽糊精之間的最佳比例。

2.2.2 混合填充劑比例的選擇

選擇藥用淀粉和麥芽糊精作為混合填充劑，按照不同比例與等量主藥混合以確定藥用淀粉和麥芽糊精之間的最佳比例，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見圖2。

由圖2可知，吸濕率最低的兩種填充劑的比例，對應(yīng)于藥用淀粉量占填充劑總量為50%、60%、80%（對應(yīng)于整個(gè)體系的用量為20%、28%、36%）。故選取這3個(gè)比例作為填充劑因素的3個(gè)水平來進(jìn)一步做正交試驗(yàn)以確定其比例。

圖2 混合填充劑比例對吸濕性的影響Fig.2 Effect of hybrid filler ratio on the moisture absorption rate

2.2.3 主藥用量的選擇

選擇不同的主藥用量（主藥與填充劑比），考察對顆粒吸濕性的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖3。

圖3 主藥用量對吸濕率的影響Fig.3 Effect of the amount of main drug on the moisture absorption rate

由圖3可知，填充劑的加入能夠明顯降低主藥的吸濕性。而且隨著填充劑比例的增加，吸濕性進(jìn)一步降低。然而同時(shí)需要考慮填充劑的增多對主藥藥效的影響，故選取40%、50%、60%三個(gè)比例為主藥用量因素的3個(gè)水平進(jìn)一步做正交試驗(yàn)以確定最優(yōu)填充劑比例。

2.2.4 崩解劑的選擇

選擇藥用淀粉與麥芽糊精的比例為1∶1，羅漢果提取物與原色全葉蘆薈凍干粉比例為4∶1，填充劑與主藥比例為1∶1，再分別加入0%、5%、10%、15%、20%的崩解劑微晶纖維素制成顆粒，加入0.5%的潤滑劑滑石粉裝膠囊，按照藥典規(guī)定[11]測其崩解時(shí)限，結(jié)果見圖4。

由圖4可知，隨著崩解劑微晶纖維素的加入，所制備膠囊的崩解時(shí)間縮短。選取崩解劑的3個(gè)水平10%、15%、20%進(jìn)一步做正交試驗(yàn)加以確定。

2.3 膠囊配方優(yōu)化正交試驗(yàn)

根據(jù)膠囊制作工藝，先確定膠囊主要的輔料：填充劑為藥用淀粉和麥芽糊精；崩解劑為微晶纖維素，潤滑劑選滑石粉，滑石粉的用量參考資料[16]，選擇1.5%、2.0%和2.5%進(jìn)行試驗(yàn)。考慮產(chǎn)品的吸濕率、裝量差異、崩解時(shí)限等指標(biāo)，采用單因素試驗(yàn)，確定影響產(chǎn)品的4個(gè)主要因素是A主藥用量，B藥用淀粉用量，C微晶纖維素用量，D滑石粉用量，然后確定正交試驗(yàn)方案。膠囊配方確定正交試驗(yàn)結(jié)果見表4，方差分析見表5。

由正交試驗(yàn)（表4）分析結(jié)果可知，影響配方各種特性的因素按影響大小排序?yàn)橹魉幱昧浚ˋ）＞藥用淀粉（填充劑）（B）＞滑石粉（潤滑劑）（D）＞微晶纖維素（崩解劑）（C）。由方差分析（表5）可知，因素A（主藥量）的偏差平方和最大，說明試驗(yàn)中測定值的差異最大，并且F比也最大。但是所有因素中，F(xiàn)比都小于F臨界值（α=0.05），故實(shí)驗(yàn)結(jié)果的顯著性都不明顯。

圖4 崩解劑用量對崩解時(shí)間的影響Fig.4 Effect on the disintegration agent dosage on disintegration time

表4 膠囊配方確定正交試驗(yàn)結(jié)果Table 4 Results of orthogonal test for the optimization of capsule formula

表5 膠囊配方確定正交試驗(yàn)方差分析Table 5 Variance analysis of orthogonal test for the optimization of capsule formula

對于一種膠囊制劑來說，最重要的是該藥物的作用功效（主要受主藥影響），其次為該制劑的吸濕穩(wěn)定性（主要受填充劑影響），其次為其裝量差異穩(wěn)定性（主要受潤滑劑影響），最后為該制劑的崩解能力（主要受崩解劑影響）。得出正交試驗(yàn)最優(yōu)水平組合為A3B3C2D2，即最佳配方為主要原料復(fù)配物40%，藥用淀粉36%，麥芽糊精9%，微晶纖維素15%，外加滑石粉2.0%。

2.4 正交試驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證

根據(jù)最優(yōu)組方制作出的一批蘆薈羅漢果復(fù)方膠囊，檢測其抗氧化速率，顆粒吸濕性、崩解時(shí)間、羅漢果苷V及O-乙?；康雀黜?xiàng)指標(biāo)，試驗(yàn)結(jié)果見表6。

表6 最優(yōu)組方的試驗(yàn)結(jié)果Table 6 Experimental results of the optimal prescription

3 結(jié)論

本研究以蘆薈、羅漢果為主要原料，將原色蘆薈全葉凍干粉、羅漢果提取物以及多種輔料等進(jìn)行復(fù)配組方。通過體外抗氧化試驗(yàn)確定蘆薈羅漢果復(fù)方膠囊中主要原料羅漢果提取物與原色全葉蘆薈凍干粉的比例為4∶1。采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)方法確定了復(fù)方膠囊中輔料的種類和用量，最佳配方為主要原料復(fù)配物40%，藥用淀粉36%，麥芽糊精9%，微晶纖維素15%，外加滑石粉2.0%。通過組方和膠囊制備工藝，得到一種具有一定保健功效和穩(wěn)定質(zhì)量的蘆薈羅漢果復(fù)方膠囊，通過功效成分檢測，羅漢果苷V含量為5.1%，O-乙?；繛?.2%。

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