袁王俊，張維瑞，李 勉，李昌勤

（河南大學(xué) 中藥研究所，河南 開(kāi)封475004）

益母草為唇形科植物益母草［Leonurus artemisia（Lour.）S.Y.Hu］的新鮮或干燥地上部分。具有活血調(diào)經(jīng)、利尿消腫、清熱解毒等功效。用于月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)經(jīng)閉、惡露不盡、水腫尿少、瘡瘍腫毒［1－2］。益母草主要含有生物堿類、黃酮類、二萜類、揮發(fā)油類等化學(xué)成分，其中的藥用有效成分為生物堿，現(xiàn)已知包括水蘇堿、益母草堿等。益母草總生物堿具有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛、抗痛經(jīng)等作用。目前，文獻(xiàn)記載測(cè)定生物堿的方法有：滴定法、離子交換法、雷氏銨鹽沉淀溶解比色法、紫外分光光度法、薄層色譜法等。我國(guó)益母草資源豐富，在大部分地區(qū)都有分布。我們采用紫外分光光度法，測(cè)定了采自欒川、開(kāi)封、南陽(yáng)、方城、內(nèi)鄉(xiāng)、魯山、連云港7個(gè)地區(qū)10個(gè)批次的益母草總生物堿的含量，為益母草藥材優(yōu)選提供一定的參考。

1 藥材與儀器

1.1 藥材來(lái)源

益母草分別采自洛陽(yáng)欒川、開(kāi)封、南陽(yáng)、方城、內(nèi)鄉(xiāng)、魯山、連云港7個(gè)地區(qū)，經(jīng)河南大學(xué)中藥研究所鑒定為唇形科植物益母草［Leonuri Artemisia（Lour.）S.Y.Hu］的干燥地上部分。

1.2 儀器

WFZ-26A紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（天津光學(xué)儀器廠），KQ 5200DA型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 測(cè)定方法依據(jù)

本文采用雷氏銨鹽法進(jìn)行沉淀濃縮，紫外可見(jiàn)分光光度法進(jìn)行含量測(cè)定。即利用雷氏銨鹽在酸性介質(zhì)中可與大部分生物堿類藥物定量地生成難溶于水的鉻合物［3－4］。把生物堿的硫氰酸鉻銨鹽沉淀溶于丙酮中，所得的紫紅色溶液在波長(zhǎng)510nm處有最大吸收，可得到公式W ＝AMV／εM＝179.5，是益母草中含量較多的水蘇堿鹽酸鹽（C7H13NO2·HCl）的相對(duì)分子質(zhì)量。ε＝106.5，是硫氰酸鉻銨在丙酮中的摩爾分子吸收系數(shù)；V是溶解沉淀所取丙酮的毫升數(shù)；測(cè)其吸收度A，則可得到對(duì)應(yīng)的含量W （mg），故公式變?yōu)椋篧 ＝179.5 VA／106.5。以此公式測(cè)吸光度A，計(jì)算出益母草總生物堿的含量。

2.2 供試品溶液的制備

取益母草干燥藥材，粉碎，過(guò)60目篩。稱取不同產(chǎn)地的益母草各5.0g，加入體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇100mL，靜置過(guò)夜。用40kHz強(qiáng)度的超聲波提取40min，提取液減壓抽濾；將濾液于70℃水浴上蒸餾回收溶劑，在蒸干物中加入0.1mol／L HCl溶解，過(guò)濾。用同樣鹽酸10mL洗滌，定容于25mL容量瓶中，各吸取定容溶液12mL于錐形瓶中，加入0.1mol／L的鹽酸12mL，再緩緩滴加新鮮配制的體積分?jǐn)?shù)為2%雷氏銨鹽溶液12mL，放置冰箱過(guò)夜，減壓抽濾。用10mL冰水分次洗滌沉淀1～2次，抽干。沉淀用丙酮溶解于5mL容量瓶中定容。

2.3 樣品測(cè)定

以丙酮為空白，在最大吸收波長(zhǎng)510nm處測(cè)定吸光度，按上述方法計(jì)算含量，即得益母草中總生物堿的含量（mg／g）。結(jié)果見(jiàn)表1。

3 方法學(xué)考察

3.1 精密度試驗(yàn)

取連云港益母草粉末5.0g，連續(xù)測(cè)定5次吸光度，吸光度分別為0.3612、0.3756、0.3483、0.3827、0.3905，RSD%為4.56，表明儀器精密度良好。

3.2 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取連云港益母草供試品溶液于室溫避光放置，每隔10min測(cè)定1次吸光度，記錄供試品溶液吸收度A值。該試驗(yàn)結(jié)果表明，供試品溶液在30～60min內(nèi)穩(wěn)定性良好。因此，測(cè)定控制在30～60min。結(jié)果見(jiàn)表2。

3.3 重復(fù)性試驗(yàn)

取連云港益母草粉末5份，各5.0g，吸光度分別為1.396、1.325、1.457、1.243、1.433，RSD%為6.36，結(jié)果表明，重復(fù)性試驗(yàn)符合要求。

表1 益母草總生物堿含量結(jié)果

表2 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

4 討論

采用紫外可見(jiàn)分光光度法，測(cè)定了我國(guó)7個(gè)地區(qū)10份益母草中總生物堿的含量，結(jié)果表明，不同產(chǎn)地的益母草總生物堿含量差異很大。方城益母草總堿含量最高（13.598mg／g），連 云 港 益 母 草 總 堿 含 量 最 低（1.329mg／g）。來(lái)自欒川的3個(gè)樣品總生物堿含量基本接近（分別為1.392、1.545、1.696mg／g），而來(lái)自魯山的2個(gè)樣品總生物堿含量有較大差異，分別為3.706、7.176mg／g。由此可見(jiàn)，不同產(chǎn)地的益母草品質(zhì)有很大差異。由于試驗(yàn)所用益母草藥材均由我們統(tǒng)一采集，采集時(shí)間一致，加工、測(cè)定方法相同，而且，其有效成分生物堿又較為穩(wěn)定，我們認(rèn)為，產(chǎn)地環(huán)境是決定藥材質(zhì)量的主要原因，不同物候條件（如土壤pH、溫度、光照等）對(duì)益母草總生物堿的積累有很大的影響，其中以土壤pH為最顯著?，F(xiàn)已知，堿性土壤的北方地區(qū)比酸性土壤的南方地區(qū)益母草總生物堿的平均含量要高許多［5］。同一產(chǎn)地的不同個(gè)體間也可能存在較大的差異，這主要是由遺傳因素引起。因此，很有必要對(duì)益母草個(gè)體間差異進(jìn)行分析，從中選擇出有效成分含量高的優(yōu)良株系。

［1］中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：272－273.

［2］叢悅，王艷，謝欣梅，等.HPLC-UV法測(cè)定益母草和酒炙益母草中丁香酸和蘆丁的含量［J］.河南大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2010，40（5）：507－510.

［3］許小華，杜紹亮，楊云.益母草中總生物堿的提取及含量測(cè)定［J］.河南科學(xué)，2008，26（12）：1 481－1 482.

［4］李勉，劉廣河，王雁，等.分光光度法測(cè)定開(kāi)封培育菊花中總黃酮含量［J］.河南大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2011，30（3）：174－176.

［5］姜智蛟，李林.野生和栽培益母草中總生物堿和黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)的比較［J］.東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，37（4）：32－33.