黃忠鈞，張艷，孟憲生，王思尹

(1.沈陽市沈河區(qū)婦嬰醫(yī)院，遼寧 沈陽 110011；2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 附屬醫(yī)院，遼寧 沈陽 110847)

參草通脈顆粒三七總皂苷提取工藝優(yōu)化研究△

黃忠鈞1，張艷2*，孟憲生2，王思尹2

(1.沈陽市沈河區(qū)婦嬰醫(yī)院，遼寧 沈陽 110011；2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 附屬醫(yī)院，遼寧 沈陽 110847)

目的：為了更好地控制參草通脈顆粒的質(zhì)量，對其主要藥味三七中的三七總皂苷優(yōu)化提取工藝，為該制劑的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。方法：采用正交試驗(yàn)法，以三七總皂苷的提取量及浸膏得率為考察指標(biāo)，優(yōu)選回流法提取三七總皂苷的最佳工藝條件。結(jié)果：三七總皂苷的最佳提取工藝為以8倍量70%乙醇回流提取4次，每次1.5 h。結(jié)論：優(yōu)選的提取工藝設(shè)計(jì)合理、簡便易行，三七總皂苷提取率高。

參草通脈顆粒；三七總皂苷；提取工藝

參草通脈顆粒是筆者經(jīng)過長期臨床實(shí)踐總結(jié)得出治療慢性心衰的經(jīng)驗(yàn)方，具有益氣活血、利水通脈的功效，臨床療效顯著，受到了廣大患者的歡迎和好評(píng)。經(jīng)過多中心、大樣本、隨機(jī)雙盲方法觀察其療效明確。三七是參草通脈顆粒的主要藥味之一，具有散瘀止血、消腫定痛的功效。作者以三七總皂苷的含量為考察指標(biāo),采用正交設(shè)計(jì)優(yōu)化三七中三七總皂苷的提取工藝[1-2],旨在制定科學(xué)經(jīng)濟(jì)的三七提取工藝,對三七的質(zhì)量進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，為參草通脈顆粒的質(zhì)量控制與推廣應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100高效液相色譜儀：手動(dòng)進(jìn)樣器、二極管陣列檢測器(DAD)，AR2140型電子分析天平(Ohaus Corps，USA)：感量0.1 mg。

1.2 試劑與試藥

三七總皂苷對照品(中國食品藥品檢定研究院)；三七(遼寧省中藥飲片有限公司)，經(jīng)鑒定為五加科植物三七Panaxnotoginseng(Burk.) F. H. Chen的干燥根。甲醇為色譜純;其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil-C18柱(200 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相：甲醇-水(80∶20);柱溫：25 ℃;檢測器：二極管陣列檢測器(DAD);檢測波長：270 nm;流量：1.0 mL·min-1。理論塔板數(shù)按三七總皂苷計(jì)算不少于3 500，分離度大于1.5。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取三七總皂苷2 mg置10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得對照品儲(chǔ)備液。精密吸取儲(chǔ)備液1 mL置10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，即得(每1 mL含三七總皂苷20 μg)。

2.3 供試品溶液的制備

取三七粉末約3 g(過三號(hào)篩)，精密稱定，按正交各試驗(yàn)條件回流提取2次，合并兩次提取液，定容，搖勻，過0.45 μm的微孔濾膜，備用。

2.4 測定方法

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定供試品中三七總皂苷的提取量。

2.5 干膏率測定

精密量取25 mL的醇提液，置于已干燥恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，移于干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量，計(jì)算干膏收率。干膏收率(%)=干膏重量/三七重量×100%。

2.6 數(shù)據(jù)處理

根據(jù)所選指標(biāo)進(jìn)行多指標(biāo)綜合評(píng)分，以各組指標(biāo)中的最大值為參照將數(shù)據(jù)進(jìn)行歸一化，分別給出權(quán)重系數(shù)。三七總皂苷(PNS)提取量和浸膏得率的權(quán)重系數(shù)分別為0.80、0.20，并計(jì)算出綜合評(píng)分進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。PNS評(píng)分=(PNS含量/最大PNS含量)×0.8；干膏收率評(píng)分=(干膏收率/最大干膏收率)×0.2；綜合評(píng)分=PNS評(píng)分+干膏收率評(píng)分。

2.7 提取工藝條件

工藝篩選為全面考察影響三七總皂苷提取的因素,首先對提取溶媒進(jìn)行考察,并采用正交設(shè)計(jì)優(yōu)化提取工藝。

2.7.1 不同醇濃度 取三七粉末(過40目)8份，每份2 g，精密稱定，分別加水、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%乙醇各20 mL，水浴加熱回流提取2次，每次1 h，取提取液分別測定三七中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re與人參皂苷Rb1的含量，見表1。

表1 不同醇濃度提取液中三七中三七總皂苷(PNS)的含量 /mg·g-1

結(jié)果表明，用70%乙醇提取時(shí)三七中三七總皂苷的提取量均較高。因此確定提取溶媒為70%乙醇。

2.7.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選擇提取次數(shù)、溶媒量、提取時(shí)間為考察因素，每個(gè)因素選擇3個(gè)水平，進(jìn)行L9(34)正交試驗(yàn)考察，優(yōu)選最佳提取條件。用加權(quán)綜合評(píng)分，以三七總皂苷(PNS)含量為主指標(biāo)(權(quán)重系數(shù)均為0.8)，干膏收率(權(quán)重系數(shù)為0.2)為次指標(biāo)，即綜合評(píng)分作為考察指標(biāo)確定三七提取條件。水平表見表2，正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表及結(jié)果見表3，方差分析見表4。

以直觀分析及方差分析對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果表明，影響提取工藝的因素主次順序?yàn)锽>C>A，其中提取次數(shù)(B)對藥材提取率影響最大，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。溶媒量(A)和提取時(shí)間(C)的水平之間差異不大。因此篩選確定提取條件為A2B3C3，即以8倍量70%乙醇回流提取4次，每次1.5 h。

2.7.3 提取正交試驗(yàn)驗(yàn)證 為了考察所選擇最佳工藝的穩(wěn)定性,需對其進(jìn)行驗(yàn)證。稱取三七粗粉3份,每份50 g,分別用8倍量70%乙醇提取4次,每次1.5 h。所得總皂苷平均值為92.15 mg·(g生藥)-1(n=3),說明所選提取工藝條件穩(wěn)定。

表2 三七回流提取因素水平表

表3 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表及結(jié)果

表4 方差分析

注：(1)n=2,(2)F0.05(2,2)=19.00

3 討論

參草通脈顆粒是治療慢性心衰的有效方劑，臨床經(jīng)過多中心、大樣本、雙盲法觀察證明了其療效突出,可以明顯改善病人癥狀，提高病人生活質(zhì)量，降低再住院率等。通過實(shí)驗(yàn)研究表明其可以改善冠脈供血，降低血黏度。主要組方藥物三七中三七總皂苷為主要活性成分, 包括人參皂苷Rg1、Rb1、Re和三七皂苷R1等多種單體皂苷[3]。現(xiàn)代藥理研究表明三七總皂苷具有改善血液系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)、滋補(bǔ)強(qiáng)壯、調(diào)節(jié)免疫等方面的作用[4-5]。目前,提取三七總皂苷的主要方法為水提法和乙醇加熱回流法[6-7]。

本文通過正交試驗(yàn)優(yōu)化三七皂苷的提取條件，結(jié)果表明三七總皂苷宜采用少量溶媒、短時(shí)間、多次數(shù)的提取工藝，可提高其提取率。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn), 三七粉碎過細(xì)時(shí),因含大量皂苷極易產(chǎn)生泡沫和暴沸,不適宜大生產(chǎn)。實(shí)驗(yàn)所確定最佳乙醇回流工藝為8倍量70%乙醇回流提取4次，每次1.5 h，具有耗醇量少、提取率高、質(zhì)量穩(wěn)定、重復(fù)性好，表明該提取工藝合理可行，為優(yōu)選三七總皂苷的提取工藝提供了科學(xué)依據(jù)，為參草通脈顆粒的質(zhì)量控制與推廣應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)[6-7]。

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StudyonExtractionProcessofTotalSaponinsofPanaxnotognsengfromShencaoTongmaiGranule

HUANG Zhong-jun1, ZHANG Yan2*, MENG Xian-sheng2, WANG Si-yin2

(1.ShenheMaternalandInfantHospitalofShenyang,Shenyang110011，China；2.TheHospitalAffiliatedtoLianningUniversityofTCM,Shenyang110847，China)

Objective：To develo Pquality control method of Shencao Tongmai Granule.Explore the best conditions of extract total saponins fromPanaxnotognsengby ethanol.Methods:Examined total saponins ofPanaxnotognsengand Yield of extract by orthogonal design to optimize refluxing method.Results:The optimal extraction process was refluxing four times with 8 times the amount of 70% alcohol,1.5 hours each time.Conclusion:Optimization extraction process design is reasonable and available，extraction rate of Tanshinone is higher.

Shencao Tongmai Granule;Total saponins ofPanaxnotognseng;Extraction technology

2012-10-16)

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國家十一五科技支撐計(jì)劃——中醫(yī)治療常見病研究：中醫(yī)藥干預(yù)慢性心衰的臨床治療方案研究(2007BAI20B076)

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張艷，E-mail：yanzhang1016@126.com