舒血寧注射液中5-羥甲基糠醛的含量測定*

蘇雪清，黃燕萍

(1.廣西北海市人民醫(yī)院，北海 536000;2.廣西北海市食品藥品檢驗(yàn)所，北海 536000)

舒血寧注射液為銀杏葉經(jīng)提取制成的滅菌水溶液，收載于中藥成方制劑第十九冊。該藥具有擴(kuò)張血管，改善微循環(huán)的功效，臨床用于缺血性心腦血管疾病、冠心病、心絞痛、腦栓塞、腦血管痙攣等。近年來，中藥注射劑的用藥安全性引起了越來越多人的注意，5－羥甲基糠醛是葡萄糖或者果糖在高溫或酸性等條件下脫水產(chǎn)生的一個(gè)醛類化合物。該化合物對人體橫紋肌和內(nèi)臟有損害。在《中國藥典》2010年版中，多品種含葡萄糖的注射液中此類化合物是明確規(guī)定需要被限制的成分。從銀杏葉中分離的化學(xué)成分已被證實(shí)有200多種，包括黃酮醇苷類、萜類內(nèi)酯類、有機(jī)酸、甾醇類、生物堿類、單糖類、多糖類、氨基酸類以及微量元素等［1］。由于含有糖類，在生產(chǎn)和貯藏制劑時(shí)不可避免產(chǎn)生5－羥甲基糠醛。本實(shí)驗(yàn)參考有關(guān)文獻(xiàn)［2－5］，建立了HPLC法測定舒血寧注射液中5－羥甲基糠醛的含量，以控制該制劑中有害雜質(zhì)的量，降低該藥的用藥風(fēng)險(xiǎn)。方法簡便，準(zhǔn)確可靠，可作為該制劑的質(zhì)量控制方法之一。

1 儀器與試藥

Agilent 1200系列高效液相色譜儀，Agilent 1200 LC色譜工作站，G1322A(DEGASSER)溶劑脫氣機(jī)，G1311A(Quat Pump)四元泵，G1329A(ALS)自動(dòng)進(jìn)樣器，G1314B VWD紫外檢測器，CP225D電子天平(德國賽多利斯)，Type HT－203A column HEATER(天津市恒奧科技發(fā)展有限公司)。

5－羥甲基糠醛對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號111626－200906，用歸一化法測定其含量為99.11%);舒血寧注射液(河北神威藥業(yè)有限公司，批號11110533、11112333;山西太原藥業(yè)有限公司，批號111014);甲醇為色譜純，其他試劑為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Agilent Eclipse XDB－C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相為甲醇 － 水(5∶95);流速:0.8 ml/min;檢測波長:284 nm;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:10 μl。理論板數(shù)按5－羥甲基糠醛計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品儲(chǔ)備液的制備 精密稱取5－羥甲基糠醛對照品適量，以水為溶劑，配制成含5－羥甲基糠醛0.1996 mg/ml的貯備液。

2.2.2 供試品溶液的制備 將舒血寧注射液搖勻后直接取樣用微孔濾膜(0.45 μm)濾過即可。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 分別取對照品溶液、供試品溶液注入色譜儀，色譜圖見圖1。在該色譜條件下，5－羥甲基糠醛與相鄰組分峰的分離度均大于1.5，理論板數(shù)按5－羥甲基糠醛峰計(jì)不低于3000。

圖1 對照品(A)供試品(B)HPLC色譜圖

2.4 線性關(guān)系考查 倍比稀釋法配置成系列質(zhì)量濃度的溶液。進(jìn)樣10 μl，測定峰面積。以濃度(C)為橫坐標(biāo)，相應(yīng)峰面積(A)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程:A=94.178 C+4.7512(r=0.9999)，線性范圍:0.099 80 ～49.902 μg/ml。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取對照品溶液10 μl，按上述色譜條件進(jìn)樣，測定5－羥甲基糠醛的峰面積，重復(fù)進(jìn)樣6次，其RSD為0.16%。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品6份，依“2.2.2”項(xiàng)下方法配制，按上述色譜條件進(jìn)樣分析，結(jié)果表明，重復(fù)性良好，其RSD為0.23%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別在0、1、2、4、6、8、10 和 12 h 時(shí)進(jìn)樣 10 μl，記錄色譜峰面積，計(jì)算5－羥甲基糠醛的峰面積的RSD為0.95%。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取已測定5－羥甲基糠醛含量的舒血寧注射液(批號11110533)樣品6份各5 ml，置10 ml的量瓶中，每份分別精密加入一定量的5－羥甲基糠醛對照品，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，進(jìn)樣測定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果平均回收率為100.06%，RSD為0.45%。見表1。

表1 5－羥甲基糖醛加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.9 樣品測定 取不同批號的舒血寧注射液，按供試品溶液制備方法處理，進(jìn)行HPLC分析，以外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算5－羥甲基糠醛的含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果(n=3)

3 討論

3.1 許多中藥材都含有糖類，在提取過程中皂苷類等成分受熱后苷鍵斷裂，導(dǎo)致糖類成分的產(chǎn)生;也有可能某些生產(chǎn)企業(yè)利用添加葡萄糖來調(diào)節(jié)注射液的滲透壓而導(dǎo)致注射液中葡萄糖含量的提高。過量的5－羥甲基糠醛會(huì)對人體產(chǎn)生毒性，因此在含葡萄糖或可以降解成葡萄糖的中成藥注射液中，5－羥甲基糠醛應(yīng)作為一個(gè)重要的有關(guān)物質(zhì)加以控制，確保中成藥注射液的用藥安全。

3.2 本文建立了HPLC法測定舒血寧注射液中5－羥甲基糠醛含量的方法，供試品無需前處理，快速簡便，準(zhǔn)確可靠，為舒血寧注射液的質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

1 于清萍，寧營.銀杏葉提取物的研究進(jìn)展及市場概況［J］.上海醫(yī)藥，2010，31(8):342

2 譚俊杰，柴建國，張善飛，等.參麥注射液中5－羥甲基糠醛含量的高效液相色譜測定［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2011，21(7):1624

3 徐世霞.HPLC法測定生脈注射液中5－羥甲基糠醛的含量［J］.中國民族民間醫(yī)藥，2011，20(14):36

4 張科衛(wèi)，吳皓.小半夏湯中5－羥甲基糠醛的含量測定［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16(13):51

5 孫文，巢志茂，王淳，等.HPLC對市售瓜蔞中5－羥甲基糠醛的含量測定［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18(18):73