成仲庚
(湖南婁底職業(yè)技術(shù)學(xué)院,湖南婁底417000)
高致病性藍(lán)耳病(PPRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PPRSV)引起的以母豬繁殖障礙、仔豬和育成豬呼吸道癥狀為主要特征的一種高度接觸性傳染病,有高發(fā)病率、高死亡率、傳染速度快、耐過豬生長速度慢、成活率低等特點(diǎn),因發(fā)病后豬兩耳出現(xiàn)短暫性的紫紺現(xiàn)象而稱為藍(lán)耳病。本病發(fā)生后常破壞豬的免疫系統(tǒng),導(dǎo)致豬的抵抗力低下而容易繼發(fā)其它疾病如豬瘟、偽狂犬病、豬圓環(huán)病、豬細(xì)小病毒病、豬附紅體病、豬乙型腦炎等病,已成為影響和制約現(xiàn)代養(yǎng)豬業(yè)正常發(fā)展的重要因素。
婁底及周邊地區(qū)是湖南主要的生豬生產(chǎn)基地,有數(shù)百家規(guī)?;B(yǎng)殖場及大量的散養(yǎng)戶,近年來,豬藍(lán)耳病、豬瘟、豬附紅體病及豬圓環(huán)病等疾病時有發(fā)生,給養(yǎng)豬來造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。然后,養(yǎng)殖場及散養(yǎng)戶對疫病普遍存在重免疫卻輕視免疫監(jiān)測的現(xiàn)象,有的養(yǎng)殖場年年免疫,年年發(fā)病,有的即使進(jìn)行了多次的強(qiáng)化免疫,效果卻差強(qiáng)人意。發(fā)生這些現(xiàn)象多與飼養(yǎng)管理不善、衛(wèi)生消毒工作不嚴(yán)格、免疫措施不合理,以及沒有進(jìn)行免疫結(jié)果監(jiān)測有關(guān)。本課題組通過對婁底及周邊地區(qū)
十個規(guī)?;B(yǎng)殖場的豬藍(lán)耳病免疫情況進(jìn)行調(diào)查及抗體監(jiān)測,分析了不同監(jiān)測技術(shù)的檢測效果。針對目前在規(guī)模化養(yǎng)殖場藍(lán)耳病預(yù)防存在的一些問題,我們提出了本病的預(yù)防應(yīng)該建立在免疫監(jiān)測抗體水平的基礎(chǔ)上進(jìn)行,即根據(jù)抗體水平高低采取針對性的措施。在免疫監(jiān)測上,選用了間接血凝試驗(yàn)和ELISA試紙法,對已免疫和未免疫的養(yǎng)殖場的各種豬采取血清進(jìn)行了對比試驗(yàn)。根據(jù)其檢測結(jié)果,對兩種監(jiān)測技術(shù)進(jìn)行分析,從而比較兩種監(jiān)測技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn),為養(yǎng)殖場的抗體監(jiān)測和免疫提供依據(jù)。
試驗(yàn)豬選自婁底周邊地區(qū)10個規(guī)?;i場;診斷液和對照液(陽性和陰性血清)、豬藍(lán)耳病正向間接血凝標(biāo)準(zhǔn)致敏紅細(xì)胞稀釋液,均購自深圳某生物科技有限公司;藍(lán)耳病弱毒苗和滅活苗購自廣東某生物制藥有限公司。
藍(lán)耳病免疫方法見表1。各豬場使用的①號苗為弱毒苗,②號苗為滅活苗,免疫程序?yàn)椋悍N公豬、種母豬每年注射三次;后備母豬配種前6周注射一次,配種前4周再注射一次;仔豬斷奶前一周注射一次,四周后再注射一次;以上注射用量均為每次一頭份(2 mL)。而9、10號豬場為豬藍(lán)耳病陰性豬場,未進(jìn)行豬藍(lán)耳病疫苗注射。
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2.3.1 間接紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)
(1)采樣:對豬采取耳靜脈采血,每頭豬采血6 mL用于間接凝集試驗(yàn)和ELI SA診斷,編號后并于陰涼處靜置使其血清析出,公豬采樣率為100%,后備母豬采樣數(shù)量占存欄數(shù)量20%,在產(chǎn)母豬采樣數(shù)占存欄數(shù)量15%以上。商品豬采集樣本數(shù)量應(yīng)占存欄數(shù)量的5%以上。
(2)材料:診斷液和對照液(陽性和陰性血清);豬藍(lán)耳病正向間接血凝標(biāo)準(zhǔn)致敏紅細(xì)胞稀釋液;待檢血清。
(3)操作方法:將待檢血清放入65℃水浴中滅活半小時,先于V型血凝板上每孔中加入20 μL稀釋液,然后再取20 μL待檢血清加入第一孔,充分混合,取出20 μL放人第二孔混勻,依次到第九孔,取出20 μL棄掉。血清稀釋度從第一至第九孔分 別 為 1:2,1:4,1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256,1:512,第10孔為陽性血清對照、第11孔為陰性血清對照,第12孔為抗原對照。每孔加入20 μL致敏紅細(xì)胞,振蕩1~2分鐘,置37℃溫箱2小時,判定檢測結(jié)果。
(4)結(jié)果如表 2。
(5)判斷標(biāo)準(zhǔn)
以出現(xiàn)50%凝集的血清最高稀釋度為該血清的間接血凝價,抗體效價在1∶16陽性血清對照組抗體效價為1:512,陰性血清不發(fā)生凝集,即可判為抗體陽性,抗體效價達(dá)到1∶256為抗體水平高,可以抵抗野毒的侵襲。
2.3.2 ELISA診斷
(1)材料準(zhǔn)備:耳病抗體ELISA檢測試劑盒,編號RS 040117 A,購自深圳某生物科技有限公司。血清取自間接血凝試驗(yàn)所采樣的血清。
(2)操作方法:按ELISA檢測試劑盒說明書上操作方法進(jìn)行。
(3)結(jié)果判斷。
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儀器判斷:以空白對照調(diào)零用酶標(biāo)儀于450 n m(620 n m作參比波長)讀取O D值,待檢孔O D值大于陰性對2.1倍者為陽性。當(dāng)陰性對照O.D值低于0.07時按0.07計算。
S/P值的計算。S/P=(待檢樣品的平均值-陰性對照的平均值)/(陽性對照的平均值-陰性對照的平均值)。S/P<0.150為陰性,S/P在0.150到0.199為可疑,S/P≥0.2為陽性。
(4)結(jié)果如表3。
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間接血凝試驗(yàn)與ELISA試驗(yàn)符合率達(dá)99.69%,表現(xiàn)了高度的符合性,敏感性略低于ELISA,但操作方法簡單,檢測成本低,適用于基層技術(shù)條件低、操作技術(shù)水平較差的人員操作,可用于大規(guī)模的血清流行病學(xué)的調(diào)查和抗體水平的監(jiān)測;而ELISA試劑盒具有靈敏性高,特異性強(qiáng),穩(wěn)定性良好的特點(diǎn),能使檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確,可以真實(shí)的反映出豬藍(lán)耳病抗體水平的高低。但操作中加樣量小,手工操作要求精準(zhǔn),工作溫度及洗板都可能對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響,因此技術(shù)要求高,必須嚴(yán)格按操作規(guī)程進(jìn)行操作。
注射了疫苗的養(yǎng)殖場的陽性率都比較高,但即抗體效價在1∶256及以上的較少,因而其免疫合格率低,此種現(xiàn)象可導(dǎo)致大部分豬只缺乏抵抗野毒的侵襲。究其原因,可能與下列因素有關(guān):
(1)免疫壓力過重。在所調(diào)查的十個養(yǎng)殖場中,口蹄疫、豬瘟、豬細(xì)小病毒病、豬傳染性腹瀉等疾病時有發(fā)生。為慎重起見,往往給豬接種多種疫苗,而且多種疫苗接種的間隔時間過短,疫苗之間產(chǎn)生干擾作用,不僅使免疫應(yīng)激加重,而且使免疫壓力過重,從而導(dǎo)致免疫失敗。
(2)環(huán)境污染嚴(yán)重。養(yǎng)殖場普遍存在飼養(yǎng)密度高的問題,特別在冬季,由于門窗緊閉,通風(fēng)不良,糞便打掃不干凈或未能及時清掃,致使氨氣及硫化氫等有害氣體濃度升高,導(dǎo)致呼吸系統(tǒng)受到不良刺激,使豬群健康狀況下降,種母豬多關(guān)于定位欄中進(jìn)行飼養(yǎng),缺乏活動,身體抵抗力差,應(yīng)激頻繁,使機(jī)體的免疫應(yīng)答能力降低,其抗體始終處于較弱水平,造成免疫失敗。因此要控制藍(lán)耳病,不能完全依賴疫苗,而應(yīng)采取綜合措施。
(3)防疫程序不合理。一直以來,對豬藍(lán)耳病的免疫程序都較混亂,經(jīng)藍(lán)耳疫苗免疫后的母豬所產(chǎn)仔豬在出生后體內(nèi)往往存在母源抗體,如在母源抗體濃度高的時候就注射藍(lán)耳病疫苗,不僅不會產(chǎn)生免疫效果,反而會引起抗體水平下降,因此,對仔豬的免疫注射時間的選擇要建立在抗體水平監(jiān)測的基礎(chǔ)上進(jìn)行,但養(yǎng)殖場往往均是憑經(jīng)驗(yàn)選擇時間,這樣就會導(dǎo)致抗體效價不高,疫苗失去保護(hù)作用。免疫時應(yīng)根據(jù)各豬場的具體情況進(jìn)行適時免疫。合理的免疫程序是弱毒苗和滅活疫苗相結(jié)合的方式。用產(chǎn)生抗體較快的弱毒苗作為基礎(chǔ)免疫,用滅活疫苗進(jìn)行加強(qiáng)免疫。
(4)未按操作規(guī)程進(jìn)行注射疫苗。養(yǎng)殖場在進(jìn)行疫苗免疫時操作不規(guī)范,消毒措施不嚴(yán)格也是造成免疫效果不好的原因之一。大部分的養(yǎng)殖場雖然有專門的技術(shù)人員負(fù)責(zé)疫苗注射。但實(shí)際操作起來往往是由飼養(yǎng)人員進(jìn)行注射,在注射時針頭沒有做到一豬一針,注射部位不準(zhǔn)確,注射深度不夠,注射用量得不到保證,注射時針頭和注射部位未進(jìn)行消毒或消毒不嚴(yán)格,有的甚至采取打“飛針”進(jìn)行注射,也會造成免疫效果不佳。
本次采樣的9號和10號豬場分別是建場一年和三年的新豬場,未曾發(fā)生過豬藍(lán)耳病,因些未進(jìn)行藍(lán)耳病疫苗的注射。但從抗體檢測結(jié)果來看,雖然絕大多數(shù)為陰性,也有小部分為陽性,但抗體效價低,不足以抵抗強(qiáng)毒的侵襲。因此要加強(qiáng)對本病的監(jiān)測,如有本病發(fā)生的可能,要及時進(jìn)行免疫接種,采取相應(yīng)措施,預(yù)防本病的發(fā)生,避免造成不必要的經(jīng)濟(jì)損失。 □