劉瑩，謝寧，徐麗，關慧波

(黑龍江中醫(yī)藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040)

地黃飲子出自宋代劉河間的《黃帝素問宣明論方》，具有滋腎陰，補腎陽，開竅化痰之功，主治瘖痱證。癥見舌強不能言，足廢不能用，口干不欲飲，苔浮膩，脈沉遲細弱。中醫(yī)學認為，生、長、壯、老的生命過程，取決于腎中精氣的盛衰。高等生物活動能力受神經(jīng)系統(tǒng)支配，活動能力的強弱直接反應了神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育程度。為探討地黃飲子對促進神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的作用，本研究觀察了地黃飲子對果蠅攀爬能力的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

黑腹果蠅(Drosophila Melanogaster)，野生型Canton special(CS)果蠅，由中國科學院上海生命科學研究院生物化學與細胞生物學研究所果蠅資源與技術平臺提供。

地黃飲子飲片由松茂藥材公司提供。

基礎培養(yǎng)基(空白組)的制備:玉米粉42g，蔗糖31g，瓊脂3g，酵母粉3g加入460ml蒸餾水中，加熱，不斷攪拌，煮沸約4min，加入丙酸2.5g攪拌均勻，待涼后倒入經(jīng)高溫滅菌，高12cm，直徑3cm指管中，培養(yǎng)基厚度為1～1.5cm。

地黃飲子培養(yǎng)基的制備:在基礎培養(yǎng)基中分別加入地黃飲子飲片粉末，制備成1%、2%、4%濃度地黃飲子培養(yǎng)基。

1.2 方法

1.2.1 分組方法 收集8h內(nèi)羽化但未交配的果蠅用二氧化碳麻醉后雌雄分組，取雄性果蠅進行實驗。取1天齡果蠅全部喂食普通培養(yǎng)基;在第9天將喂食普通培養(yǎng)基的果蠅約90只，分成3組，分別喂食1%、2%、4%地黃飲子培養(yǎng)基，第14天進行攀爬能力測試，即用1%、2%、4%濃度的地黃飲子培養(yǎng)基喂5天與空白組進行測試，全部被測試果蠅為14天齡。測試時取1%組22只蠅，2%組21只，4%組22只，空白組21只，分別放入指管中。

1.2.2 測試方法 在暗室紅燈下進行測試，將待測試果蠅放入空指管內(nèi)適應5min，輕彈指管使果蠅至管底部，計時10s，到達指管頂部的果蠅數(shù)(A)，每組至少測試5次，取平均數(shù)，每次間隔1min。計算攀附指數(shù)CI=A/總數(shù)。在不同濃度組與空白組之間進行統(tǒng)計學分析。

1.2.4 時效關系實驗 根據(jù)以上數(shù)據(jù)確定將最佳濃度的地黃飲子培養(yǎng)基。取1天齡果蠅全部喂普通培養(yǎng)基，分別在第7天、9天、11天、13天取喂普通培養(yǎng)基的果蠅約120只，分成3組，用最佳濃度的地黃飲子培養(yǎng)基喂養(yǎng)，第14天進行攀爬能力測試，即用最佳濃度地黃飲子培養(yǎng)基喂養(yǎng)果蠅1天、3天、5天、7天與空白組進行測試，全部被測試果蠅為14天齡。測試時1天組取21只蠅，3天組取22只，5天組取21只，7天組取22只，空白組21只，分別放入指管中。

2 結(jié)果

2.1 不同濃度地黃飲子對果蠅攀爬能力的影響 見表1。

表1 不同濃度地黃飲子對果蠅攀爬能力的影響(±s)

表1 不同濃度地黃飲子對果蠅攀爬能力的影響(±s)

注:與空白組比較，*P＜0.05;與2%組比較，#P＜0.05。

組別 n 攀爬指數(shù)(%)1%組 22 47.74 ±2.52*#2%組 21 55.22 ±6.38*4%組 22 34.56 ±2.52*#空白組 21 24.78 ±6.18#

2.2 不同給藥天數(shù)對果蠅攀爬能力的影響 見表2

表2 不同給藥天數(shù)對果蠅攀爬能力的影響(±s)

表2 不同給藥天數(shù)對果蠅攀爬能力的影響(±s)

注:與5天組比較，*P＜0.05。

組別 n 攀爬指數(shù)(%)1 天組 21 43.82 ±6.21*3 天組 22 43.60 ±2.47*5 天組 21 55.22 ±6.38 7 天組 22 48.18 ±5.21空白組 21 24.78 ±6.18*

3 討論

果蠅基因組的測序工作在2000年已經(jīng)結(jié)束，并確定了果蠅細胞中含有月13 600個基因［1］，分析人類與果蠅基因組序列發(fā)現(xiàn)，兩種生物具有很多同源基因，在人類已知的714個遺傳性疾病的致病基因中，果蠅具有548個同源基因，其中包括與人類神經(jīng)退行性疾病同源的基因［2］。另一方面，果蠅個體小，繁殖周期短，繁殖能力強，且雌雄易于分辨;果蠅只有四對染色體，第一對為性染色體，其他三對是常染色體，第二、三對常染色體包含了80%左右的遺傳信息，第四對常染色體僅包含2%左右的遺傳信息，這樣的染色體組雖然小但是很全面使我們更容易進行遺傳學的研究［1］。因此，將果蠅作為人類遺傳學研究，特別是神經(jīng)系統(tǒng)疾病研究有著巨大的實用價值。正常果蠅具有反趨地性行為，即在一個垂直地面的空間會自發(fā)地向上運動［3］。通過觀察果蠅在垂直管內(nèi)的攀爬情況測試其運動能力，在一定程度上反應果蠅神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育程度。

地黃飲子一方面要溫補下元，攝納浮陽;另一方面開竅化痰，宣通心氣，上下并治，標本兼顧，而以本為主，廣泛應用于治療腦血管及神經(jīng)系統(tǒng)疾?。?］。實驗結(jié)果表明，地黃飲子高、中、低劑量組均可改善果蠅的攀爬能力，其中2%濃度的地黃飲子對果蠅攀爬能力影響最大(P＜0.05);在給藥時間方面，給藥5天組果蠅的攀爬能力明顯高于1天組和3天組(P＜0.05)，但5天組與7天組相比較，無明顯差異。本實驗說明，地黃飲子可以改善果蠅的運動能力，在一定程度上提高其神經(jīng)系統(tǒng)功能。

［1］劉力.果蠅:基因、腦和行為［J］.世界科技研究與發(fā)展，22(6):47.

［2］溫艾，劉力.以果蠅模型研究人類神經(jīng)退行性疾病［J］.生物化學與生物物理進展，2003，30(3):357.

［3］Chiara Cirelli.Cellular consequences of sleep deprivation in the brain［J］.Sleep Medicine Reviews，2006，10:307 － 321.

［4］周妍妍，姚辛敏，何秀麗，等.地黃飲子對老年性癡呆神經(jīng)保護作用的實驗研究［J］.中醫(yī)藥學報，2011，39(2):58－61.