腸桿菌科細菌ESBLs和AmpC酶檢測及耐藥分析

荊菁華

近年來隨著抗生素等抗菌藥物在臨床的廣泛使用，細菌耐藥性逐漸增強，腸桿菌科細菌ESBLs與AmpC酶菌耐藥性呈現(xiàn)出明顯上升趨勢，臨床治療及控制感染難度較大［1］，因此對ESBLs菌和AmpC酶菌檢測結(jié)果與耐藥性分析有著重要作用，作者對河南省三門峽市中心醫(yī)院收治的68例患者標本培養(yǎng)的135株腸桿菌進行研究，現(xiàn)將實驗結(jié)果具體報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本院自2010年5月～2012年5月收治的68例患者標本培養(yǎng)的135株腸桿菌，菌種:62株大腸埃希菌，35株克雷伯菌，15株沙雷菌，9株耶爾森菌，8株變形菌，其他6株。

1.2 方法

1.2.1 研究方法 分別采用雙紙片確診試驗及雙紙片氯唑西林增效試驗分別對所有抽取菌株的ESBLs菌表型與AmpC酶菌進行檢測，對所得檢出率進行統(tǒng)計，然后分別進行藥敏試驗，比較分析非產(chǎn)酶菌與產(chǎn)酶菌之間的試驗結(jié)果。

1.2.2 檢測方法 ESBLs菌檢測:采用雙紙片確證試驗對所得菌株進行檢測，先用紙片擴散法進行表型篩選，然后經(jīng)確證試驗檢測，篩選時若頭孢噻肟抑菌環(huán)直徑≤27 mm，頭孢他啶抑菌環(huán)直徑≤22 mm，則說明菌株有產(chǎn) ESBLs可能，確證實驗時，分別在上述藥物中添加克拉維酸，比較對比未加入克拉維酸的抑菌環(huán)，增加值≥5 mm則說明產(chǎn)ESBLs。

AmpC酶菌檢測:采用雙紙片氯唑西林增效實驗檢測所抽取菌株，即用紙片擴散法進行表型篩選，然后采用改良后的Hodge試驗確證。采用紙片擴散法進行篩選時若頭孢西丁抑菌環(huán)直徑≤18 mm則說明有產(chǎn)AmpC酶菌可能性，經(jīng)確證試驗時，若頭孢西丁抑菌環(huán)變化值≥2 mm則確定產(chǎn)AmpC酶菌。

1.2.3 藥敏試驗 采用紙片擴散法進行藥敏試驗，分別測定臨床常用抗生素的耐藥性，質(zhì)控菌分別為銅綠假單胞菌ATCC27853與大腸埃希菌ATCC25922。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計學軟件處理，計量資料采用t檢驗，組間對比采用χ2檢驗，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 通過檢測，135株腸桿菌中檢出AmpC酶菌53株，檢出率為39.3%，ESBLs菌82株，檢出率為60.7%。其中單產(chǎn)ESBLs菌 45株，占 33.3%;單產(chǎn) AmpC酶菌 64株，占47.4%;產(chǎn)ESBLs及AmpC酶菌11株，占8.1%;不產(chǎn)ESBLs及AmpC酶菌15株，占11.2%。

2.2 經(jīng)藥敏試驗檢測，單產(chǎn)ESBLs菌、單產(chǎn)AmpC酶菌、產(chǎn)ESBLs+AmpC酶菌對頭孢噻肟、氨曲南、阿米卡星、氨芐西林耐藥率明顯高于非產(chǎn)AmpC酶菌，數(shù)據(jù)比較，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學意義;所有腸桿菌耐藥率均較高，P＞0.05，具體 見表1。

表1 不同菌株藥敏試驗結(jié)果分析［n(%)］

3 討論

ESBLs作為β-內(nèi)旋氨酶，能夠?qū)︻^孢霉素類、單環(huán)內(nèi)酰胺類抗生素及青霉素類等抗生素藥物產(chǎn)生水解作用，并在不同菌株間傳播及轉(zhuǎn)移。AmpC酶由不動桿菌、腸桿菌、銅綠假單胞菌等格蘭陰性桿菌產(chǎn)生，亦為β-內(nèi)旋氨酶，能夠?qū)Φ谌^霉素類、單環(huán)類及頭孢菌素類等β-內(nèi)酰胺類藥物產(chǎn)生較強的耐藥性，相較ESBLs具有更高的底物酶，同時對酶抑制劑的敏感性較差。臨床研究顯示病情重、惡性腫瘤患者及住院時間較長患者常出現(xiàn)生產(chǎn)酶的酶株，而一些存在免疫缺陷或經(jīng)常使用免疫抑制劑治療患者亦具有較高檢出率。目前國內(nèi)主要病原菌為耐CTX腸桿菌科，細菌對丁胺卡那、環(huán)丙沙星等藥物具有中度耐藥性，因此在臨床治療中應謹慎使用，而對頭孢吡肟、亞胺硫霉素具有較高的敏感性，因此可作為臨床經(jīng)驗用藥使用。可采用舒巴坦、頭孢哌酮等藥物抗ESBLs菌感染，IPM則可作為AmpC酶菌重癥感染治療的首選藥物［2，3］。

通過本次研究可發(fā)現(xiàn)，ESBLs和AmpC酶為腸桿菌科產(chǎn)生耐藥性的重要因素，單產(chǎn)ESBLs菌、單產(chǎn)AmpC酶菌、產(chǎn)ESBLs+AmpC酶菌對頭孢噻肟、氨曲南、阿米卡星、氨芐西林等具有較高耐藥性，因此在臨床用藥及抗感染治療中，需要重點關注，規(guī)范抗生素藥物使用，降低耐藥率從而提高臨床治療效果。

［1］周志慧.兩種檢測陰溝腸桿菌AmpC酶方法的比較.中華檢驗醫(yī)學雜志，2012，25(5):88-90.

［2］張俊峰，許現(xiàn)偉.腸桿菌科細菌ESBLs和AmpC酶檢測及耐藥性分析.中國實用醫(yī)藥，2013，8(15):143-144.

［3］徐修禮，樊新，孫怡群.耐頭孢噻肟腸桿菌科細菌 ESBLs和AmpC酶的攜帶率及耐藥性.中華微生物學和免疫學雜志，2004，24(4):267.