阿莫西林脂質(zhì)體的制備及質(zhì)量評價

李紅嬌，王 瑋，張衛(wèi)強，楊 博

(1．鄭州福源動物藥業(yè)有限公司，鄭州 450008;2．河南大學(xué)藥學(xué)院，河南開封 475004)

脂質(zhì)體是由磷脂分散在水中形成的具有雙分子層的直徑僅有幾十納米至數(shù)微米的超微球狀粒子［1］，具有有效的控制藥物釋放、控制藥物在組織內(nèi)的分布與在血液中的清除率、藥物導(dǎo)彈的靶向作用、提高治療指數(shù)、減少治療劑量和降低毒性以及對人體無毒性和無免疫抑制作用的特點［2］。目前獸藥市場上以脂質(zhì)體為載藥系統(tǒng)的劑型還不是很多，因此，研究以脂質(zhì)體為載藥系統(tǒng)的劑型則有較高的科研價值和市場價值。阿莫西林(Amoxicillin)是一種半合成的耐酸廣譜青霉素類抗生素，是目前最主要的獸醫(yī)臨床抗感染藥物，其在水中微溶，在乙醇中幾乎不溶，半衰期約為61．3 min。本研究以阿莫西林藥物為研究對象，將阿莫西林原料藥制成脂質(zhì)體，以期改善阿莫西林在體內(nèi)的留存時間，提高穩(wěn)定性、藥效，降低毒副作用，以滿足臨床用藥和獸藥新劑型發(fā)展的需求。

1 材料

1．1 儀器 RE－52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠;SHZ－D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司;JY92－ⅡN超聲波細胞粉碎機，寧波新芝生物科技股份有限公司;UV－754分光光度計，上海梭光技術(shù)有限公司;DJ－series電子天平，美國康州HZ電子科技有限公司;AB135－S電子天平，梅特勒－托利多公司;激光粒度及Zeta電位分析儀，英國Malvern公司。

1．2 試劑與藥品 阿莫西林原料藥(批號3081092059，珠海聯(lián)邦制藥股份有限公司);膽固醇(批號20110107，上海伯奧生物科技有限公司);大豆磷脂(批號20110503，上海伯奧生物科技有限公司);Sephadex G－25(批號20090322，安瑪西亞中國有限公司);氫氧化鈉(批號20030824，天津石英鐘廠霸州市化工分廠，AR);磷酸二氫鉀(批號20040804，天津市津沽工商實業(yè)公司，AR);三氯甲烷(批號20110325，天津市富宇精細化工有限公司，AR)。

2 方法

2．1 阿莫西林脂質(zhì)體的制備 前期實驗以大豆磷脂和膽固醇為膜材，采用薄膜分散法制備阿莫西林脂質(zhì)體［3］。以包封率為指標，經(jīng)正交實驗L9(34)優(yōu)化，得到制備的最優(yōu)工藝:磷脂與膽固醇質(zhì)量比為3∶1、藥脂比為1∶4、水浴溫度為45℃、磷酸鹽緩沖液 pH 為7．4。

按最優(yōu)工藝制備阿莫西林脂質(zhì)體:取大豆磷脂和膽固醇，質(zhì)量比為3∶1，溶于20 mL三氯甲烷中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上45℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去三氯甲烷形成均一薄膜。按藥脂比1∶4稱取阿莫西林原料藥，溶于pH 7．4的PBS緩沖液中，水合2 h，取出，使用超聲波細胞粉碎機進行探頭超聲4 min，得阿莫西林脂質(zhì)體混懸液。葡聚糖凝膠分離除去未包封的阿莫西林，冷凍干燥得阿莫西林脂質(zhì)體。

2．2 紫外分光光度法確定測定波長［4－5］取適量阿莫西林原料藥溶于蒸餾水中，配成適當(dāng)濃度，以蒸餾水為空白，在200～400 nm波長范圍內(nèi)掃描。紫外掃描表明:阿莫西林在蒸餾水溶液中的最大吸收波長為272 nm;而大豆磷脂和膽固醇在此波長處不影響阿莫西林藥物的含量測定。故選擇272 nm為阿莫西林的測定波長。

2．3 標準曲線繪制 取阿莫西林原料藥40．0 mg，精密稱定后溶于約80 mL蒸餾水中，定容至100 mL。分別取上述溶液 2．0、3．0、4．0、5．0、6．0、7．0 mL稀釋至10 mL容量瓶中，分別配成濃度為80、120、160、200、240、280 μg/mL 的溶液，以水為空白對照組，于272 nm處測定其紫外吸收。以濃度(C)為橫坐標，吸光度(A)為縱坐標，進行線性回歸即得標準曲線方程:A=0．0018C+0．0974，r=0．9976。由方程可知:阿莫西林在80～280μg/mL范圍內(nèi)，吸光度和阿莫西林濃度呈良好的線性關(guān)系，能夠用于阿莫西林脂質(zhì)體包封率和載藥量的測定。

3 結(jié)果

3．1 粒徑及其分布 用激光粒度及Zeta電位分析儀測量粒徑，粒徑分布見圖1。

圖1 阿莫西林脂質(zhì)體的粒徑及其分布

從圖1可以看出阿莫西林脂質(zhì)體平均粒徑為114．6 nm，分散系數(shù)為 0．218，峰的跨度小，說明粒徑分布集中、均勻。

3．2 包封率測定 采用葡聚糖凝膠法測定包封率。稱取一定量Sephadex G－25葡聚糖凝膠，煮沸2 h充分溶脹后，常法裝柱(12．3 cm×1．5 cm)。準確量取制得的阿莫西林脂質(zhì)體混懸液，在Sephadex G－25柱上洗脫，洗脫速度為0．1 mL/min，每次收集流出液1．0mL(共20mL)，然后將每次收集的液體稀釋至4．0 mL，測定其吸光度。繪制出洗脫曲線(圖2)。

圖2 阿莫西林脂質(zhì)體洗脫曲線

另收集洗脫曲線中第4～9 mL的洗脫液，用甲醇定容，超聲振蕩后測定其吸光度，代入標準曲線方程計算得出脂質(zhì)體中包封的藥物量。同理可測得脂質(zhì)體中未包封的藥物量。按公式計算包封率:

制得脂質(zhì)體樣品的包封率為(64．89±3．14)%(n=3)，具有良好的重現(xiàn)性和較高的包封率。

4 討論

4．1 利用正交試驗對薄膜法制備阿莫西林脂質(zhì)體的工藝進行優(yōu)化，重點考察了大豆磷脂與膽固醇比、藥脂比、水浴溫度、PBS緩沖液pH等因素對包封率的影響。影響的大小順序為:PBS緩沖液pH＞藥脂比＞磷脂與膽固醇之比＞水浴溫度。利用優(yōu)化工藝制得的阿莫西林脂質(zhì)體包封率較高、粒徑集中均勻，達到了研究的預(yù)期目標，發(fā)展了獸藥脂質(zhì)體新劑型。

4．2 脂質(zhì)體的包封率測定方法很多，主要有凝膠過濾法、透析法、超速離心法、超濾法及離子交換法等，其中以葡聚糖凝膠法較為常用。由于阿莫西林微溶于水，脂質(zhì)體中未包封的阿莫西林以微粒形式存在，超速離心法和超濾法在超速離心過程中使未包封藥物和脂質(zhì)體同時沉淀出來，無法分離。若用透析法進行測定，長時間透析會使脂質(zhì)體中的阿莫西林滲漏出來，影響其測定。采用葡聚糖凝膠柱分離未包封藥物和脂質(zhì)體來測定其包封率時，由葡聚糖凝膠柱的分離性質(zhì)及洗脫曲線可知，在第4到9秒內(nèi)的吸收峰為包封較完整的脂質(zhì)體中的藥物，第二個吸收峰為脂質(zhì)體中未包封的藥物。從測得的洗脫曲線中可以得知，阿莫西林脂質(zhì)體和未包封藥物分離較好，包封率測定較準確。

4．3 阿莫西林為脂溶性藥物，但不溶于三氯甲烷，微溶于水，易溶于呈酸堿性的溶液。因此采用薄膜分散法制備時將阿莫西林原料藥溶于緩沖液中制備脂質(zhì)體。制備的關(guān)鍵是類脂溶液形成均一薄膜后，加入PBS緩沖液溶解、分散阿莫西林原料藥，使之充分水合，使所制脂質(zhì)體有較高的包封率，且包封藥物不易從脂質(zhì)體中滲漏。這對于研究具有類似性質(zhì)的難溶性藥物脂質(zhì)體的制備具有一定意義。研究中對所制備的脂質(zhì)體進行了粒徑的大小和分布、包封率等的質(zhì)量評價，制備的脂質(zhì)體粒徑已達到納米級，這將有助于改善阿莫西林脂質(zhì)體在體內(nèi)的分布、提高其療效。

［1］ 黃易昆．脂質(zhì)體作為藥物載體研究進展［J］．中國藥師，2005，8(7):549－550．

［2］ 李祖惠，楊 輝．脂質(zhì)體藥物研究進展［J］．中國藥業(yè)，2005，14(10):75－76．

［3］ 孫慶雪，黃桂華，紹 偉．褪黑素脂質(zhì)體的制備及理化性質(zhì)研究［J］．山東大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2010，48(1):159 －163．

［4］ 楊 靜，李 妍，胡 旭，等．不同廠家的阿莫西林膠囊實時溶出度考察［J］．解放軍藥學(xué)學(xué)報，2009，6(25):549 －550．

［5］ 李鐵玉，李桂蘭，鐘 嘯．阿莫西林分散片的制備及性質(zhì)考察［J］．吉林醫(yī)學(xué)，2008，23(29):2158 －2160．